酸性磷酸酯酶组织定位

酸性磷酸酯酶的组织定位

一、目的

1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作步骤;

2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。

二、原理

酸性磷酸酯酶(Acid Phosphatase)是能专一性地水解磷酸单酯键。

PO43-+Pb(NO3)

2 -----Pb

3

(PO4)

2

↓（沉淀）

Pb

3(PO4)

2

+(NH

4

)

2

S----PbS ↓(棕黑色)

三、实验材料、试剂和仪器

1、材料

新鲜蒜苔，新鲜青菜的全根系组织；

2、试剂

底物溶液：0.1mol/l磷酸缓冲液（PH=5.1），10mlPb(NO

3)

2

，30ml2%甘油

磷酸钠丙酮，60mlH

2

O 。

(NH

4)

2

S试剂，丙酮，蒸馏水等。

3、仪器和用具

恒温箱、显微镜、大小培养皿、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸、胶头滴管等。

四、实验方法与步骤

1、新鲜蒜苔的酸性磷酸酶组织定位：

A. 徒手切片蒜苔（使切片尽量薄而透明），将切片放入装有干净蒸馏水的培养皿中备用；

B. 挑选适宜的蒜苔切片，将其放入4℃的丙酮中，固定15 min后用蒸馏水清晰切片1-2次；

C. 将洗好的切片移入装有底物溶液中，在37℃恒温箱中保温1h；

D. 完成后，将切片用蒸馏水洗3次，加入0.5%的(NH

4)

2

S溶液，放置1-2 min

后，再次用水将切片洗净；

E. 盖上盖玻片，进行镜检。

五、实验结果与分析

新鲜蒜苔的酸性磷酸酶组织定位：

■在40×的放大倍数下对切片进行观察：

观察到在蒜苔细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，如筛管细胞中（图中颜色最深的部分）酸性磷酸酶极为丰富。筛管、导管周围的薄壁细胞区域也呈棕色。