诺如病毒实验室检测
诺如病毒感染诊断治疗和防控考核试题
诺如病毒感染诊断治疗和防控考核试题1、诺如病毒感染的传播途径包括?（）多选题A、人传人(正确答案)B、食源性传播(正确答案)C、经水传播(正确答案)2、诺如病毒感染临床表现包括?（）多选题A、发病突然(正确答案)B、恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻(正确答案)C、头痛、寒颤和肌肉痛(正确答案)D、脱水(正确答案)3、诺如病毒感染临床类型包括? （）多选题A、轻症(正确答案)B、重症(正确答案)C、隐性感染(正确答案)4、老年人诺如病毒感染特点包括？（）多选题A、易重症(正确答案)B、病程更长(正确答案)C、排毒时间长(正确答案)5、诺如病毒感染的实验室检测方法包括？（）多选题A、核酸检测(正确答案)B、抗原检测(正确答案)C、血常规检测6、诺如病毒感染的重点是预防___、___、___等聚集性疫情。
（）多选题A、托幼机构(正确答案)B、学校(正确答案)C、养老机构(正确答案)7、预防诺如病毒感染的关键是？（）多选题A、个人卫生(正确答案)B、食品卫生(正确答案)C、饮水卫生(正确答案)8、诺如病毒在环境中十分稳定，酒精和速干手消液无灭活效果。
（）判断题 [单选题]A、对(正确答案)B、错9、诺如病毒感染以后要注意补充水分，保持电解质平衡，如果有严重的呕吐、腹泻，有脱水的风险要及时就医。
（）判断题 [单选题]A、对(正确答案)B、错10、化学消毒剂是阻断诺如病毒通过被污染的环境或物品表面传播的主要方法之一，最常用含氯消毒剂。
（）判断题 [单选题]A、对(正确答案)B、错11、酒精和免冲洗手消液对诺如病毒没有灭活效果，可用过氧化氢消毒湿巾。
（）判断题 [单选题]A、对(正确答案)12、对贝类水产品不用深度加工。
（）判断题 [单选题]A、对B、错(正确答案)13、诺如病毒感染聚集性疫情：3天内同一场所，发生___例及以上有流行病学关联的腹泻临床诊断病例，其中至少2例是实验室确诊病例。
（）单选题 [单选题]A、5(正确答案)B、4C、314、诺如病毒感染暴发疫情：7天内同一场所，发生___例及以上有流行病学关联的腹泻临床诊断病例，其中至少2例是实验室确诊病例。
一起度假村诺如病毒感染性腹泻暴发调查与实验室检测分析
一起度假村诺如病毒感染性腹泻暴发调查与实验室检测分析程德俊，罗大林（安徽省六安市舒城县疾病预防控制中心，安徽六安 231300）摘 要：目的：对发生在某度假村的感染性腹泻疫情进行调查分析，查明原因，制定防控策略，控制疫情蔓延。
方法：采用现场流行病学调查和实验室检测二者结合分析，查找引起感染性腹泻的致病因子。
结果：本次疫情共搜索发现确诊病例和疑似病例42例，病例临床症状主要表现为发热、呕吐、腹泻。
其中发热为26人，占比61.90%；有呕吐症状为22人，占比58.38%；出现腹泻症状的人数较多，为35人，占比83.33%。
对其中17例病例进行肛拭子采样，分别采用荧光PCR检测核酸和细菌学培养检测，最终在14例肛拭子标本中检测出诺如病毒GⅡ型。
结论：根据病例的临床症状、流行病学调查分析和实验室检测结果判定引起此次小木屋度假村暴发感染性腹泻疫情的病原微生物为诺如病毒GⅡ型。
关键词：感染性腹泻；诺如病毒；流行病学调查；实验室检测Investigation and Laboratory Analysis of an Outbreak of Norovirus Infectious Diarrhea in a ResortCHENG Dejun, LUO Dalin(Shucheng County Center for Disease Control and Prevention, Lu’an 231300, China) Abstract: Objective: To investigate and analyze the infectious diarrhea epidemic in a resort, identify the causes, formulate prevention and control strategies, and control the spread of the epidemic. Method: Field epidemiological investigation and laboratory sampling were used to find the pathogenic factors causing infectious diarrhea. Result: A total of 42 confirmed and suspected cases have been identified, with the main clinical symptoms including fever, vomiting and diarrhea. Among them, 26 (61.90%) were febrile. 