微量凝集反应课件2012.12.10ppt
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凝集反应(免疫学检验课件)
【材料】 (1)TRUST抗原悬液 （牛心提取的类脂质） (2)被检血清。 (3)阳性对照血清；阴性对照血清 (4)试验专用卡片；专用滴管及针头
【意义】 RPR是定性试验，用于梅毒的筛选和疗效的判定。
阳性标本如有需要，也可将血清作1:2—1:32稀释后，按 上述方法做半定量试验。
注意：
1.一期梅毒：70%； 二期梅毒：100%
TPPA （梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验）
U型板（微量反应板）
TPPA是梅毒确诊试验。 TPPA在梅毒治愈后它还 是阳性的，而RPR可以 转阴或者滴度效价很低
RF因子检测（正向间接凝集）
❖ 【原理】
类风湿因子(rheumatic factor，RF)是一种 发生于类风湿病人血清中的抗人变性 IgG抗体 (IgM为主)，此种抗体可与IgG的Fc段呈特异反 应。将变性IgG致敏胶乳颗粒，与病人血清中的 RF相遇时，即可发生凝集现象。
3、O与H抗体在诊断上的意义
OHAB
诊 断 意 义（可能）
伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒
甲型副伤寒
乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
H与O抗体的性质及其消长意义
抗体 类型
O IgM 抗 体
H IgG 抗 体
❖ 【操作方法】
(1)试剂使用前，预置达室温。 (2)轻轻摇匀胶乳试剂 (3)反应板上滴加一滴未稀释血清滴(20ul) (4)然后滴加一滴胶乳试剂，并立即旋转摇动 使两者充分混匀。
(5)每次实验均应设阳性与阴性对照。 【结果观察与报告】
2分钟内出现明显而均匀的凝集颗粒者为阳 性，不凝集者为阴性。（凝集RF >20IU/mL)
5章凝集反应 Microsoft PowerPoint 演示文稿
抗原抗体在玻片上进行的反应，血型鉴定、细菌分型。
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
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1:2 1:4 1:8 1;16 1:32 1:64 1:64 1:128
临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
相应抗体
玻片法直接凝集反应示意图
(1)半定量试验-抗体效价测定。 (2)玻片凝集试验也可用试管法，如肥达外斐反应。 非特异性凝集可出现假阳性，必须做阴性对照(不加抗体， 只加抗原)。
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临床检验中早期妊娠试验，现已被金标法替代。
三、间接血凝试验 间接血凝实验是以红细胞作为载体的间接凝集实验，用已 知的抗原或抗体致敏红细胞与标本中的抗体或抗原特异性结 合。常用绵羊、家兔等红细胞。
自身红细胞凝集试验 样本：患者全血(含有红细胞，血清中有待检的抗原或抗)。 试剂：抗红细胞单克隆抗体与已知抗体连接，检测未知抗 原。例如：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
载体颗粒
抗原致敏颗粒
凝集
正向间接凝集反应原理
已知 抗原
无抗体
胶乳 颗粒
载体颗粒
抗原致敏颗粒
无凝集
无相应抗体存在时无凝集现象发生
2.反向间接凝集反应 用特异性抗体(已知)致敏载体检测未知抗原。
已知 抗体
待检 抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
凝集
反向间接凝集反应原理
已知 抗体
无抗原
载体颗粒
抗体致敏颗粒
无凝集
待检血清 (RH抗体)
不完全抗体 (RH抗体)
Rh抗原
凝集 现象
Rh＋O型红细胞
抗人球蛋白
间接接coombs试验原理示意图
直接与间接Coombs试验的区别
试验 检测目的
样本
直接 红细胞表面的
《凝集反应实验》幻灯片PPT
是指细菌、螺旋体和红细胞等颗 粒性抗原，在适当电解质参与下可直 接与相应抗体结合出现肉眼可见的凝 集。反响中的抗原称为凝集原，参与 反响的抗体称为凝集素。
