流感病毒实验室检测概述.
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法
甲型流感的分子诊断技术与实验室检测方法甲型流感是一种由甲型流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其传播迅速且易感染大量人群。
为了准确诊断和及时干预，科学家们开发出了多种分子诊断技术和实验室检测方法。
本文将介绍几种常用的技术与方法，以提高对甲型流感的检测效率和诊断准确性。
一、聚合酶链式反应（PCR）技术PCR技术是一种灵敏度高、特异性强的分子诊断技术，已被广泛应用于甲型流感的检测中。
该技术通过放大甲型流感病毒基因组中特定的DNA片段，从而使其能够被检测到。
PCR技术可在短时间内，从患者的样本中检测到甲型流感病毒的存在，并确定其亚型。
此外，PCR 技术还能够对病毒的基因组进行序列分析，从而确定其突变情况和传播途径。
二、实时荧光定量PCR（qPCR）技术实时荧光定量PCR技术是PCR技术的一种改进版本，其主要优势在于可实现对病毒数量的精确测量和即时定量。
该技术结合了PCR和荧光探针技术，使得可以在PCR反应过程中实时监测目标序列的扩增情况。
实时荧光定量PCR技术能够快速检测出甲型流感病毒的数量，并对病毒载量进行准确测量，帮助医生判断病情的严重程度，指导治疗决策。
三、免疫荧光技术免疫荧光技术是一种通过特定的抗体和荧光探针对病毒进行检测的技术。
在甲型流感的实验室检测中，科学家们通常采用免疫荧光技术检测病毒的抗原。
该技术的原理是将含有甲型流感病毒的标本与特异性荧光标记的抗体结合，然后通过荧光显微镜观察是否有荧光信号出现。
免疫荧光技术能够准确、快速地检测出甲型流感病毒的存在，并且可以对其亚型进行鉴定。
四、核酸测序技术核酸测序技术是一种可以解析病毒基因组序列的方法，可以帮助科学家们了解甲型流感病毒的基因组结构和功能。
通过高通量测序技术，科学家们可以在较短的时间内获取大量的病毒基因组序列信息。
这些信息有助于了解甲型流感病毒的变异情况，筛选药物治疗靶点，并指导疫苗的设计与开发。
五、免疫学检测方法除了分子诊断技术，免疫学检测方法也发挥着重要作用。
流行性感冒诊断与治疗指南
流行性感冒诊断与治疗指南流行性感冒是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。
流感是一种严重的疾病，每年都会导致大量的住院治疗和死亡病例，尤其对老年人、儿童和患有慢性病的人群来说更为危险。
及早诊断和治疗对于减少病情的严重度和传播的风险至关重要。
以下是流行性感冒的诊断与治疗指南。
一、流行性感冒的诊断1.病史询问：询问患者是否在流感流行季节接触过流感患者或在流行地区，并了解其症状、病程和严重程度。
2.体格检查：检查患者的体温、呼吸频率、心率、血压等生命体征，并仔细观察患者是否存在发热、咳嗽、喉痛、流涕、肌肉疼痛等症状。
3.实验室检查：流行性感冒的确诊通常依靠实验室检查。
常见的实验室检查包括流感病毒抗原检测、流感病毒核酸检测、病毒分离培养等。
二、流行性感冒的治疗1.对症治疗：对于轻型流感患者，通常只需要进行对症治疗。
包括：休息、补充水分、适当运动、保持室内空气流通等。
有流感病毒感染的患者应避免外出。
2.抗病毒治疗：对于高危人群和重症患者，推荐使用抗病毒药物进行治疗。
目前临床常用的抗病毒药物有阿那米韦、奥司他韦等。
这些药物能够抑制流感病毒的复制，缩短疾病持续时间和减轻症状的严重程度。
3.合理用药：在使用抗病毒药物时，需要在临床医生的指导下合理用药。
必须注意药物的禁忌症和副作用，遵守药物使用的指导，不滥用药物。
4.病情观察：在治疗过程中，需要密切观察患者的病情变化。
出现严重呼吸困难、胸痛、意识模糊等严重病症时，应立即就医。
5.个人防护措施：流感是通过飞沫传播的，所以个人防护措施非常重要。
包括：勤洗手、避免接触眼、口、鼻，尽量避免在人员密集的地方停留等。
总之，流行性感冒的诊断与治疗需要综合考虑患者的临床表现、流行病学史和实验室检查。
对于轻型流感患者，通常只需要进行对症治疗。
对于高危人群和重症患者，应及时进行抗病毒治疗。
在治疗过程中，需要密切观察患者的病情变化，合理用药，并采取个人防护措施。
最后，提醒大家在流感流行季节注意个人卫生，勤洗手，加强锻炼提高身体免疫力，保持良好的生活习惯。
流感病毒实验室检测流程
1
流感病毒实验室检测流程
流感病毒实验室检测流程简述如下：
→样本采集：采集患者咽拭子、鼻咽拭子或呼吸道分泌物
→标本处理：使用病毒保存液，保持样本活性，低温运送
→实验室接收：记录信息，安全条件下接收样本
→核酸提取：从样本中提取RNA
→RT-PCR检测：逆转录聚合酶链反应，检测流感病毒核酸
→结果分析：观察PCR产物，判断阴阳性