22 patients (58.38%) had vomiting symptoms. The number of people with diarrhea symptoms was more, 35 people, accounting for 83.33%. Field anal swabs were collected from 17 cases, nucleic acid detection by fluorescent PCR and bacteriological culture detection by bacterial culture. Finally, norovirus GⅡ type was detected in 14 cases. Conclusion: According to the clinical symptoms, epidemiological investigation and laboratory test results, the pathogenic microorganism causing the outbreak of infectious diarrhea in the chalet resort was norovirus type GⅡ.Keywords: infectious diarrhea; norovirus; epidemiological investigation; laboratory test感染性腹泻是指由病毒、细菌或寄生虫等病原微生物引起的胃肠道感染，临床症状主要表现为腹痛、腹泻、呕吐和发热等[1]。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
一、实时荧光定量PCR法。
实时荧光定量PCR法是一种高灵敏度、高特异性的诺如病毒检测方法。
该方法利用PCR技术检测样本中的诺如病毒RNA，通过实时荧光信号来定量检测病毒载量。
实时荧光定量PCR法能够在短时间内准确检测出诺如病毒，是目前常用的检测方法之一。
然而，该方法需要昂贵的设备和专业的操作技能，不适合于一般的实验室条件。
二、免疫层析法。
免疫层析法是一种简便快速的诺如病毒检测方法。
该方法利用特异性抗体与诺如病毒抗原结合，形成免疫复合物，通过色素或荧光信号来检测病毒的存在。
免疫层析法操作简单，无需昂贵的设备，适合于基层医疗单位和野外应急检测。
然而，免疫层析法的灵敏度和特异性较PCR法稍逊，可能存在假阳性或假阴性结果。
三、电子显微镜法。
电子显微镜法是一种直接观察诺如病毒颗粒的检测方法。
该方法通过对样本进行浓缩和纯化处理，然后利用电子显微镜观察样品中的病毒颗粒。
电子显微镜法能够直接看到诺如病毒的形态特征，具有极高的特异性。
然而，该方法需要昂贵的设备和专业的操作技能，且不能进行病毒载量的定量分析，因此在实际应用中较少使用。
综上所述，针对诺如病毒的检测，实时荧光定量PCR法具有高灵敏度和高特异性的优势，但需要昂贵的设备和专业的操作技能；免疫层析法操作简单，适合基层医疗单位和野外应急检测，但灵敏度和特异性较PCR法稍逊；电子显微镜法具有极高的特异性，但设备昂贵且不能进行定量分析。
在实际应用中，应根据实际情况选择合适的检测方法，以确保诺如病毒的及时检测和有效控制。
诺如病毒感染性腹泻样品采集与检测
样品到达实验室后，应立即进行检测，避 免样品长时间保存导致检测结果不准确。
2
检测技术
实时荧光定 量PCR技术： 快速、准确、
灵敏度高
酶联免疫吸 附试验：操 作简便、成 本低、灵敏
度高
核酸杂交技 术：特异性 强、灵敏度 高、操作简
消毒方法：使用含氯消毒 剂、紫外线消毒等
消毒频率：根据疫情严重 程度和消毒效果调整
注意事项：避免消毒剂残 留，做好个人防护
结果分析
01
检测结果：阳性、阴性、可 疑
03
阴性结果：表明样品中不存 在诺如病毒
02
阳性结果：表明样品中存在 诺如病毒
04
可疑结果：需要进一步检测 以确定是否存在诺如病毒
3
个人卫生
1
勤洗手：饭前 便后、接触公 共物品后要洗
手
2
保持社交距离： 避免密集场所， 保持社交距离
3
佩戴口罩：在 公共场所佩戴 口罩，防止飞
沫传播
4
加强锻炼：增 强体质，提高
免疫力
食品卫生
保持食品清洁： 避免食物受到
污染，防止细 1
菌滋生
保持厨房卫生： 4
保持厨房清洁， 定期消毒，防 止细菌滋生
生熟分开：生 熟食品分开处
2 理，避免交叉
污染
3 彻底煮熟：食
物要彻底煮熟， 避免细菌残留
环境消毒
消毒范围：患者接触过的 物品、环境、衣物等
采集方法
01
采集时间：发病后24小时内
02Leabharlann 采集部位：粪便、呕吐物、肛拭子等03
采集工具：无菌棉签、无菌容器等
诺如病毒实验室技术培训
去除重复、无效和不完 整数据，确保数据准确 性和一致性。
数据格式化
统一数据格式和单位， 便于后续数据处理和分 析。
数据归类
按照实验目的和要求， 对数据进行合理分类和 归档。
数据统计分析和可视化展示技巧分享
描述性统计
计算数据的均值、标准差、最大值和最小值等指标，了解数据分布 情况。
相关性分析
个人防护装备
实验人员应佩戴合适的防 护装备，如实验服、手套 、口罩和护目镜等，确保 个人安全。
安全设施配备