二、间接凝集反响
将的可溶性抗原〔或抗体〕吸附或耦联 到与免疫无关的载体颗粒外表,形成致敏颗粒, 再与相应抗体〔或抗原〕作用,在适宜的电解 质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象， 称之。
A、正向：诊断试剂为抗原致 敏的载体颗粒及相应抗体，用 于检测标本中是否存在与致敏 抗原一样的抗原。
第一种情况：
(标本)
结果：免疫微球不凝集为阳性
第二种情况：
标本 中无 抗原
结果：免疫微球凝集为阴性
3间接凝集抑制反响
B、反向：诊断试剂为抗体致敏的 载体颗粒及相应抗原，用于检测标 本中是否存在与致敏抗体一样的抗 体。
凝集反响
是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可 溶性抗原〔或抗体〕与载体颗粒结合 成致敏颗粒后与相应抗体〔或抗原〕 发生特异性结合，在适当电解质存在 下，形成肉眼可见的凝集现象。
在免疫学技术中，凝集反响可分为 直接凝集反响和间接凝集反响两大类 。
凝集反响的类型 一、直接凝集反响(direct agglutination)
非特异性类脂抗体测定
1、性病研究实验室试验〔VDRL〕 2、不加热血清反响素试验〔USR〕 3、快速血浆反响素试验 〔RPR〕 4、甲苯胺红试验〔TRUST〕
特异性梅毒血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗 原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其 敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试 验，但不能用作疗效观察的指标。
• 梅毒快速血浆反响素试验 • Rapid Plasma Reagin 〔RPR〕 • RPR试验
二、间接凝集反响
将的可溶性抗原〔或抗体〕吸附或耦联 到与免疫无关的载体颗粒外表,形成致敏颗粒, 再与相应抗体〔或抗原〕作用,在适宜的电解 质存在的条件下，出现肉眼所见的凝集现象， 称之。
A、正向：诊断试剂为抗原致 敏的载体颗粒及相应抗体，用 于检测标本中是否存在与致敏 抗原一样的抗原。
第一种情况：
(标本)
结果：免疫微球不凝集为阳性
第二种情况：
标本 中无 抗原
结果：免疫微球凝集为阴性
3间接凝集抑制反响
B、反向：诊断试剂为抗体致敏的 载体颗粒及相应抗原，用于检测标 本中是否存在与致敏抗体一样的抗 体。
凝集反响
是指颗粒性抗原(红细胞、细菌等)或可 溶性抗原〔或抗体〕与载体颗粒结合 成致敏颗粒后与相应抗体〔或抗原〕 发生特异性结合，在适当电解质存在 下，形成肉眼可见的凝集现象。
在免疫学技术中，凝集反响可分为 直接凝集反响和间接凝集反响两大类 。
凝集反响的类型 一、直接凝集反响(direct agglutination)
非特异性类脂抗体测定
1、性病研究实验室试验〔VDRL〕 2、不加热血清反响素试验〔USR〕 3、快速血浆反响素试验 〔RPR〕 4、甲苯胺红试验〔TRUST〕
特异性梅毒血清学试验
梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗 原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，其 敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试 验，但不能用作疗效观察的指标。
• 梅毒快速血浆反响素试验 • Rapid Plasma Reagin 〔RPR〕 • RPR试验
凝集反应和沉淀反应 PPT
以பைடு நூலகம்盐缓冲液为反应介质的抗原抗体特异 性结合的沉淀试验。
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
环状沉淀 絮状沉淀 免疫浊度测定
絮状沉淀试验(flocculation)
【原理】将抗原溶液与相应抗体溶液混合,在 电解质存在的条件下,抗原与抗体结合出现可 见的絮状沉淀。
【应用】测定抗原抗体反应的最适比。
【方法】 1、抗原稀释法:抗原最适比例 2、抗体稀释法:抗体最适比例 3、方阵滴定法:抗原抗体最适比例
logC/d ＝K
Mancini曲线
Fahey曲线