→病毒分离培养：必要时，于生物安全柜中进行鸡胚或细胞培养→病毒鉴定：通过HA试验、基因测序等确定病毒类型和亚型→出具报告：记录检测结果，及时报告给临床医生
→生物安全：全程严格遵守生物安全操作规程。
1。
H7N9禽流感病毒实验室检测
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略
应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤 其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清 以及间隔2-4周的恢复期血清。如病人死亡， 应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体 解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组 织）标本。医疗机构采集的呼吸道标本每份不 少于3ml。血清标本每份分为2管，每管不少 于0.5ml。
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人感染H7N9禽流感强化监测实施方案
.严重急性呼吸道感染（SARI）病例
（1）5岁以上儿童及成人。 新收入院患者具有以下4项临床表现： ①急性起病； ②腋下体温≥38℃； ③咳嗽或咽痛； ④气促（呼吸频率≥25次/分钟）或呼吸困难 正在住院治疗的患者如出现上述4项临床表现，也视 为严重急性呼吸道感染病例。
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相关技术文件
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人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略
标本采集 为进行病例诊断，医疗机构应尽早采集病人的 相关临床样本。采集的临床标本包括病人的上 呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物 、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管 吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等 。
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人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略
对人感染H7N9禽流感确诊病例可能暴露的禽 类饲养或交易等场所，由疾控机构采集禽类粪 便、笼具涂拭标本和环境污水等标本，技术要 求参考《职业暴露人群血清学和环境高致病性 禽流感监测方案（2011年版）》。（ /jkzt/crb/rgrgzbxqlg_5 295/rgrglgyh/）
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人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略
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人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略
流感病毒实验室pcr检测技术
流感病毒实验室pcr检测技术
第21页
Real-Time PCR
▪ 基础原理:指在RT-PCR反应体系中加入荧光基团, 利用荧光信号积累实时监测整个RT-PCR进程,最 终经过标准曲线对未知模板进行定量或定性分析 方法.荧光基团主要有TaqMan荧光探针和SYBR 荧光染料
标本采集（一）
▪ 主要采集上呼吸道标本 ▪ 鼻咽拭子：将棉签平行于上颚插入鼻孔，保持几
秒吸收分泌物。 ▪ 口咽拭子：拭抹咽后壁和扁桃体部位，防止触及
舌部；快速将棉签放入无菌、内装3-5ml样本运 输液及带垫圈螺口塑料管中，在靠近顶端处折断， 旋紧管盖并密封。 ▪ 气管分泌液：搜集气管吸收液或支气管浇灌液510ml放入无菌、带垫圈50ml螺口塑料管中，马上 密封。
区、旅游区）人群健康，快速诊疗将提供有效信息以 供控制方案制订，提供有效公共健康提议。
流感病毒实验室pcr检测技术
第18页
快诊应用价值
➢ 监测：为社会公众提供流感活动情况“早期预警”系 统。在一些国家快速检测已经被应用流感监测形成制 度，被用于病毒分离前标本筛选。不过WHO要求对 流感进行抗原分析，不推荐把快速检测作为监测单一 伎俩。