实验室内应配备生物安全 柜、通风橱、洗眼器等设 施，降低安全风险。
实验室安全操作规程
实验前准备
实验人员应了解实验原理、目的 和操作步骤，做好实验前准备工
作，确保实验顺利进行。
实验操作规范
实验人员应按照规定的操作步骤进 行实验，避免误操作导致安全事故 发生。
和腹痛等。
感染者还可能出现发热、头痛、 乏力等全身症状，严重时可能导 致脱水、电解质紊乱等并发症。
诺如病毒感染在幼儿、老年人和 免疫力较低的人群中危害更为严
重，可引起重症甚至死亡。
02
实验室安全规范
实验室安全防护措施
实验室分区管理
明确实验室各区域功能， 设立清洁区、半污染区和 污染区，并标识清晰。
RT-PCR操作步骤
包括RNA提取、逆转录、PCR扩增、产物检测等 步骤。
3
RT-PCR操作注意事项
确保RNA质量、逆转录效率和PCR扩增的特异性 等。
结果判读标准与报告出具流程
结果判读标准
根据RT-PCR产物检测结果，制定相 应的判读标准，如CT值、扩增曲线 等。
报告出具流程
包括结果整理、报告撰写、审核签发 等环节，确保报告的准确性和规范性 。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法诺如病毒（Norovirus）是一种引起胃肠道感染的病毒，常见于人群中，尤其是在集体生活环境中易发生暴发性感染。
因其高传染性和易造成集体感染的特点，对诺如病毒的检测尤为重要。
本文将介绍诺如病毒检测的方法及相关注意事项。
首先，诺如病毒的检测主要通过实验室检测和临床症状判断两种方式。
实验室检测主要包括病毒核酸检测和抗原检测。
病毒核酸检测是通过提取患者的样本，如粪便或呕吐物，然后进行核酸提取和PCR扩增检测来确定是否存在诺如病毒的核酸。
而抗原检测则是通过检测患者样本中的诺如病毒抗原来进行诊断。
这两种实验室检测方法都需要在专业实验室条件下进行，确保检测结果的准确性和可靠性。
其次，临床症状判断是通过患者的临床表现来初步判断是否感染了诺如病毒。
诺如病毒感染的症状主要包括呕吐、腹泻、腹痛、发热等，临床医生可以通过观察患者的症状来初步判断是否感染了诺如病毒。
但需要注意的是，临床症状判断并不具备确诊的功能，仍需通过实验室检测来确定诊断结果。
除了以上介绍的检测方法外，诺如病毒的检测还需要注意以下几点。
首先，在进行实验室检测时，需要严格按照操作规程来进行，避免交叉污染和假阳性结果的产生。
其次，在临床症状判断时，需要结合患者的流行病学史和暴露史来进行综合分析，以提高诊断的准确性。
最后，对于诺如病毒的检测结果，应及时报告并采取相应的隔离和治疗措施，以防止病毒的传播和扩散。
综上所述，诺如病毒的检测方法主要包括实验室检测和临床症状判断两种方式。
在进行检测时，需要严格按照操作规程来进行，并结合患者的流行病学史和暴露史进行综合分析，以提高诊断的准确性。
对于检测结果，应及时报告并采取相应的隔离和治疗措施，以防止病毒的传播和扩散。
希望本文能够对诺如病毒的检测方法有所帮助。
2024年诺如病毒
诺如病毒诺如病毒：一种常见的肠道病毒及其防控措施一、引言诺如病毒（Norovirus，NV），又称诺如病毒感染，是一种引起急性胃肠炎的常见肠道病毒。
它主要通过粪-口途径传播，具有高度传染性，尤其在密闭、拥挤的环境中，如学校、医院、养老院、幼儿园等。
为了有效预防和控制诺如病毒感染，本文将详细介绍诺如病毒的病原学、流行病学、临床表现、诊断、治疗和预防措施。
二、病原学诺如病毒属于杯状病毒科，是一种单链RNA病毒。
病毒粒子呈球形，直径约为38-40纳米。
根据遗传和抗原性的不同，诺如病毒可分为多个基因型，其中GⅠ、GⅡ、GⅣ和GⅤ基因型感染人类。
病毒对理化因素的抵抗力较强，能在环境中存活较长时间，但热敏感，100℃加热5分钟可灭活。
三、流行病学诺如病毒感染呈全球性分布，全年均可发生，但以冬季和早春季节为主。
各年龄人群均可感染，但以儿童和老年人感染率较高。
病毒在感染者和健康者之间通过粪-口途径传播，也可通过接触被病毒污染的物体表面、食物和水传播。
诺如病毒还可能通过空气气溶胶传播。
四、临床表现诺如病毒感染潜伏期短，一般为12-48小时。
主要表现为急性起病，出现恶心、呕吐、腹泻、腹痛、发热等症状。
病程多为自限性，一般在1-3天内自愈。
但部分患者，尤其是儿童、老年人和免疫抑制者，可能出现严重脱水、电解质紊乱、休克等并发症，甚至危及生命。
五、诊断诺如病毒感染的诊断主要依据临床表现、流行病学史和实验室检查。
实验室检查主要包括病毒核酸检测、抗原检测和血清学检测。
其中，病毒核酸检测具有高敏感性和特异性，是诊断诺如病毒感染的首选方法。
六、治疗目前尚无特效抗病毒药物用于治疗诺如病毒感染。
治疗主要以对症支持治疗为主，包括补液、纠正电解质紊乱、维持酸碱平衡等。
严重脱水、休克的患者应及时给予静脉补液。
对于出现并发症的患者，应给予相应的治疗。
七、预防措施1.加强个人卫生：勤洗手，尤其在便后、饭前、接触污染物后；避免食用生食、半生食的水产品；注意食品卫生，避免食用被病毒污染的食物。
诺如病毒标本处理和实验室检测技术方案PPT课件
• 1.2.1 设备和材料
• DEPC 水、新配制次氯酸盐（至少1%）或等效消毒剂、