T1为16～24h；T2为24～48h；T3为 48h以上,可见T3为直线，T1为反抛物 线
t1为 16～ 24h；t2为24～48h；t3为 48h以上,可见t1为直线，t3为反抛物线
已知含量的Ag标 准品
Fahey曲线的绘制
Fahey曲线,使用半 对数纸画曲线,浓 度的对数与沉淀环
(2)试管凝集试验 半定量试验
在微生物学检验中常用已知细菌 作为抗原液与一系列稀释的受检血清 混合,保温后观察每管内抗原凝集程 度,通常以产生明显凝集现象的最高 稀释度作为血清中抗体的效价,亦称 为滴度。
(2)试管凝集试验 半定量试验
方法: 1)倍比稀释待检血清:
0、5ml 0、5ml 0、5ml
• 沉淀线偏向抗原孔一方, 表示抗体浓度＞抗原,反 之,则是抗体浓度＜抗原 浓度。
【 CIEP方法评价】
(1)简便、快速、敏感度较双扩提高8～16倍,可测蛋 白质浓度达 ug/ml。
(2)要求抗原、抗体比例严格,尽估计使用高效价免疫 血清,必要时对待检样品采纳不同稀释度
(3)不适宜抗原抗体都是球蛋白的检测 。 (4)由于电渗的缘故,目前已不推荐使用。
抗球蛋白参与的间接血凝试验 (Coombs试验)
医学免疫学检验-凝集反应PPT优选课件
凝集反应
第一课件网网站
2020/10/18
1
一、凝集反应的概念及特点
定义：细菌，螺旋体，红细胞等颗粒性 抗 原,或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合 成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异结合，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应 （agglutination)。 反应的两个阶段：1）抗原抗体的特异性结合 阶段，2）出现肉眼可见的凝集现象。
直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
间接Coombs试验 检测游离在血清中的不完全抗体
2020/10/18
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2020/10/18
13
2020/10/18
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2020/10/18
2
2020/10/18
3
特点：抗原抗体反应既可以在体内作为 体液免疫应答的效应机制自然发生，也 可以在体外作为免疫学试验的结果而出 现，体外实验的抗原抗体反应称为血清 学反应（serological reaction).
2020/10/18
4
二.直接凝集反应
定义：细菌、红细胞等颗粒性抗原在适量电解 质的参与下，直接与相应抗体结合，出现肉眼 可见的凝集现象，该反应中的抗原称为凝集原 （agglutinatinogen)，抗体称为凝集素 （ agglutinin)。 一）玻片凝集试验（ABO血型鉴定）；二） 试管凝集试验（肥达试验）。
缘皱缩成花边状
2020/10/18
9
自身红细胞凝集试验
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2020/10/18
1
一、凝集反应的概念及特点
定义：细菌，螺旋体，红细胞等颗粒性 抗 原,或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合 成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原） 发生特异结合，在适当电解质存在下，形成 肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应 （agglutination)。 反应的两个阶段：1）抗原抗体的特异性结合 阶段，2）出现肉眼可见的凝集现象。
直接Coombs试验 检测红细胞上的不完全抗体
间接Coombs试验 检测游离在血清中的不完全抗体
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特点：抗原抗体反应既可以在体内作为 体液免疫应答的效应机制自然发生，也 可以在体外作为免疫学试验的结果而出 现，体外实验的抗原抗体反应称为血清 学反应（serological reaction).