▪ TaqMan荧光探针工作原理:PCR扩增时,在加入一 对引物同时加入一个特异性荧光探针,探针两端分 别标识一个汇报荧光基团和淬灭荧光基团.探针完 整时,汇报基团发射荧光信号被淬灭基团吸 收;PCR扩增时 ,探针被酶切降解,汇报基团和淬灭 基团分离,从而荧光监测系统接到荧光信号,每扩 增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧 光信号累积与PCR产物形成完全同时
流感病毒的实验室检测方法及进展
·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！流感病毒的实验室检测方法及进展李月越陈杭薇李兵【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。
流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。
流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。
现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。
【关键词】流感病毒；检测方法Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御（乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异，对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人群有较高的发病率及致死率，危害很大。
流感诊断的金标准
流感诊断的金标准
流感即流行性感冒，诊断的金标准通常被认为是病毒分离培养。
这种方法可以直接从患者体内分离出流感病毒，是确诊流感的最可靠方法。
然而，由于病毒分离培养需要一定的时间和实验条件，因此在实际操作中，医生通常会结合患者的流行病学史、临床症状以及其他实验室检查结果进行综合判断。
流感诊断的金标准是通过实验室检测直接从患者体内分离并鉴定出流感病毒。
具体来说，包括以下几个步骤：
1. 病毒核酸检测：实时荧光定量PCR（RT-PCR）是目前临床最常用的流感病毒检测方法，它能直接检测到患者呼吸道分泌物（如鼻咽拭子、喉咙拭子或痰液样本）中流感病毒的核酸（RNA），从而确定是否感染了流感病毒。
2. 病毒分离培养：在特殊细胞上培养患者的呼吸道分泌物标本，并观察是否有病毒生长和特征性的细胞病变效应，然后进一步通过免疫学或分子生物学技术鉴定病毒种类。
3. 血清学检测：虽然不是即时诊断手段，但在疾病恢复期采集血清进行抗体检测，对比发病初期和恢复期双份血清中的抗流感病毒抗体滴度变化，若4倍以上升高则有助于回顾性诊断。
根据国家卫生健康委员会发布的流感诊断标准，结合病人的流行病学史（如近期接触史、疫区旅行史等）和临床表现（如突发高热、咳嗽、头痛、肌痛、乏力等症状），可以初步怀疑流感。
但最终确诊
通常依赖于上述实验室检查的结果。
特别是在流感流行季节或者发生流感样症状的群体中，实验室检测是必不可少的确诊环节。
总之，流感诊断的金标准是病毒分离培养，但在实际操作中，医生需要综合考虑患者的流行病学史、临床症状以及实验室检查结果进行综合判断。
甲流和乙流的检验方法
甲流和乙流的检验方法
甲流和乙流均是流感病毒引起的疾病，症状相似，而且容易传染。
为了确诊患者是否感染了甲流或乙流病毒，通常使用实验室方法进行检验。
以下是甲流和乙流的检验方法。
甲流检验方法：
1. RT-PCR法：即逆转录聚合酶链式反应法。
这种方法是目前检测甲流病毒最常用的方法。
它使用分子生物学技术，通过检测病毒基因组中的RNA，快速准确地诊断患者是否感染甲流病毒。
2. 应用免疫学方法：包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光法和放射免疫测定法等。
这些方法可以检测甲流病毒和其抗体的存在，并可用于追踪流行性别株。
3. 细胞培养方法：该方法是将病毒在细胞培养中进行繁殖，最终形成滴度测定。
但是，这种方法时间较长，并且并不是所有的样本都可以进行培养。
乙流检验方法：
1. 应用RT-PCR法：该方法是检测乙流病毒的首选方法，与甲流不同的是，乙流病毒有四个亚型，在该方法中可以使用不同的引物来检测特定的亚型。
2. 应用免疫学方法：与甲流相似，适用于检测乙流病毒和其抗体的存在。
3. 细胞培养方法：与甲流相似。
需要注意的是，任何一种检测方法都需要合理的样本收集和保存。
遵循正确的采样技术，并将样品冷藏或冷冻以保持其完整性，以确保检测准确性。
同时，也需要正确识别和选择适当的实验室专业技术。
综上所述，甲流和乙流病毒检验有多种方法，其中RT-PCR法是最常用的方法。
通过这些方法可以快速有效地确诊患者是否感染了甲流或乙流病毒，以及其亚型或抗体的存在情况。
这将有助于及早确定患者的治疗方案，确保公众的健康和安全。
流感的疾病诊疗报告
