微生物药敏纸片抗生素标准含量

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药敏纸片中药物含量标准

100
9
优立新(氨苄青/舒巴坦) (舒他西林)
10/10
10
特美汀(的卡西林/棒酸)
75/10
11
头孢氨苄(先锋IV) △
30
12
头孢唑林(先锋V) △
30
13
头孢拉定(先锋VI) △
30
14
头孢羟唑（先锋孟多）
30
15
头孢呋新（头孢呋辛钠） (西力欣)(头孢肤肟) △
30
16
头孢西丁(美福仙)
30
20/10
80
甲氧苄胺嘧啶(TMP)
5
81
恩诺沙星
5
82
氟康唑
25
83
酮康唑
15
84
伊康唑
8
85
头孢噻肟+棒酸
30/10
86
头孢他啶+棒酸
30/10
87
头孢匹胺
75
88
加替沙星
5
89
交沙霉素
15
90
呋喃唑酮
100
92
ONPG
80
93
新生霉素
5
94
杆菌肽
0.04u
95
奥普托欣(optochin)
5
96
30
24
噻吗灵(拉他头孢) (拉氧头孢钠)
30
25
舒普深(先锋必/舒巴坦)
75/75
26
头孢克肟(世福素)
5
27
丁胺卡那(阿米卡星) △
30
28
庆大霉素△10Βιβλιοθήκη 29高浓度庆大霉素
120
30
卡那霉素△
30
31

常见药物对常见细菌药敏折点的参考值

DB34/T 3399—20199附录 E（资料性附录）常见药物对常见细菌药敏折点的参考值表E.1 常用药物对气单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片药物含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--表E.2 常用药物对假单胞菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm） S≦R> S≧ R< 磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶- - 23.75/1.2517 12 甲氧苄啶 8 16 5 16 12 氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 22 18 环丙沙星 1 4 5 21 15 酰胺醇类甲砜霉素 8 16 30 18 12 氟苯尼考 8 16 30 16 12 大环内酯类红霉素 0.5 8 15 23 13 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 18 15 四环素类土霉素4 16 30 19 14 强力霉素（多西环素）4 16 30 16 12 β-内酰胺类氨苄青霉素--10--DB34/T 3399—201910表E.3 常用药物对肠杆菌科细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 2 4 23.75/1.25 16 13 甲氧苄啶 2 4 5 18 15氟喹诺酮类恩诺沙星 0.25 2 10 23 16 环丙沙星 0.25 2 5 26 20酰胺醇类甲砜霉素 4 8 30 17 17 氟苯尼考 2 8 30 19 14大环内酯类红霉素 8 32 15 14 10 氨基糖甙类新霉素 2 8 10 16 12四环素类土霉素 2 8 30 21 13 强力霉素（多西环素） 2 8 30 21 13β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 21 17 表E.4 常用药物对链球菌属细菌的药敏折点的参考值药物MIC折点（mg/L）纸片含量（μg）抑菌圈折点（mm）S≦ R> S≧ R<磺胺及增效剂磺胺甲噁唑/甲氧苄啶 1 2 23.75/1.25 18 15 甲氧苄啶 2 4 5 20 17氟喹诺酮类恩诺沙星 0.5 2 10 24 18 环丙沙星 0.5 2 5 22 18酰胺醇类甲砜霉素 2 8 30 22 18 氟苯尼考 2 8 30 24 18大环内酯类红霉素 0.5 4 15 21 18 氨基糖甙类新霉素 4 16 10 15 12四环素类土霉素 1 2 30 23 20 强力霉素（多西环素） 1 2 30 23 20β-内酰胺类氨苄青霉素 0.25 1 10 22 18_________________________________。