MilliporeHA filter（孔径0.45um、）、换膜过滤器、真空
泵、计时器、PH 值酸度计、磁力搅拌器及转子、低温冰
箱（-20℃、-70℃）、Microsep 100K columns（PALL
公司）、Centriprep YM-50（Millipore 公司）、洗脱液
9
1 标本前处理
• 1.2.2.2 水样品的过滤
• （1）向玻璃漏斗里倒水样，当水样完全滤过立刻 关闭真空泵。
• （2）用不锈钢的滤器夹，小心移开滤膜上的刻度 漏斗。
• 1.2.2.3 用酸漂洗滤膜
• 将膜用无菌的镊子夹放在有200ml 0.05mM H膜2去SO除4（Mgp2H+3。.0）的无菌500ml 烧杯中进行漂洗滤
5
1 标本前处理
离心5 分钟，使得固体沉淀。澄清上清液可以直 接用于病毒核酸提取或贮存于-70℃。 • （3）取澄清的上清液200ul 进行RNA 提取。
6
1 标本前处理
• 1.2 水
• 通过阴离子滤膜过滤水样品。用牛肉膏（1.5%w/v）含 0.05M 甘氨酸（pH9.0）缓冲液洗脱附在膜上的病毒。使 用Microsep 100TM 或CentriconTM columns 离心管进一 步浓缩便、呕吐物
1.2 水
1.3 环境涂抹样
1.4 食品
1.4.1贝类
1.4.2三文鱼
1.4.3草莓、蓝莓
1.4.4生菜和苗芽菜
4
1 标本前处理
• 1.1 粪便、呕吐物 • 1.1.1 设备和材料
微量移液器、无菌过滤器、漩涡振荡器、微量离 心机、1.5ml 无菌离心管、磷酸盐缓冲盐溶液 （PBS）10mM pH7.0-7.4。 • 1.1.2 操作方法 • （1）离心管每管分装0.5mlPBS。用一次性移液 管（或无菌棒）添加豌豆大小的粪便（约0.1 克），稀释成约10％至20％（重量/体积）的粪 便悬浮液。当粪便样品是液态时，不必在PBS 中稀释，直接使用500ul 的样品。 • （2）漩涡振荡每个样品1 分钟。在5000 rpm 下
诺如病毒急性胃肠炎暴发的实验室检测
诺如病毒急性胃肠炎暴发的实验室检测确定一起学校急性胃肠炎暴发原因。
方法采集病例粪便标本，直饮水标本，采用实时荧光定量（Real-time ）PCR和RT-PCR方法检测病毒核酸，阳性标本测序分析。
结果5份粪便标本中3份呈诺如病毒阳性，2份直饮水标本均呈诺如病毒阳性。
3份病例粪便标本病毒株核苷酸序列一致，均为GⅡ-4型，提示病毒同源。
结论对诺如病毒进行核酸检测，证实该疫情为一起诺如病毒GⅡ-4型引起的急性胃肠炎暴发。
诺如病毒（NoV）被认为是目前引起急性病毒性胃肠炎暴发的重要原因之一，常在医院、餐馆、学校、托儿所、孤儿院、养老院、军队、家庭及其他人群中引起急性胃肠炎的暴发[1]。
近年在我国由该病毒引起的急性胃肠炎暴发的报道越来越多[2-6]。
广州市某中学于2009-12发生一起急性胃肠炎疫情，病例的主要临床症状表现为呕吐伴恶心、腹痛、腹泻等胃肠道症状，个别病例还伴有发热症状。
应用实时荧光定量（real-time）PCR和常规RT-PCR对该起疫情进行诺如病毒核酸检测，证实该起疫情是由诺如病毒GⅡ型引起的，结果报告如下。
1 对象与方法1.1 基本情况该校共有学生1515人，教职员工123人，只设立高中部，全校有3个年级，共32个班级。
学生以住宿生为主，共有宿舍120间，住宿学生1200人。
该校设有1个饭堂，提供校内学生及教职员工午、晚餐，该饭堂为B级单位，功能区域设置较为合理，饭堂共有16名员工，均已领取健康证。
1.2疫情流行病学特征首发病例为女性，于2009-12-22出现恶心、呕吐及上腹部不适感，呕吐为非喷射性，呕吐物为胃内容物，无发热、腹泻及呼吸、循环系统症状，之后高三级其他班级又陆续出现多名腹泻病例，12月25日后无新增病例。
该校共出现呕吐、腹泻病例55例，均为学生病例，罹患率为（55/1638）3.36%。
发病高峰为12月23 -24日，期间共发生病例47例，占发病总数的85.45%。
病例主要集中在高三年级，共发生病例53例，占发病总数的96.4%，呈现出一定的区域聚集性.该起疫情腹泻病人发病年龄集中在17~18岁,男性27例，罹患率为3.17%，女性28例，罹患率为3.57%。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法诺如病毒（Norovirus）是一种引起急性胃肠炎的病毒，也被称为“冬季呕吐病毒”。
诺如病毒感染主要通过食物、水源或空气传播，是一种非常具有传染性的病毒。
因此，及时准确地检测诺如病毒感染对于防控疫情至关重要。
目前，诺如病毒的检测方法主要包括基因检测法、抗体检测法和病毒培养法。
其中，基因检测法是目前应用最为广泛的一种方法。
基因检测法利用PCR技术，通过检测诺如病毒的基因组序列来确认感染情况。
这种方法具有高灵敏度和特异性，能够快速准确地检测出诺如病毒的存在。
另一种常用的检测方法是抗体检测法。
抗体检测法通过检测人体对诺如病毒产生的抗体来确认感染情况。
这种方法需要采集患者的血样，通过实验室检测来确定感染情况。
虽然抗体检测法的操作相对简单，但其灵敏度和特异性不如基因检测法。