流感的疾病诊疗报告一、疾病概述流感，即流行性感冒，是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。
流感病毒分为甲、乙、丙三型，其中甲型流感病毒是导致流感大流行的主要病原体。
流感病毒具有高度变异性，每年可引起季节性流行。
二、临床表现流感的典型症状包括发热、咳嗽、喉咙痛、肌肉疼痛、头痛、寒战和疲劳。
部分患者可能出现鼻塞、流涕、恶心、呕吐和腹泻等消化道症状。
三、诊断依据1. 流行病学史：了解患者是否在流感流行季节出现症状，是否有与流感患者接触史。
2. 临床表现：依据患者的临床症状进行初步判断。
3. 实验室检查：包括病毒核酸检测、血清学检测和病毒分离培养等，以确诊流感病毒感染。
四、治疗原则1. 对症治疗：包括退热、止咳、缓解肌肉疼痛等。
2. 抗病毒治疗：早期使用抗病毒药物，如奥司他韦、扎那米韦等，可减轻症状、缩短病程、降低并发症风险。
3. 支持治疗：充分休息、多饮水、营养支持等。
五、预防措施1. 疫苗接种：每年接种流感疫苗是预防流感最有效的手段。
2. 个人卫生：勤洗手、不与患者密切接触、保持室内通风。
3. 健康生活方式：均衡饮食、适量运动、充足睡眠，增强免疫力。
六、并发症管理流感可能导致的并发症包括肺炎、心肌炎、脑炎等，应及时识别并给予相应治疗。
七、诊疗流程1. 病史采集与体格检查2. 实验室检测确诊3. 根据病情严重程度决定门诊或住院治疗4. 抗病毒治疗与对症治疗5. 预防并发症6. 健康教育与随访八、总结流感是一种可防可控的疾病，通过及时的诊断、有效的治疗和科学的预防措施，可以显著降低流感对公共卫生的影响。
流感病毒及实验室检测
汇报人： 日期:
目录
• 流感病毒概述 • 流感病毒的实验室检测方法 • 实验室检测流程与规范 • 流感病毒的变异与进化 • 流感病毒的防治与未来展望 • 相关案例分析
01
流感病毒概述
Chapter
病毒类型与特点
流感病毒属于正粘病毒科，具有包膜、分节段和基因组 等特点。
根据病毒核蛋白和基质蛋白的不同，流感病毒可分为甲 、乙、丙三型，每型又根据病毒的抗原性不同分为若干 亚型。 流感病毒的遗传物质为RNA，具有高变异性，易引起病 毒株的变异和流行。
03
对于流感患者，应 及时隔离和治疗， 以减少病毒的传播 。
04
针对易感人群和高 危人群，可采取抗 病毒药物预防和治 疗。
02
流感病毒的实验室检测方法
Chapter
抗原检测
01
02
03
直接免疫荧光法
利用特异性抗体标记荧光 素，直接检测样本中的流 感病毒抗原。
间接免疫荧光法
将样本与特异性抗体结合 ，再与荧光素标记的抗抗 体结合，检测流感病毒抗 原。
规范操作
实验操作应严格按照实验室规范进行 ，防止因操作不当导致的病毒感染或 实验室事故。
04
流感病毒的变异与进化
Chapter
病毒变异类型与特点
抗原性变异
导致病毒的表面抗原结构发生变 化，从而产生新的病毒株。这种 变异是随机的、不定向的，并可 能导致病毒逃逸免疫系统的识别
和攻击。
宿主适应性变异
使病毒能够在不同的宿主环境中 生存和传播。这种变异通常涉及 到病毒的基因组中的多个位点， 并可能导致病毒对特定宿主产生
更强的致病性。
耐药性变异
使病毒对特定的抗病毒药物产生 抵抗力。这种变异通常是由于病 毒基因组中的突变积累所致，并 可能导致病毒对多种药物产生耐
高致病性禽流感病毒实验室检测分析
高致病性禽流感病毒实验室检测分析摘要：禽流感即禽流行性感冒，属于甲型流感病毒所致禽类传染性疾病，可在鸡、鸟类中大范围传播。
禽流感包括非致病性、低致病性及高致病性等类型，其中高致病性禽流感具有传播速度快、病死率高及危害性大等特点，并可感染人类，因此国家将其列为一类动物疫病。
为有效防控高致病性禽流感，需采取有效实验室检测方案。
本文分析研究高致病性禽流感病毒实验室检测方法及检查过程中的风险防控措施，希望为相关人员提供参考。
关键词：高致病性禽流感病毒；实验室检测；检测方法高致病性禽流感属于禽类急性传染性疾病，致病菌为甲型流感病毒，其主要特点是传播速度快，病死率较高，可对禽养殖行业造成严重不良影响。
近年来，我国部分地区开展家禽检疫过程中多次检出高致病性禽流感病毒，为此需不断加强实验室检测分析工作，并在检测中采取有效的风险防控措施，以实现对高致病性禽流感的有效防控。
一、高致病性禽流感概述高致病性禽流感属于世界范围多发常见禽类疫病，可对公共卫生安全构成严重威胁。
高致病性禽流感病毒致病性较强，可寄生于多种宿主体内，人类及哺乳动物均可感染，不同禽流感感染病原亚型临床表现存在差异，H7N9亚型感染症状较为严重，可导致呼吸系统病变及多器官功能衰竭，致死率较高，H7亚型感染可导致呼吸道相关症状，H9N2亚型感染症状与普通流感近似[1]。
高致病性禽流感危害性较强，为此需及早确诊，并采取有效的防控措施，以避免其持续蔓延。