实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。

凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。

原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。

不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。

应用前需进行试验，灵活选择。

三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。

2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。

四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。

以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。

（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。

（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。

将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。

药敏试验判定标准

≤12 13-15 ≥16
75
≤15 16-20 ≥21
30
≤14 15-22 ≥23
-- -- ≥26
-- -- ≥31
≤25 26-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
≤23 24-27 ≥28
30
≤14 15-17 ≥18
-- -- ≥26
-- -- ≥31
30
≤14 15-19 ≥20
≤14 15-19 ≥20
头孢肤肟酯（口服）头孢肤肟（西力欣）测嗜血杆菌
测葡萄球菌
≤19 -- ≥20 测淋病奈瑟菌
测其他菌
≤13 14-17 ≥18
38
测嗜血杆菌
≤19 -- ≥20 氯碳头孢
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
拉氧头孢（噻吗灵）
纸片含量
抑菌环直径
ug/片
耐药 R 中介 I 敏感 S
抗生素
纸片含量
抑菌环直径
耐药 R 中介 I 敏感 S 针对病原菌
ug/片耐药 R 中介 I 敏感 S
氟罗沙星
5
≤15 16-18 ≥19
6 7-9 ≥10 测淋病奈瑟菌
≤27 28-32 ≥33
≤12 13-14 ≥15 左旋氧氟沙星
5
≤13 14-16 ≥17
≤13 14-17 ≥18 测肺炎链球菌
测淋病奈瑟菌
测铜绿假单胞菌测其他革兰氏阴性杆菌
≤13 14-16 ≤19 20-22
≥17 头孢美唑 ≥23 头孢哌酮（先锋必）
美洛西林
75
头孢噻肟（凯福隆）
测铜绿假单胞菌
≤15 --
≥16 测嗜血杆菌

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标1

测其他链球菌≤1718-20≥21
抗菌药物名称含量ug/片大肠杆菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌
ATCC25922ATCC25923ATCC27853
阿莫西林1019-2528-36——
舒普深（先锋必/舒巴坦）75/7528-3424-3323-29
吉他霉素（柱晶白霉素）15——22-30——
罗红霉素15——22-30——
新生霉素30≤1213-16≥17
多粘菌素B300≤88-11≥12
加替沙星5
测葡萄球菌≤1920-22≥23
测肠杆菌≤1415-17≥18
嗜血杆菌≥18敏感
头孢匹胺75≤1516-20≥21
交沙霉素15≤1314-22≥23
氟苯尼考30≤1213-17≥18
测嗜血杆菌≤2526-28≥29
测肺炎链球菌≤20--≥21
测产单核李斯特≤19--≥20
测嗜血杆菌≤1819-21≥22
测β-溶血性链球菌≤1819-25≥26
阿洛西林（Azlocillin）75
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
羧苄西林100
测铜绿假单胞菌≤1314-16≥17
测其他革兰氏阴性杆菌≤1920-22≥23
美洛西林75
测铜绿假单胞菌≤15--≥16
药敏试验纸片法的抑菌范围解释标准
杭州微生物试剂有限公司
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
β-内酰胺类
青霉素类
氨苄西林10
测肠杆菌科细菌≤1314-16≥17
测葡萄求菌≤28--≥29
测肠球菌≤16--≥17

检验科细菌耐药性监测标准操作程序SOP文件

检验科细菌耐药性监测SOP文件一、耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococci,MRS）MRS是引起临床感染的常见病原菌，同时也是引起医院感染的重要病原菌之一，其耐药特点是耐受甲氧西林的同时，还对临床广泛应用的多种抗生素呈现多重耐药，因而该菌所致感染已成为临床治疗的一大难题。

（一）MRS测定方法1、纸片扩散法接种物：直接悬液法从非选择琼脂平皿上挑取少许单个菌落至无菌生理盐水调至浓度0.5 McFarland,具体操作同常规纸片法药敏试验。

苯唑西林纸片，1R g/片，检测MRS平板应置于35℃ （而不是37℃）孵育24h （而不是16〜18h）。

结果判断：金黄色葡萄球菌：S：三13mm；I：11〜12mm；R:W10mm。

凝固酶阴性葡萄球菌：S：三18mm；R W17mm。

对于苯唑西林纸片周围的抑菌圈内有任何小菌落或稀薄“菌膜”生长都应列为MRS。

2、琼脂筛选法：如果纸片试验结果中介时，可做琼脂筛选法，培养基为MH琼脂+6R g/ml苯唑西林+4%NaCl,调整菌液浓度0.5McFarland,于35℃孵育24h,凡有任何生长即使一个菌落均报MRS。