2020/10/18
4
二.直接凝集反应
定义：细菌、红细胞等颗粒性抗原在适量电解 质的参与下，直接与相应抗体结合，出现肉眼 可见的凝集现象，该反应中的抗原称为凝集原 （agglutinatinogen)，抗体称为凝集素 （ agglutinin)。 一）玻片凝集试验（ABO血型鉴定）；二） 试管凝集试验（肥达试验）。
缘皱缩成花边状
2020/10/18
9
自身红细胞凝集试验
《凝集反应》课件
特性
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
抗原抗体反应具有特异性、可逆 性、比例性、阶段性等特点。
凝集反应的类型
直接凝集反应
间接凝集抑制反应
颗粒状抗原与相应抗体直接结合出现 的凝集现象。如玻片凝集试验、试管 凝集试验等。
在间接凝集反应的基础上，加入特异 性抗体，使原有的间接凝集现象受到 抑制。常用于测定激素、抗原等小分 子物质。
间接凝集反应
纳米技术
纳米技术与凝集反应的结合可以实现更精细的样本处理和检 测。纳米材料具有优异的物理化学性质，可以改善凝集反应 的条件和效果，为凝集反应的发展提供新的思路和方向。
THANKS
感谢您的观看
在最适pH值下，凝集反应的速 率和程度可能达到最大值。
pH值的改变可能影响分子的构 象和稳定性，从而影响凝集反 应的进行。
Part
04
凝集反应的实验操作与演示
实验前的准备
实验材料
试管、滴管、抗A血清、抗B血清、A型血、B型血、O型血等。
实验设备
显微镜、离心机、恒温水浴箱等。
实验试剂
生理盐水、洗涤液等。
细菌凝集试验可用于鉴定细菌种类、检测抗体水平以及诊断某些传染病 。
常见的细菌凝集试验包括伤寒沙门氏菌的肥达试验和副伤寒甲、乙的副 伤寒沙门氏菌的肥达试验等。
病毒凝集反应的实例
病毒凝集反应是指病毒颗粒与细胞表面 受体结合后，引起细胞聚集的现象。
病毒凝集反应可用于病毒的分离和鉴定 ，例如流感病毒的分离和鉴定。
准确性。
凝集反应的热力学
热力学研究反应的平衡常数、能 量变化和熵变等性质，对于理解 凝集反应的机理和性质非常重要
。
热力学参数如焓变、熵变和吉布 斯自由能变等可以描述反应的能
量变化和平衡状态。
凝集反应课件
实验原理
标准抗A血清
含抗Ａ凝集素 使Ａ型、AB型红细胞的凝集原凝集
标准抗B血清
含抗Ｂ凝集素 使Ｂ型、AB型红细胞的凝集原凝集
实验步骤
1、标记玻片：取洁净玻片一张，用笔在 玻片两端分别标明 A B
2、滴加血请：在玻片A B两端分别滴加标 准抗A 和抗B血清各一滴。
A
B
抗A抗体
抗B抗体
3、消毒取血
方法评价:
定性试验 简便和快速 敏感度低
临床应用:
菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定
试管凝集试验
定量抗原（已知） +
系列稀释抗体 （待检血清）
不同程度的凝集反应（阳性）
确定抗体的滴度(凝集效价)
1. 实验材料：
伤寒杆菌O菌液、 待测血清、生理盐水
2. 方法：
1
② 待测血清
0.1
① 生理盐水 00.5.9ml
待检尿 若出现白色细小凝集为妊娠诊断试验阴性 若呈均匀浑浊乳状液为妊娠诊断试验阳性。
间接凝集试验
反应类型
正向间接 凝集
反向间接 凝集
间接凝集 抑制
反应环节
可溶性抗原-载体
+
抗体
抗体-载体 +
可溶性抗原
可溶性抗原 +
抗体 +
可溶性抗原-载体
反应结果 凝集 凝集 不凝集
应用 测定抗体 测定抗原 测定抗原
(ml)
③ 伤寒杆菌
O菌液
0.5ml
2
0.5 00.5.5ml
0.5ml
3
0.5 00.5.5ml
0.5ml
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0.5 00.5.5ml
0.5ml
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微量凝集反应
林英 生物技术学院 2012.，只有出现可见的反应，如凝集、 溶血、沉淀实验等，或用荧光素、酶、放射性同位 素等标记方法提高可测性，才便于在免疫检测中运 用。可见反应的出现，对抗原抗体分子合适比例的 要求远比对彼此绝对量方面要高得多。这就是说， 一方面在进行免疫检测时要注意抗原抗体的用量； 另一方面只要提高可见度或可测性，便可大大提高 免疫检测方法的灵敏度。
【方法】
1. 用记号笔在干净的载玻片上均分三格并标明1、2、 3。
2. 用移液枪吸取枯草芽孢杆菌抗兔血清于1、2格 内各加一滴，第3格加一滴生理盐水。
3. 用接种环以无菌手续自枯草芽孢杆菌琼脂平板上挑 取少许菌株置第1和第3格内，搅匀。同法取待检血液置 于第2格内，混匀（操作过程中应注意接种环灭菌）。