二、高致病性禽流感病毒实验室检测方法（一）病毒培养分离病毒培养分离是诊断高致病性禽流感病毒的常规方法，具有较高的灵敏度、特异度及准确度。
实验室检测人员利用临床标本获取毒株，通过培养分离操作技术可确定毒株的生物学特性与抗原基因，进而为疫苗的选用提供参考。
同时，病毒培养分离操作相对复杂，样品运输条件、采用时间及采样方式等均可影响检测结果，不适合应用于普查中。
另外，开展病毒培养分离过程中，高致病性H5N1毒株需在生物安全级别达到BSL-3的实验室中完成[2]。
常用流感病毒实验室检测方法的比较
常用流感病毒实验室检测方法的比较摘要目的通过对四种常用流感病毒检测方法的比较，确定适用于常规监测及疫情暴发时的检测方法。
方法用四种方法对随机抽取的50份样品进行检测，对结果进行对比分析。
结果胶体金法虽简单快速，但漏检率较高（20.00%）；RT-PCR法灵敏快捷，准确度高（34.00%）；细胞培养法费用适中，检出率较高（14.00%）；鸡胚培养法检出率最低（2.00%）。
结论胶体金法适合疫情现场检测，RT-PCR法适合实验室内快速检测，组织培养法适合常规监测，鸡胚培养法适合流感疫苗生产。
关键词组织培养；鸡胚培养；病毒分离；RT-PCR；流感病毒现在实验室对流感病毒的检测手段有很多种，在本科室常用的方法有胶体金法、细胞培养法、鸡胚培养法、RT-PCR法四种。
为实际工作中找到最适合的检测方法，更及时准确的提供检测结果，对实验室常用的四种流感病毒检测方法进行比较。
现报告如下。
1 资料与方法1. 1 检测样品2014年1～4月份本院对就诊的流感样病例（发热，体温≥38℃，伴咳嗽或咽痛之一者，未服用过抗病毒药物[1]）采集的鼻咽拭子，随机抽取50份。
流感病毒采样管由北京友康恒业科技有限公司购买。
1. 2 实验方法1. 2. 1 胶体金法美国QUIDEL公司，QuickVue Influenza A+B Test，按照试剂盒说明书操作。
1. 2. 2 细胞培养法MDCK细胞由辽宁省疾病预防控制中心提供。
样品前处理：将采样管漩涡震荡10 s，反复挤压拭子头后弃去拭子，加入青霉素、链霉素、制霉菌素，4℃静置2 h。
细胞传代及病毒接种按照郭元吉等所著的《流行性感冒病毒及其实验技术》操作[2]。
样品接种MDCK细胞培养出的第一代病毒培养液用1%豚鼠血红血球进行微量血凝实验（haemagglutination assay，HA），HA≥1：8的第一代病毒培养液用血凝抑制法（hemagglutination inhibition，HI）进行流感病毒分型鉴定（鉴定试剂盒由国家流感中心提供）。
流感病毒的实验室检测方法及进展探究
（下转第138页）
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孕 妇 增 加到 一步 法的 2 倍以上；妊 娠 期 糖尿 病 检出率大幅 度 上 升由 11.13%上 升 达 30.71%。通 过 正 确的健 康 教育和 饮食 调整，二 周后监 测空腹、餐后1 h及餐后2 h指端血糖，331例中287例血糖达到控制要 求，2 6 例 控制不 满 意，经 过 进 一步 调 整 饮食 结 构，加强孕 期运 动后 基 本达 标，另外18例 转入内分泌 科 胰岛素 治 疗 有 效。孕 期大 多 数孕 妇血糖得以良好的控制，顺利度过妊娠中晚期，孕妇发生妊娠期高 血 压 疾 病，羊水 过 多，胎膜 早 破，巨大 儿，产后出血，新生 儿 窒 息，新 生儿低血糖等的风险以及剖宫产率均有下降，对改善妊娠结局有较 明显改善。 3 讨论与分析
流感病毒又称为：流行性感冒病毒，具 有超强的传染性、散 播 性，是一种R NA病毒，归属于正黏液病毒科。一般通过呼吸道感染 以及 人 类 或动物的呼吸、讲 话 等 途 径 进 行 传 播。传 播的效 果 极快， 短时间内就可造成大面积的患有流行性感冒病毒的病例产生。流感 病 毒主 要 分为三个 等 级，即甲型、乙型、丙 型。其中甲型流 感 病 毒是 一种急性的 流 感 病 毒，经 过 变 异发 展 后对人 类自身的伤 害巨大，死 亡率 较 高。流 感 病 毒 实验 室的建 立在于研 究流 感 病 毒，分析 和总 结 出流感病毒的分布范围以及发展趋势，对我国预防和治疗流感性病 毒 具 有至关 重 要的作用。
感染HN9禽流感病毒毒病毒原特点及实验检测
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
人感染H7N9禽流感病毒 实验室检测
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
A/H7N3
禽
2004/加拿大
2/结膜炎、ILI; 1名LPAI；1名HPAI
A/H5N2
禽
2005/日本(Ibaraki) 13/无临床症状，血清学诊断
A/H7N2
禽
2007/英国(Wales) 1/结膜炎、ILI
A/H9N2
来源不清