（二）MRS监测意义对于MRS,应报告对所有头抱菌素类和其他B -内酰胺酶类耐药，喹喏酮类药物，除氟哌酸外，环丙氟哌酸，氟嗪酸有较好抗菌活性（耐药率10〜23%之间），利福平敏感率在90%以上，未见耐万古霉素菌株，但已有万古霉素中介金黄色葡萄球菌。

二、高水平耐药的肠球菌（HLAR）及耐万古霉素的肠球菌（VRE）（一）药敏测定方法1、常规测定方法：采用K-B纸片扩散法，头抱菌素不用做（均为耐药），氨苄，庆大霉素，替考拉宁，万古霉素一定要做。

2、高水平氨基糖甙类耐药性测定：⑴高含量纸片扩散法：通常测定庆大霉素和链霉素的高度耐药性，具体操作如常规纸片法药敏试验。

药敏纸片：庆大霉素：120R g/片；链霉素300p g/片结果判断：R：W6mm；I：7~9mm；S：三10mm⑵含单一高浓度抗生素琼脂平皿法：稀释法：庆大霉素：R：三500R g/ml；链霉素：R：2000p g/ml3、万古霉素耐药性测定：纸片扩散法，具体操作如常规纸片法药敏试验，万古霉素纸片为：30p g/片，检测平皿置35℃24h （而不是16〜18h）,并注意抑菌圈内有无小菌落或薄膜生长。

药敏纸片的制备

药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。

通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物, 对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。

一. 药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1 PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4 ：35.61g Na2HPO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或71.62g Na2HPO4.12H2O+1000 mL蒸馏水0.2mol/L NaH2PO4 :31.2g NaH2PO4.2H2O+1000 mL蒸馏水或27.6g NaH2PO4.H2O+1000 mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制2.2 抗菌药物原液的配制和保存期限抗菌药物溶剂浓度（ g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0 PBS 1280 3个月1周半合成青霉素类pH6.0 PBS 1280 3个月1周头孢菌素类pH7.8 PBS 1280 3个月1周氨基糖苷类pH7.8 PBS 1280 3个月4周四环素类pH4.5 PBS 12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0 PBS 12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8 PBS 12803个月2周12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用pH7.8 PBS1280长期长期氯霉素先用少量乙醇溶解，再用pH6.0 PBS12803个月1周利福平先用甲醇溶解，再用pH6.0PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B 蒸馏水12803个月1周12803个月2周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶解，再用蒸馏水1280长期长期甲氧苄氨嘧啶先用0.1mol/L乳酸溶解再用蒸馏水稀释2560长期长期各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水稀释2.2.2 配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。

微生物学检验(第3版)药物敏感试验

抗生素的种类一.目的：
四、氨基糖苷类抗生素按其来源分为：①由链霉菌属发酵滤液提取获得，有链霉素、卡那霉素、妥布霉素、核糖霉素、巴龙霉素、新霉素；②由小单胞菌属发酵滤液中提取，有庆大霉素、福提霉素；③半合成氨基糖苷类，有阿米卡星、奈替米星、地贝卡星等。
抗生素的种类一.目的：
五、喹诺酮类抗生素第一代为窄谱抗生素，有新恶酸、奈啶酸和恶喹酸。第二代为广谱类抗生素，抗菌强度依次为环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、氟咯沙星、培氟沙星、诺氟沙星。第三代为超广谱类抗生素，有司帕沙星、妥舒沙星、左氟沙星等。
纸片的名称，然后用棉试子蘸取菌液，在试管内
壁轻挤去多余菌液后均匀涂布于整个平板表面3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂一周。放置约5分钟后用镊子分别挟取所选择的药敏纸片贴上。室温放置10分钟左右，恒温箱培养24h。
验操实作
• (4)、MH平板涂布均匀，放置5分钟再贴纸片，纸片放置应该迅速准确，不得在平板上拖动纸片，纸片间的距离和位置要均匀。离平板边缘不小于15mm，两纸片间距离不小于24mm。
实验原理 1.原理：
实验操作（接种与培养）
• (1)、取待测菌平板，观察菌落形态，涂片镜检，革兰阴性杆菌做氧化酶试验，革兰阳性球菌做触决定选择何组、何种药敏纸片。
酶实验。并根据实验结果对该菌株作出初步判断，
药敏试验选择纸片
• 触酶阳性的G＋球菌：青、苯唑、克林、庆大、环
丙沙星、万古、红霉素、头孢唑林庆大、环丙沙星、万古
(一）苛养菌药敏试验抗生素的选用
A组一级试验并常规报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 , 如肺炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如肺炎链球菌用头孢呋辛。