4. 轻轻摇动玻片，1～2分钟后观察玻片凝集现象，记 录结果。观察完毕，将玻片置于盛有消毒液的容器中消 毒。
菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原 与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血 清中有无相应抗体，根据抗体含量的多少以 及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。
凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应 出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细 菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定 条件下出现凝集。凝集反应中抗原称为凝 集原，抗体称为凝集素。
试管凝集实验
原理：
大分子颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与其相应的抗体 相结合，在适量的电解质存在及一定的温度下，经过一定 的时间可出现肉眼可见的凝集团块，是为凝集反应。 试管凝集实验的应用，一般均以标准抗原（已知抗原） 测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。
1、 材料和试剂
枯草芽孢杆菌平板培养物、枯草芽孢杆 菌抗兔血清、家兔血清、消毒液、无菌生 理盐水。 2、器材 载玻片、接种环、盛消毒液的容器、记号 笔、酒精灯、TIP头、微量移液抢、载玻片、 45℃恒温培养箱等。
抗体效价的测定
效价测定：用免疫动物时的抗原浓度作抗 体效价测定的抗原浓度。以出现沉淀反应 的抗血清的最大稀释倍数来表示抗血清的 效价。
据抗原性质不同，可采取不同抗体效价测 定方法。 颗粒性抗原可采用凝集试验。 可溶性抗原常用免疫双扩散法。
肥达试验（Widal test）是用已知的伤寒杆
林英 生物技术学院 2012.，只有出现可见的反应，如凝集、 溶血、沉淀实验等，或用荧光素、酶、放射性同位 素等标记方法提高可测性，才便于在免疫检测中运 用。可见反应的出现，对抗原抗体分子合适比例的 要求远比对彼此绝对量方面要高得多。这就是说， 一方面在进行免疫检测时要注意抗原抗体的用量； 另一方面只要提高可见度或可测性，便可大大提高 免疫检测方法的灵敏度。
【方法】
1. 用记号笔在干净的载玻片上均分三格并标明1、2、 3。
2. 用移液枪吸取枯草芽孢杆菌抗兔血清于1、2格 内各加一滴，第3格加一滴生理盐水。
3. 用接种环以无菌手续自枯草芽孢杆菌琼脂平板上挑 取少许菌株置第1和第3格内，搅匀。同法取待检血液置 于第2格内，混匀（操作过程中应注意接种环灭菌）。
4. 轻轻摇动玻片，1～2分钟后观察玻片凝集现象，记 录结果。观察完毕，将玻片置于盛有消毒液的容器中消 毒。
菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原 与病人血清做定量凝集试验，以测定患者血 清中有无相应抗体，根据抗体含量的多少以 及增长情况，可帮助诊断伤寒及副伤寒。
凝集反应
凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应 出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细 菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定 条件下出现凝集。凝集反应中抗原称为凝 集原，抗体称为凝集素。
试管凝集实验
原理：
大分子颗粒性抗原（如细菌、红细胞等）与其相应的抗体 相结合，在适量的电解质存在及一定的温度下，经过一定 的时间可出现肉眼可见的凝集团块，是为凝集反应。 试管凝集实验的应用，一般均以标准抗原（已知抗原） 测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。
1、 材料和试剂
枯草芽孢杆菌平板培养物、枯草芽孢杆 菌抗兔血清、家兔血清、消毒液、无菌生 理盐水。 2、器材 载玻片、接种环、盛消毒液的容器、记号 笔、酒精灯、TIP头、微量移液抢、载玻片、 45℃恒温培养箱等。
抗体效价的测定
效价测定：用免疫动物时的抗原浓度作抗 体效价测定的抗原浓度。以出现沉淀反应 的抗血清的最大稀释倍数来表示抗血清的 效价。
据抗原性质不同，可采取不同抗体效价测 定方法。 颗粒性抗原可采用凝集试验。 可溶性抗原常用免疫双扩散法。
肥达试验（Widal test）是用已知的伤寒杆