除了以上两种方法，病毒培养法也是一种常用的诺如病毒检测方法。
这种方法需要将患者的样本接种到细胞培养物中，通过观察细胞的变化来确认感染情况。
病毒培养法能够获得活病毒，有利于病毒的研究和疫苗的研发，但操作复杂且耗时较长。
总的来说，诺如病毒的检测方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据实际情况和实验室条件来决定。
在进行检测时，需要严格按照操作规程进行，避免交叉污染和误操作，确保检测结果的准确性。
此外，随着科技的不断进步，新的诺如病毒检测方法也在不断涌现。
例如，近年来出现的快速诊断试剂盒能够在短时间内快速检测出诺如病毒的存在，为疫情防控提供了更多的选择。
未来，随着技术的发展，相信会有更多更快速、更准确的诺如病毒检测方法出现，为疫情防控提供更大的帮助。
综上所述，诺如病毒的检测方法多种多样，每种方法都有其独特的优势和局限性。
在选择检测方法时，需要充分考虑实际情况和实验室条件，确保检测结果的准确性。
同时，随着科技的不断进步，相信会有更多更快速、更准确的诺如病毒检测方法出现，为疫情防控提供更大的帮助。
对于诺如病毒感染的检测工作，我们需要不断学习和更新检测方法，以更好地应对疫情挑战。
诺如病毒感染及其实验室检查
诺如病毒感染及其实验室检查林迪;孙长贵【摘要】诺如病毒性胃肠炎是一组由诺如病毒感染引起，以恶心、呕吐、腹痛和腹泻为主要临床表现的肠道传染病，2006年美国疾病控制中心(CDC)将其列为生物恐怖B类因子。
诺如病毒性胃肠炎在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，我国历年病毒性腹泻监测数据显示，每年的11月至次年3月为诺如病毒性胃肠炎的高发季节。
2014年上半年我国嘉兴、北京、江苏等地区都相继出现了诺如病毒感染事件，2014年11月广州南洋理工职业学院再次暴发诺如病毒感染，受感染人数达274例,未有死亡病例。
本文就该病毒的结构、生物学特性、流行病学、临床表现、诊断与鉴别诊断和实验室检查等作简要综述。
【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】3页(P1-3)【关键词】诺如病毒;诺如病毒性胃肠炎;感染;实验室检查【作者】林迪;孙长贵【作者单位】解放军第117医院检验科南京军区医学检验质控中心，浙江杭州310013;解放军第117医院检验科南京军区医学检验质控中心，浙江杭州310013【正文语种】中文【中图分类】R373.2;R446诺如病毒(Norovirus，NV)是世界范围内引起人类非细菌性急性胃肠炎的一种高度传染性病原菌[1]，该病毒具有高度感染性,传播途径广泛,人群普遍易感,容易在餐馆、学校、社区、医院、托儿所、养老院等聚集性场所引起集体暴发[2]。
在美国，据估计诺如病毒每年将造成2100万人感染，71000人住院治疗，800人死亡[3]。
诺如病毒原型株诺瓦克病毒(Norwalk virus)于1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻患者粪便中分离到，1972年Kapikian等人通过免疫电子显微镜从患者的粪便中检测到直径为27 nm的病毒颗粒，命名为诺瓦克病毒[4]。
2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒。
1995年，中国报道了首例诺如病毒感染，之后山西、北京、安徽、福州、武汉、广州、浙江嘉兴等地区先后发生多起诺如病毒感染性腹泻暴发疫情。
诺如病毒实验室诊断现状与展望
诺如病毒实验室诊断现状与展望何涛君;陆学东;庞晓莉;汤一苇【摘要】Norovirus is recognized as the primary cause of nonbacterial acute gastroenteritis and often causes serious public health and food safety concern. Fast evolution and continuous drifting of norovirus genome have posed challenges for clinical diagnosis and vaccine development. This review updates the research of laboratory diagnosis of norovirus, from classic nucleic detection to recent application of nanotechnology and chip, such as a multiplex RT-qPCR detection and high-throughput sequencing. A very recent breakthrough in cell culture of norovirus in vitro is also introduced. The latest advance of technology improves the laboratory diagnosis of norovirus, thus meeting the requirement of clinical diagnosis and vaccine development.