药敏试验判定标准

测嗜血杆菌 ≤25 26-28 ≥29
测肺炎链球菌 ≤20 -- ≥21
测其他链球菌 ≤17 18-20 ≥21
克林霉素（氯洁霉素） 2 ≤14 15-20 ≥21
测链球菌 ≤15 16-18 ≥19
呋喃妥因 300 ≤14 15-16 ≥17
呋喃唑酮（痢特灵） 300 ≤14 15-16 ≥17
利福平 5 ≤16 17-19 ≥20
测淋病奈瑟菌 -- -- ≥36
依诺沙星（氟啶酸） 10 ≤14 15-17 ≥18
测淋病奈瑟菌 -- -- ≥32
氟罗沙星 5 ≤15 16-18 ≥19
测淋病奈瑟菌 ≤27 28-32 ≥33
左旋氧氟沙星 5 ≤13 14-16 ≥17
测肺炎链球菌 ≤13 14-16 ≥17
洛美沙星 18 ≤10 19-21 ≥22
和葡萄球菌 ≤11 12-14 ≥15
测嗜血杆菌 ≤19 -- ≥20
替卡西林/克拉维酸（特美汀）75/10
测铜绿假单胞菌 ≤14 -- ≥15
测其他革兰氏阴性杆菌 ≤14 15-19 ≥20
测葡萄球菌 ≤22 -- ≥23
头孢类（包括头孢菌素，头霉素，碳头孢烯类和氧头孢烯类）
头孢噻吩（先锋Ⅰ） 30 ≤14 15-17 ≥18
测嗜血杆菌 ≤25 26-28 ≥29
测淋病奈瑟菌 ≤30 31-37 ≥38
测链球菌 ≤18 19-22 ≥23
多西环素（强力霉素） 30 ≤12 13-15 ≥16
二甲胺四环素（美满霉素） 30 ≤14 15-18 ≥19
喹诺酮类
环丙沙星 5 ≤15 16-20 ≥21
测嗜血杆菌 -- -- ≥21
测嗜血杆菌 -- -- ≥26

拉氧头孢药敏纸片产品技术要求tt

拉氧头孢药敏纸片
组成：
纯棉滤纸，含拉氧头孢 30μg/片。

适用范围：本产品采用纸片扩散法（K-B法）体外检测细菌对拉氧头孢药物的敏感性。

1.1 产品规格：20片/瓶。

1.2 主要组成成分：纯棉滤纸，含拉氧头孢30μg/片。

2.1 外观
外观应满足如下要求：
2.1.1包装完整，无破损；外观应整洁，文字符号标识清晰；
2.1.2药敏纸片呈圆形，白色、边缘无缺口，表面平整，无裂痕；
2.2 纸片直径
拉氧头孢药敏纸片的直径应为：6.35mm±0.05mm。

2.3 抑菌环直径
用质控菌株进行纸片扩散法试验，95%的结果（抑菌环直径）应符合该质控菌株可接受范围(大肠杆菌ATCC 25922:28～35mm)。

注：抑菌环直径可接受范围参照CLSI M100 规定。

2.4 批内重复性
用同一批号拉氧头孢药敏纸片对质控菌株进行抑菌能力试验检测20个纸片，最大抑菌环与最小抑菌环直径之差不大于2.5mm。

2.5 批间重复性
用3个不同批号的拉氧头孢药敏纸片，对同一质控菌株进行抑菌能力试验，每个批号各检测10个纸片，同一平板上最大抑菌环与最小抑菌环直径之差的平均数不大于4mm。