2007/香港
1/ ILI
A/H10N7
鸭
2004/埃及( Ismaillia) 2/ ILI
共25株
均为LPAI 无感染人病例
亚洲：7株 均来自野禽 5株—韩国 2株—蒙古
CHINESE CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
H7N9的致病力和传播力
HPAI H7N3
HPAI H7N3
LPAI H7N9
LPAI H7N9
LPAI H7N9
A/H7N7
鸥
1980/美国
3/结膜炎
A/H7N7
鸭
1996/英国
1/结膜炎
A/H5N1
禽
1997/香港
18/ILI，肺炎
A/H9N2
鸡
1998/中国广东
5/ ILI，肺炎
A/H9N2
禽
1999/香港
2/ILI
A/H7N2 A/H9N2
甲流检测步骤
甲流检测步骤
甲流是由甲型流感病毒引起的呼吸道传染病，其检测步骤主要包括以下几个方面：
1.病史询问和体格检查：医生会询问患者是否有流感症状，如
发热、咳嗽、喉咙痛等，并检查患者的体温、呼吸、心跳等表现。
2.实验室检测：医生可能会进行实验室检测以确认是否感染了
甲型流感病毒。
常用的检测方法包括：
- 咽拭子样本：医生用棉签或专用拭子在咽喉部取样，将样本
送到实验室进行病毒核酸检测，来确定是否存在甲型流感病毒。
- 血液检测：医生可能会抽取患者的血液样本，通过血液检测
寻找甲型流感病毒的抗体或病毒核酸。
3.其他辅助检查：医生可能会要求进行其他辅助检查，如X光检查或者胸部CT扫描，以了解病毒是否引起了其他并发症，
如肺炎。
值得注意的是，专业的医生和医疗机构会有相应的流感检测指南，并根据具体情况进行相应的检测。
因此，如果出现流感症状或怀疑感染甲型流感，最好及时就医并遵循医生的建议进行检测。
2024甲乙型流感病毒抗原检测(附方法的局限性)
2024甲/乙型流感病毒抗原检测（附方法的局限性）检测适应征：流感是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病，一般表现为发热，伴畏寒、寒战、头痛、肌肉、关节酸痛、极度乏力、食欲减退等全身症状，常有咽痛、咳嗽，可有鼻塞、流涕、胸骨后不适、颜面潮红、结膜轻度充血，也可有呕吐、腹泻等症状。
检测标本采集：1、鼻腔分泌物采集:收集鼻腔分泌物时,将拭子插入鼻腔中分泌物最多处，轻轻转动并向鼻腔内部推动拭子，直至鼻甲（离鼻孔约2.0-2.5Cm）受阻处,贴鼻腔壁旋转拭子三次,取出拭子。
2、咽喉分泌物采集:将拭子从口腔完全插入咽喉中，以咽喉壁、上颗扁桃体的发红部位为中心，适度用力擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免触及舌部，取出拭子。
检测方法：胶体金标记免疫层析法检测结果的解释与建议:1.如果鼻咽拭子结果是阴性的，然而患者的临床表现非常像，这时候还不能完全排除流感，这时候就需要临床医生结合症状、体征、病史、其它实验室检查等，判断是否需要用药。
2.对临床诊断病例和确诊病例应尽早隔离治疗。
3.住院治疗标准(满足下列标准1条或［条以上)(1)妊娠中晚期妇女。
(2)基础疾病明显加重，如慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、慢性心功能不全。
慢性肾功能不全、肝硬化等。
(3)符合重症或危重流感诊断标准。
(4)伴有器官功能障碍。
4.非住院患者居家隔离，保持房间通风。
充分休息，多饮水，饮食应当易于消化和富有营养。
密切观察病情变化，尤其是儿童和老年患者。
5.流感病毒感染高危人群容易引发重症流感，尽早抗病毒治疗可减轻流感症状,缩短流感病程，降低重症流感的病死率。
6.避免盲目或不恰当使用抗菌药物。
仅在流感继发细菌性肺炎、中耳炎和鼻窦炎等时才有使用抗生素的指征。
7.儿童忌用阿司匹林或含阿司匹林药物以及其他水杨酸制剂。
检测方法的局限性:1∙测试的准确性取决于采集样本过程，样本采集不当会影响检测结果，如临床怀疑为流感，而咽拭子抗原阴性，必须再次复查，排除取材不到位2.采集的样本若存在个别药物如高浓度的非处方药和处方药（鼻腔喷雾剂）会干扰结果。
甲乙流感病毒实验室风险评估_2
甲型/乙型流感病毒实验室活动风险评估报告一、生物学特征（一）种类和分型流行性感冒病毒（influenza virus）, 是正粘病毒科（Orthomyxoviridae）的代表种, 简称流感病毒, 包括人流感病毒和动物流感病毒, 人流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型, 是流行性感冒（流感）的病原体。
其中甲型流感病毒抗原性易发生变异, 多次引起世界性大流行。