%诺如病毒是引起非细菌性急性胃肠炎的主要病因,常常引起严重的公共卫生与食品安全问题.诺如病毒基因组的多样性及其它们不断的进化和变异为临床诊断及疫苗研制带来了挑战.本文就诺如病毒实验室诊断方法的研究进展作一综述,包括从传统经典的核酸检测到应用纳米、芯片等高新技术的多重核酸定量检测和高通量测序平台,以及体外成功培养的报道等等.这些新技术的成功运用将推动诺如病毒实验室诊断的新发展,以满足临床诊疗及疫苗研制的新需求.【期刊名称】《传染病信息》【年(卷),期】2017(030)005【总页数】5页(P265-268,281)【关键词】诺如病毒;实验室诊断;多重核酸定量检测;高通量测序;病毒体外细胞培养【作者】何涛君;陆学东;庞晓莉;汤一苇【作者单位】518033 深圳,中山大学附属第八医院检验医学部;518033 深圳,中山大学附属第八医院检验医学部;T6G 2J6 加拿大埃德蒙顿,阿尔博塔省立公共卫生实验室;阿尔博塔大学医学院医学实验和病理学系;10021 纽约,美国纪念斯隆-凯特琳癌症中心【正文语种】中文【中图分类】R373诺如病毒是一组小圆形（直径30～38 nm）、无包膜的单股正链RNA病毒，属杯状病毒科诺如病毒属。
如何检测诺如病毒
如何检测诺如病毒诺如病毒的感染全年均可发生，尤以冬季较多，人们常把它称为“冬季呕吐病”，是非细菌性胃肠炎的主要病原体之一，是全球急性胃肠炎的散发病例和暴发疫情的主要致病原。
近年来，我国诺如病毒暴发疫情也大幅增加，主要发生在学校、托幼机构和医疗机构等人群聚集场所，带来的负面影响很大，确定病因对症治疗和针对性防控就显得尤为重要。
怎样才能确定是否为诺如病毒感染呢？那我们还得先简单地了解一下诺如病毒，并在此基础上对其进行规范的实验室检测。
（一）基因分型诺如病毒是一类微小的单链RNA无包膜病毒，属于杯状病毒科。
根据基因特征，诺如病毒被分为6个基因群（Genogroup，GI-GVI）。
其中GI和GII是引起人类急性胃肠炎的两个主要基因群，其进一步可以分为31个不同的基因型；GIV也可感染人，但很少被检出。
（二）传染源与传播途径诺如病毒是重要的肠道病毒，患者、隐性感染者及健康携带者均可为传染源。
传播途径包括人传人、经食物和经水传播。
人传人可通过粪口途径（包括摄入粪便或呕吐物产生的气溶胶）、或间接接触被排泄物污染的环境而传播。
食源性传播是通过食用被诺如病毒污染的食物进行传播，污染环节可出现在感染诺如病毒的餐饮从业人员在备餐和供餐中污染食物，也可出现在食物生产、运输和分发过程中被含有诺如病毒的人类排泄物或其它物质（如水等）所污染。
经水传播可由桶装水、市政供水、井水等其他饮用水源被污染所致。
（三）临床表现以及病程诺如病毒的潜伏期多为24-48小时，最短为12小时，最长可达72小时；患者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、水样腹泻、腹部绞痛和强烈不适感；儿童患者呕吐症状比较普遍，成人患者以腹泻症状多见，24小时内腹泻可达到4-10次，粪便为水样便，无粘液、脓血和腥臭；少数患者大便等常规镜检可见少量白细胞，红细胞罕见。
原发感染者的呕吐症状明显多于继发感染者，除此之外，患者还会有全身乏力、头疼、寒颤、肌肉痛、食欲不振等症状。
食品安全国家标准 食品中诺如病毒检测
食品安全国家标准食品微生物学检验食品中诺如病毒检测1 范围本标准本标准规定了食品中诺如病毒的测定方法。
本标准适用于食品中诺如病毒总数的测定。
2 术语和定义2.1 实时荧光RT-PCR real-time fluorescence在普通RT-PCR的基础上加了一条特殊性的荧光探针。
该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接受到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
2.2 C值 cycle thresholdt每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1无菌平皿，直径90mm；3.2无菌手术剪；3.3无菌镊子；3.4无菌50ml离心管，耐氯仿，可高速离心；3.5无菌85ml离心管，耐氯仿，可高速离心；3.6无菌胶头滴管；3.7无菌移液管，10ml；3.8移液枪，1-1000ul；3.9匀浆机；3.10超净工作台；3.11天平，精密度为0.01g；3.12高速冷冻离心机，10000g；3.13恒温摇床；3.14荧光定量PCR仪。
4 试剂4.1 含0.3mol/lNaCl的甘氨酸缓冲溶液，配制方法见A.1；4.2 PEG8000，配制方法见A.2；4.3 病毒RNA提取试剂盒；4.4 Nuclisens裂解液；4.5逆转录试剂盒；4.6荧光PCR定量试剂盒；4.7 缓冲液1×TAE，配制方法见A.3；4.8溴化乙锭（EB）溶液10ug/uL，配制方法见A.4；4.9琼脂糖凝胶，配制方法见A.5。