2.6 稳定性
-20℃～0℃密封贮存。

有效期：12个月。

到失效期的药敏纸片进行抑菌圈直径检测，结果应符合2.3的要求。

药敏试验判定标准

测淋病奈瑟菌≤3031-37≥38
测链球菌≤1819-22≥23
多西环素（强力霉素）30≤1213-15≥16
二甲胺四环素（美满霉素）30≤1415-18≥19
喹诺酮类
环丙沙星5≤1516-20≥21
测嗜血杆菌----≥21
测淋病奈瑟菌----≥36
依诺沙星（氟啶酸）10≤1415-17≥18
测淋病奈瑟菌----≥32
替卡西林75
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测其他革兰氏阴性杆菌≤1415-19≥20
β-内酰胺类/β-内酰酶抑制剂
阿莫西林/克拉维酸20/10
测葡萄球菌≤19--≥20
测其他菌≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤19--≥20
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
氨基糖疳类
丁胺卡那（阿米卡星）30≤1415-16≥17
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
抗生素纸片含量抑菌环直径
针对病原菌ug/片耐药R中介I敏感S
庆大霉素
测肠球菌高水平耐药12067-9≥10
测其他细菌10≤1213-14≥15
卡那霉素30≤1314-17≥18
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢克肟（世福素）5≤1516-18≥19
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢美唑30≤1213-15≥16
头孢哌酮（先锋必）75≤1516-20≥21
头孢噻肟（凯福隆）30≤1415-22≥23
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31

常见药物对常见细菌药敏折点的参考值

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标

测嗜血杆菌≤1617-19≥20
头孢羟唑30≤1415-17≥18
头孢吡肟（马斯平）30≤1415-17≥18
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢克肟（世福素）5≤1516-18≥19
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
头孢美唑30≤1213-15≥16
头孢哌酮（先锋必）75≤1516-20≥21
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
苯唑西林1
测葡萄球菌≤1011-12≥13
测凝固酶阴性葡萄球菌≤17--≥18
测肺炎链球菌----≥20
青霉素10U
测葡萄球菌≤28--≥29
测肠球菌≤14--≥15
测产单核李斯特菌≤19--≥20
测淋病奈瑟菌≤2627-46≥47
测其他链球菌≤1920-27≥28
氧氟沙星（奥复星）5≤1213-15≥16
测淋病奈瑟菌----≥31
测肺炎链球菌和β-
溶血型链球菌≤1213-15≥16
氯霉素30≤1213-17≥18
测嗜血杆菌≤2526-28≥29
测肺炎链球菌≤20--≥21
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
测葡萄球菌≤17--≥18
氨苄西林/舒巴坦（优立新）10/10
测革兰氏阴性肠道菌
和葡萄球菌≤1112-14≥15
测嗜血杆菌≤19--≥20
替卡西林/克拉维酸（特美汀）75/10
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测其他链球菌----≥17
测其他革兰氏阳性球菌≤910-11≥12
杆菌肽10U≤89-12≥13

药敏试验纸片法的抑菌范围解释标

大环内酯类
阿齐霉素15≤1314-17≥18
测嗜血杆菌----≥12
测肺炎链球菌以外的
其他链球菌≤1314-17≥18
克拉霉素15≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤1011-12≥13
测链球菌≤1617-20≥21
红霉素15≤1314-22≥23
测链球菌≤1516-20≥21
麦迪霉素30≤1314-17≥18
哌拉西林/他唑巴坦（特治星）100/10
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
测葡萄球菌≤17--≥18
氨苄西林/舒巴坦（优立新）10/10
测革兰氏阴性肠道菌
和葡萄球菌≤1112-14≥15
测嗜血杆菌≤19--≥20
替卡西林/克拉维酸（特美汀）75/10
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥38
头孢三嗪（菌必治）≤1314-20≥21
测嗜血杆菌----≥26
测淋病奈瑟菌----≥31
测肺炎链球菌
以外的其他链球菌≤2525-26≥27
头孢肤肟酯（口服）30≤1415-22≥23
头孢肤肟（西力欣）30≤1415-22≥23
测嗜血杆菌≤1617-19≥20
哌拉西林钠（氧哌嗪）100
测铜绿假单胞菌≤17--≥18
测其他革兰氏阴性杆菌≤1718-20≥21
替卡西林75
测铜绿假单胞菌≤14--≥15
测其他革兰氏阴性杆菌≤1415-19≥20
β-内酰胺类/β-内酰酶抑制剂
阿莫西林/克拉维酸20/10
测葡萄球菌≤19--≥20
测其他菌≤1314-17≥18
测嗜血杆菌≤19--≥20