例如1918～1919年的大流行中, 全世界至少有2000万～4000万人死于流感；乙型流感病毒对人类致病性也比较强, 但是人们还没有发现乙型流感病毒引起过世界性大流行；丙型流感病毒只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染, 很少造成流行。
甲型流感病毒于1933年分离成功, 乙型流感病毒于1940年获得, 丙型流感病毒直到1949年才成功分离。
流感分类根据流感病毒感染的对象, 可以将病毒分为人类流感病毒、猪流感病毒、马流感病毒以及禽流感病毒等类群, 其中人类流感病毒根据其核蛋白的抗原性可以分为三类:甲型流感病毒（Influenza A virus）, 又称A型流感病毒乙型流感病毒（Influenza B virus）, 又称B型流感病毒丙型流感病毒（Influenza C virus）, 又称C型流感病毒感染鸟类、猪等其他动物的流感病毒, 其核蛋白的抗原性与人甲型流感病毒相同, 但是由于甲型、乙型和丙型流感病毒的分类只是针对人流感病毒的, 因此通常不将禽流感病毒等非人类宿主的流感病毒称作甲型流感病毒。
在核蛋白抗原性的基础上, 流感病毒还根据血凝素HA和神经氨酸酶NA的抗原性分为不同的亚型。
（二）形态结构流感病毒呈球形, 新分离的毒株则多呈丝状, 其直径在80至120纳米之间, 丝状流感病毒的长度可达4000纳米。
流感病毒结构自外而内可分为包膜、基质蛋白以及核心三部分。
病毒的核心包含了存贮病毒信息的遗传物质以及复制这些信息必须的酶。
流感病毒的遗传物质是单股负链RNA, 简写为ss-RNA, ss-RNA与核蛋白 (NP)相结合, 缠绕成核糖核蛋白体 (RNP), 以密度极高的形式存在。
流感病毒实验室检测
湖南省疾病预防控制中心 微生物检验科 黄一伟 2013-12-27
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流感病毒实验室检测技术 及盲样考核结果分析
衬底1
01
监测流感活动水平和流行动态；
02
及时发现流感病毒变异并作出预警；
03
为全球及我国流感疫苗毒株的预测和推荐提供依据。
流感监测目的
202X
（一）流感样病例监测 （二）流感样病例暴发疫情监测
F
50ul
B
50ul
A
50ul
稀释完病毒液后加入50ul红细胞悬液
1
病毒 原液
3
128
2
2
4
HA： 32
5
HA＞128
HA： 4
衬底1
01
HA滴度≥8，进行红细胞凝集抑制（HI）试验；HA滴度<8者，继续在敏感的MDCK细胞系或鸡胚上进行传代培养，使其HA滴度≥8后，再进行HI测定
衬底1
荧光定量PCR
第一次使用前引物稀释 1．引物工作浓度（40μM） 配制方法： （1）将新合成的引物开盖前短暂离心（12000rpm，15s）。 （2）用RNase Free Water溶解，加水量为10×总摩尔数，充分混匀，此时引物浓度为100μM，可作为储存液。（例如：假设合成引物每管2OD，若2OD的量为9.1 nmol ，加水量为10×9.1＝91μl） （3）将100μM的引物2.5倍稀释，此时浓度为40μM，可作为工作浓度。 2．探针工作浓度（10/20μM/） 配制方法： （1）将新合成的探针管开盖前短暂离心（12000rpm，15s）。 （2）用RNase Free Water溶解，加水量为10×总摩尔数，充分混匀，此时引物浓度为100μM，可作为储存液。 （3）将100μM的探针10/5倍稀释，此时浓度为10/20μM，可作为工作浓度。
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• 2．探针工作浓度（10/20μM/） • 配制方法：
– （1）将新合成的探针管开盖前短暂离心（12000rpm，15s）。 – （2）用RNase Free Water溶解，加水量为10×总摩尔数，充分混匀，此时引物 浓度为100μM，可作为储存液。 – （3）将100μM的探针10/5倍稀释，此时浓度为10/20μM，可作为工作浓度。
实验室生物安全要求
季节性流感病毒分离鉴定在生物安全Ⅱ级 实验室进行。
流感病毒分离鉴定及其它检测过程中所有 能够产生感染性气溶胶的过程必须在生物 安全Ⅱ级实验室的生物安全柜里操作。 用灭活的抗原进行血清学检测时可以在生 物安全Ⅰ级实验室进行
标本的接收
• 接收标本时必须核对送检表 • 流感监测网络实验室的工作人员接到标本 后，24小时内将“流感/人禽流感监测病例 标本原始登记送检表”（表2）录入到“监 测信息系统”
流感样病例监测标本采集
• 采集对象： 流感样病例
发热（体温≥38℃），伴咳嗽或咽痛之一者
• 采集时间：病人发病的头3天内采集 • 采集地点：国家级流感样病例监测哨点医院 • 采集数量：根据就诊ILI病例数的多少，每家 哨点医院每周至少采集5～15份流感样病例的 标本(根据流行季节、流行强度、防控工作需要实时 调整）
咽拭子采集