5 检验程序6 操作步骤6.1诺如病毒的富集6.1.1在无菌平皿中进行无菌取样，取食品5g，加入25ml含0.3mol/lNaCl的甘氨酸缓冲溶液，匀浆3min，为避免匀浆过程产生的高温破坏病毒，分两次匀浆，中间停顿1min。
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测诺如病毒实验室检测是由世界卫生组织（W）提供的病毒实验室技术，用于快速检测出Novel Coronavirus（2019-nCoV）的流行及分布情况。
它是世界卫生组织成立的Novel Coronavirus Global Outbreak and Response Network （GOREN）实施的核心技术。
该技术可以用来快速识别未经认证的病毒分子样品及做出实时分析，以确定最新的病毒流行状况。
病毒实验室检测（VLT）是以酶链反应（PCR）技术为基础的实验室检测技术，该技术由完善的实验室设备、抗体探测和液体培养而构成。
该技术检测标本的PCR物质，以确定目标病毒的丰度。
如果有检测到诺如病毒，样本分析结果可以反映出阳性病毒的基因组大小，以及有用的病毒分类学和流行病学信息。
同时，诺如病毒实验室检测还可以与预防性药物开发、疫苗研发，以及免疫识别研究等有关，以及抗体检测和其他免疫应答技术。
这些技术都将减少病毒引发病患数量，提高临床治疗和护理效果，改善国家免疫aad健康水平。
诺如病毒实验室检测技术在2020年起就得到广泛应用，特别是在世界各地展开的新冠疫情监测和应急决策的基础上。
它被推广应用到全世界的实验室，以支持全球新冠病毒抗击工作，为国际健康护卫树立良好的抗病路径。
从技术上来说，诺如病毒实验室检测不仅有诸多便利之处，而且可以快速、精准有效地分析病毒样本。
此外，该技术还可以通过抗体检测和免疫应答的测试，帮助提高实验室的诊断技术，促进现代医疗保健事业的发展。
总之，诺如病毒实验室检测在新冠爆发的情况让我们把它用来检测病毒的模式变得更加准确、可靠和有效。
它已经成为评估新冠疫情流行特征的有效方法，也可以用来为抗病研究和防疫工作提供重要支持。
诺如病毒实验室诊断现状与展望
诺如病毒实验室诊断现状与展望【摘要】诺如病毒能够引起腹泻，也是病毒性急性肠胃炎的主要病因，严重影响着当下公共卫生与食品安全。
诺如病毒基因组具有多样性，且病毒也在不断变异，这也就导致临床尚未研发出疫苗进行病毒控制。
诺如病毒实验室诊断方法类型较多，不同检测技术间的检测原理具有差异，此类实验室检测技术对促进诺如病毒实验室诊断工作的发展具有重要价值，能够满足现代化临床病毒诊断的需求，为临床治疗提供依据。
基于此文章就诺如病毒实验室诊断现状以及未来发展展开阐述。
【关键词】诺如病毒实验室诊断诊断技术诺如病毒属于一组圆形、无包膜的单股正链RNA病毒，属于环状病毒科诺如病毒属。
若如病毒的感染性腹泻是诺如病毒的主要临床症状，此类疾病具有发病急、传播速度快、传播范围广等特点，也是爆发性非细菌性腹泻的主要病因。
从诺如病毒感染性来讲，诺如病毒以肠道传播为主，受到污染的水、食物，甚至空气均有较高的传播性，因此诺如病毒在学校、社区容易出现集体感染。
诺如病毒自身遗传具有高度变异的特征，同一社区在同一时间所存在诺如病毒毒株具有差异，为减少诺如病毒的感染与传播，预防与控制感染对阻断病毒爆发具有重要价值。
实验室检测作为检测诺如病毒最快、最直观的方式，近年来诺如病毒实验室诊断技术也在不断简化、诊断精准性也在不断提升。
一、诺如病毒表型以及免疫学检测方法电子显微镜对诺如病毒的检测十分简单，其仅需要少量样本进行简单处理，便可直观从外形的角度对诺如病毒进行分辨。
电子显微镜对区分小圆病毒的敏感性较差，由于诺如病毒与札幌病毒、星状病毒外形具有相似性，以此单纯电子显微镜难以对诺如病毒进行诊断。
根据当下研究资料统计，有学者研究证明，在对2000余份粪便样本进行检测的过程中，有超100分的阳性样本尚未在电子显微镜下被检出。
由此电子显微镜对诺如病毒的灵敏性较低，且设备自身维护成本较高，不适用于临床诊断。
2003年以来，诺如病毒抗原检测方法在不断更新，受其检测方法快速、操作简单等优势，被广泛应用于诺如病毒抗原的检测中。
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诺如病毒实验室检测
诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。
NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。
诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。
2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus,NV）。
诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Virus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，合称为人类杯状病毒。
诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。
诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。
诺如病毒有许多共同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。
诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中基因组I （GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V（GGV）各有1个基因群。
与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。
一、标本采集注意事项：
粪便标本应在发病首日采集，至多不能超过发病急性期(48～72h)，此时为稀、软便，病毒排出量最多。
一次流行，至少采集10例患者粪便，每份标本量约1～5ml，成形便和肛拭子诊断意义很小。
标本置4℃可存放2～3周，运送也要低温条件。
病人呕吐物是粪便标本的最佳补充，有助于病原的诊断。
该标本的采集、储存和运送条件同于粪便。
从流行病学角度出发，在水、食物或其它外环境标本中检出NV意义重要。
需注意检测技术要锁定在高度怀疑的传播媒介上，尽早采样并置4℃存放，若是饮用水，需用大容量(5～100L)浓集病毒后检测。
二、实验室检测：
1、电镜检查：电镜法分直接电镜法(EM)和免疫电镜法(IEM)，EM 法观察的灵敏
度较低，要求每毫升粪便样品中至少有大约 106个病毒粒子，因此只能用于患病早期病毒大量排出时采集的样本检测。
IEM 法比 EM 法的敏感性可提高100 倍，主要应用患者恢复期血清捕捉同型抗原，从而增加检出率。
电镜法的缺陷在于设备昂贵，不能广泛普及；检测结果与操作者的技能和经验有直接关系；灵敏度相对较低；不适于大规模流行病学调查。
2、免疫法：免疫法包括放射免疫法(RIA)、生物素-亲和素免疫法(Biotin-Avidin
Immunoassy)和酶联免疫法(ELISA)。
RIA法的灵敏度比IEM 法可提高10～100倍，可以检测出抗体升高的水平，为流行病学提供更有参考价值的资料。
RIA 法的不足之处在于它需要 6 d，且需要放射性同位素标记。
为了简化方法，美国疾病预防控制中心建立了生物素-亲和素免疫法，其灵敏度与 RIA 法相当，该方法已成为美国疾病预防控制中心检测NLV抗原和抗体的标准实验方法之一。
1992年Jiang 等重组杆状病毒表达NV衣壳蛋白成功后，建立起的 NV 酶联免疫检测方法快速、灵敏、经济，其不足之处是免疫反应的株型特异性太强，所以应用范围还比较窄。
酶链免疫法特异性强，灵敏度高，诊断迅速，且较经济，是可广泛应用的检测方法。
3、分子生物学检测：分子生物学检测方法杂交技术和逆转录聚合酶链反应
(RT-PCR)除了能更准确、灵敏地检测标本中的NV，尤其是低浓度的NV感染外，最大的优点在于可以进一步对病毒进行基因型的研究，不会受到获得分型单克隆抗体的限制，对流行病学研究具有重要意义。
等温核酸扩增法(NASBA)直接扩增RNA 来检测 NV，样品中病原RNA得到指数级扩增，产物通过琼脂糖凝胶电泳或斑点印迹杂交鉴定结果。
该方法的灵敏度略低于 RT-PCR 法；整个过程只有一步RNA扩增，避免了RT-PCR存在的RNA交叉污染；缩短了操作时间；假阳性率低。
RT-PCR检测食物中NV存在样品病毒量含量低，样品量大且成分复杂等问题，因此病毒富集浓缩、样品处理是检测的关键，其中有两个重要方面影响检测结果，一是样品中病毒浓缩后的回收率，二是抽提核酸的完整程度和纯度。
病毒浓缩病毒浓缩 NV 浓缩方法一般分为两大类，一类为有机絮凝沉淀法，主要使用聚乙二醇（PEG）沉淀，PEG 是具有强
烈吸水性以及凝聚和沉淀蛋白作用的高分子聚合物，先改变样品 pH 值，使毒粒与样品微粒分开，PEG 把病毒沉淀下来，达到浓缩的目的。
目前对于固体样品 PEG 沉淀法是最有效的浓缩方法。
膜过滤法是另一类有效浓缩病毒的方法，通过改变膜的pH值使之与带有电荷的毒粒结合捕捉病毒，这种方法通常用在浓缩大体积的黏度小、内容颗粒小的液体食品或水中。
检测海水、生活污水中的NV曾用过这种方法，为瓶装水和其他饮料浓缩NV提供了参考。
核酸提取食品样品成分复杂，所含有的脂肪、蛋白质、金属离子等物质都是RT-PCR 反应抑制因子。
NV是单链RNA病毒，核酸提取方法的优劣取决于两个方面：核酸的质量和去除抑制因子的能力。
应用较成熟广泛的是胍法 RNA 提取法，即（异）硫氰酸胍-苯酚-氯仿联合裂解抽提法，该方法改进后制成市售的TRIzol、RNAzol、Ultraspec 等产品，与石英砂、磁珠等多孔颗粒相结合，已结合了poly(dT) 或特异探针的磁珠能较高程度的提纯mRNA，去除反应抑制因子。
石英砂或磁珠纯化 RNA与传统的有机试剂（异丙醇、乙醇）沉淀 RNA 相比起来，效果较好，只是成本偏高。