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性(清晰整齐)

纸片扩散法测大肠杆菌对几种抗生素的敏感性1 实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测定菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分，溶解后便不断的向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。

在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。

该抑菌圈表示药物对该种细菌的生长繁殖具有抑制作用。

通过测定抑菌圈的直径大小，可以判定药物的抑菌强弱，抑菌圈直径越大表示药物抑菌作用越强，抑菌圈直径越小表示药物抑菌作用弱，没有抑菌圈表示该药物没有抑菌作用。

并且，经稀释法测得的MIC的对数和用纸片测定相应的菌株得到的抑菌直径之间大致呈直线相关，因此将两种方法相对应地测试各种据菌株所得数据，进行统计学的相关回归分析处理，可得到一条回归线，依此可推断该菌株的MIC，两者呈负相关关系，即MIC 愈小，抑菌圈直径愈大。

2 实验材料2.1 菌液江山大农庄拉稀的猪仔肠道黏膜物中提取的大肠杆菌。

2.2药品链霉素、四环素、多粘菌素B、万古霉素、庆大霉素、红霉素、氨苄青霉素、新霉素、利福平、青霉素、菌必治、羧苄青霉素。

3 实验步骤3.1药敏纸片的准备纸片内抗菌药物含量抗生素纸片浓度U/μg/片抗生素纸片浓度U/μg /片抗生素纸片浓度U/μg /片氨苄青霉素10μg 链霉素10μg 万古霉素30μg 羧苄青霉素100μg 新霉素30μg 多粘菌素B 300U头孢菌素类30μg 庆大霉素10μg 四环素类30μg菌必治30μg 利福平5μg 红霉素15μg3.2细菌的制备从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3～5mLMH肉汤培养液中37℃培养2～8h，以待生长至轻微或中等浊度。

为保证药敏试验的准确度和精度，必须对接种菌液的浓度做相应的控制。

因此，将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度，稀释时使用无菌肉汤或生理盐水，此时菌液的浓度约为1.5×108个/L。

3.3 接种平板制备好的接种菌液必须在15min内使用。

临床微生物学检验之药敏

页眉内容临床微生物学检验一、纸片扩散法又称Kirby-Bauer(K-B)法，由于其在抗菌药物的选择上具有灵活性，且花费低廉，被WHO 推荐为定性药敏试验的基本方法，已在临床广泛使用。

（一）实验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。

抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关。

（二）培养基和抗菌药物纸片1、抗菌药物纸片选择直径为6.35mm，吸水量为20µl的专用药敏纸片，用逐片加样或侵泡方法使每片含药量达规定所示。

含药纸片密封贮存2~8℃或-20℃无霜冷冻箱内保存，β-内酰胺类药敏纸片应冷冻贮存，且不超过一周。

使用前将贮存容器移至室温平衡1~2小时，避免开启贮存容器时产生冷凝水。

2、培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton,M-H）培养基是CLSI采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基，pH为7.2~7.4，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。

琼脂厚度为4mm。

配置琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃温箱孵育15分钟，使其表面干燥。

（三）实验方法实验菌株和标准菌株接种采用直接菌落法或细菌液体生长法、用0.5麦氏比浊管标准的菌液浓度，校正浓度后的菌液应在15分钟内接种完毕。

操作步骤如下：1、接种用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂抹接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板內缘涂抹一周。

2、贴抗菌药物纸片平板置室温下干燥3~5分钟，用纸片分配器或无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距》24mm，纸片距平板內缘》15mm，纸片贴上后不可再移动，因为抗菌药物会自动扩散到培养基内。