• 咽拭子 • 用灭菌棉签（最好用聚丙烯纤维头的塑料 杆拭子）擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将棉 签头部浸入含3-4ml采集液的管中，尾部弃 去，旋紧管盖。
标本的保存与运送
• 标本采集后应在4℃条件下，尽快（哨点监 测48小时疫情24小时内）运送至流感监测网 络实验室
• 未能送至实验室的，应臵-70℃或以下保存， 一周内送实验室 • 冻存的标本，尽量避免其反复冻融，在冷 藏条件下送到实验室
流感病毒实验室检测技术 及盲样考核结果分析
湖南省疾病预防控制中心
微生物检验科 黄一伟 2013-12-27
流感监测目的
• （一）监测流感活动水平和流行动态；
• （二）及时发现流感病毒变异并作出预警； • （三）为全球及我国流感疫苗毒株的预测 和推荐提供依据。
流感监测内容
• （一）流感样病例监测
• （二）流感样病例暴发疫情监测
• 注意：在试验过程中，保持所有的试剂在冰架上保 持低温。
荧光定量PCR
• 反应体系和条件
• 试剂：Invitrogen SuperScript® III Platinum® One-Step Quantitative Kit （公司： Invitrogen， 货号：11732-020或11745-100）
标本的处理
• 标本送至实验室后，立即进行处理，未加 抗菌素的加入适量的抗菌素。 • 将原始标本一分为三份，一份（1ml）用于 MDCK细胞接种，一份（1ml）用于鸡胚接 种，一份（1ml）保存待复核。（根据检测
程序实时调整）
实验室检测
◆核酸检测
◆病毒分离和鉴定：鸡胚分离和细胞培养
◆胶体金快速检测
采集标本类型
常规
咽拭子 鼻拭子 痰液
特殊
鼻咽/呼吸道吸取物 鼻洗液 呼吸道灌洗液 肺组织活检标本 尸检标本
采样液
• 常用的采样液有：PH 7.4-7.6的Hank’s液或 MEM； • 标本采集后应立即放入适当的采样液中低 温保存，同时加入抗菌素（入庆大霉素 50 mg/mL，多粘菌素B 250μg/mL ）
荧光定量PCR
• 引物和探针
– 稀释好的冰冻的引物和探针进行融化（已融的探针避 光2-8℃可保存多达3个月，不要对探针反复冻融）； – 涡旋振荡引物和探针； – 瞬时离心引物和探针，之后置于冰架上。
• real-time RT-PCR的试剂
– QIAGEN公司 QuantiTect Probe RT-PCR Kit， Cat No. 204443
荧光定量PCR
• 第一次使用前引物稀释
• 1．引物工作浓度（40μM） • 配制方法：
– （1）将新合成的引物开盖前短暂离心（12000rpm，15s）。 – （2）用RNase Free Water溶解，加水量为10×总摩尔数，充分混匀，此时引 物浓度为1ห้องสมุดไป่ตู้0μM，可作为储存液。（例如：假设合成引物每管2OD，若2OD的 量为9.1 nmol ，加水量为10×9.1＝91μl） – （3）将100μM的引物2.5倍稀释，此时浓度为40μM，可作为工作浓度。
检测流程
临床标本采集 流感病毒核酸检测阳性 接种MDCK细胞 接种鸡胚
红细胞凝集试验
红细胞凝集抑制试验，鉴定病毒 寄送国家流感中心
核酸检测
• 核酸提取- QIAamp® Viral RNA Mini Kit • 1）在1.5ml 离心管中加入AVL（病毒裂解液）560ul。 • 2）取采样液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培养物（鸡胚 尿囊液或细胞培养液）140ul加入上述离心管中（粪便标本用10 ％悬液的上清），震荡15s，室温放置10min。 • 3）稍离心后，加入560ul无水乙醇，震荡15s。 • 4）将Viral RNA Mini spin柱子取出，将步骤3的混合液吸取 630ul加入柱子中，8000rpm离心1min。弃离心液。 • 5）重复步骤4。 • 6）将吸附柱放入一新的2ml 套管中，加入500ul AW l液，8000 rpm离心1min。弃套管及其离心液。 • 7）将吸附柱放入一新的2ml 套管中，加入500ul AW 2液， 13000rpm离心3min，弃套管及其离心液。 • 8）将吸附柱放入一新的1.5ml 离心管中，于柱中加入60ul的 AVE液，室温静置1－3分钟，8000rpm离心1min，收集离心液即 为提取的病毒RNA，立即实验或－20℃以下保存。
暴发疫情标本采集
• （1）1周内，在同一学校、幼儿园或其他集体 单位发生30例及以上流感样病例；或发生5例 及以上因流感样症状住院病例（不包括门诊留 观病例）；或发生2例及以上有流行病学关联 的死亡病例； • （2）在某一社区内（如同一乡或街道）1周内 出现流感样病例异常增多。
• 每一起暴发疫情一般应当采集10份左右咽、鼻 拭子标本（如果现症病例在10例以下的，应当 尽量全部采样）。