植物黄芪根内生真菌的分离
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Ａｎ ｅ ｐ ｒ ｎ ｓ ｃ ｎ ｕ ｔｄ ｔ ｏａｅ ｅ ｄ ｐ ｙ ｉ ｎ ｉ ｒ ｍ ｅ ｌ ｙ ｒｏ ｆ ｓｒ ｇ ｌ ｓｍｅ ｒ ｎ ｃ ｕ ａ ．ｍｏ ｇ ｏｉ ｘ ｅ ｍｅ ｔ ｉ ｗａ ｏ ｄ ｃ ｅ ｉ ｌｔ ｎ ｏ ｈ ｔ ｆ ｇ ｏ ｈ ａｔ ｔｏ ｔａ ａ ｕ ｍｂ ａ ａ ｅ ａｖ ｒ ｏｓ ｃｕ ｆ ｈ ｏ Ａ ｎ ｈ ｌ － Ｃ ． ｕ ｄ ｒ ｉ ｅｅ ｔｃ ｎ ｉ ｏ ｓｂ ａ ｓｏ ｕ ｆｃ ｉｉｆ ｃｉ ｎ ａ ｄ ｓ ｌｃ ｉｎ ｏ ｕ ｔ ｒ ｄ ｕ Ｉ ｎ ｅ ｆ ｒｎ ｏ ｄｔ ｎ ｙ ｍｅ ｎ ｆｓ ｒａ ｅ ｄ ｓｎｅ ｔ ｎ ｅ ｅ ｔ ｆ ｌ ｅ ｍｅ ｉｍ．Ｔ ｅ ｍｏｐ ｏｏ ｉａ ｅ ｔ － １ ８ ｄ ｉ ｏ ｏ ｃ ｕ ｈ ｒ ｈ ｌｇｃ ｌ ｄ ｎ ｉ ｉ ｉ ｆ
蒙 古 黄 芪 ［ ｓａａ ｓｍ ｍ ｒｎｃ ￣（ ｉ ． Ａｔ ｇｌ ｅ ｂ ａｅ ｒ ｕ ａ ｕ Ｆｓ ） ｈ Ｂ ｅ ａ ｏｇ ｏｃｓ（ ｇ． ｓ ｏ 为 名贵 中药 ｇ．ｖｒ ．ｍ ｎｈｌｕ Ｂｅ ）Ｈ ｉ ］ ｉ ａ 材。但 目前对其过度 的采挖 ， 已造成传统道地黄芪 已远远 不能 满足市 场 需求 Ｊ 因此 从 天然 药 用微 。
ｃｔ ｎｏ ｔｅ ｕｇ ｗ ｓｍ ｄ ．Ｒ ｓｈｓｏ ｅ ｌ ｅ ｕ ａｅｄ ｉ ｅｔ ｎｍｅ ｏ ａ ｆ ｃｖ ． ｉｅｅｔ ｕ ｂｒ ｏ ｅｄ－ ａｏ ｆｈ ｎ ａ ａｅ ｅｕ ｗ ｄｔａ ｔ ｒ ｃ ｌｎ ｃｏ ｔ ｄｗ ｓ ｅｔ ｅ Ｄｆ ｒｎ ｎ ｍ ｅ ｆ ｎ ｏ ｉ ｆｉ ｈ ｌｔｈ ｓ ｆ ｓ ｆ ｉ ｈ ｅ ｉ ｓ
分离 菌 的培 养 ： 观察实 验培 养皿 及对 照皿 情况 ， 随 时观察 出菌情 况及 组织 片变 化 ， 根 组 织 边 缘 长 待
出菌后 ， 挑取菌丝或菌体 ， 经平板划线法和平板稀释 法反 复分 离 、 纯化 ， 养 观 察 菌 落 的形 态 ， 培 比较 ４种 培养基 对 黄芪 内生 真 菌 的分离 情 况 ， 对 菌 落 的 生 并
表 １ 各 菌 株 在 各 自提 取 培 养 基 上 培 养 ９ 的 菌 落 形 态 ６ｈ时 特征
理， 一是不做任何处理 ； 二是将培养基 内接人消毒时 要使用 的同等条件下灭菌的无菌水少许 ； 三是在消
毒操 作 过程 中 ， 倒 入 培 养 基 的 培 养皿 开盖 暴 露 于 将
超净台内， 目的是 为 了验证 培 养基 、 菌水 和超净 台 无 灭 菌是 否彻底 。
ｒｏ ｆ ． ｍｅｒ ａ ｍｃ ｕ ａ ．ｍｏ ｇ ｏ ｉ ｓ ｈ ｃ ｌｎ ｏ ｓ ｖ ｎ ｇ ｎ ｒ ． ｏ ｔｏ Ａ ｒ ￣ｒ ｒ ｅ． ｖ ｒ ｓ ｎ ｈ ｌ ｕ ，ｗ ｉｈ ｂ ｏ ｇ ｔ ｅ ｅ ｅ ｅ ａ ｃ ｅ
Ｋｅｗ ｒｓ ｓ ａａｕ ｒ ｒｎｃｕ ａ．ｍ ｎ ｈｌｕ ； ｎ ｏｈｔ ｎ ； ｒｈｌ ｃｌｄ ｎｆ ａ ｏ ｙ ｏｄ Ａｔ ｇ ｌ ｍｅ￣ ａａ ｅ， ｒ ｏｇ ｏｃｓ Ｅ ｄｐ ｙ ｃｆ ｇ Ｍｏ ｏ ｇ ａ ｉｅｔ ｃｔ ｎ ｒ ｓ ｒ ｓ ｖ ｉ ｉ ｕｉ ｐ ｏ ｉ ｉ ｉ ｉ
１ ２ １ 试 剂的制 备 ．．
护野生资源具有重要意义 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 仪器及试药 ． 试 验仪 器 ：Ａ ０４型 电子 分 析 天平 （ 海 良平 Ｆ ２０ 上
仪器 仪 表有 限公 司 ） Ｄ Ｋ — ； Ｚ Ｗ Ｃ型 仪表 恒 温 不 锈 钢 水 浴 锅 （ 海树 立仪器 仪表 有 限公 司 ） 手提 式 压力 上 ； 锅（ 上海 申安 医疗 器 械厂 ） Ｃ Ａ Ｓ１Ｔ Ｐ ２洁 净 ；Ｌ Ｓ Ｙ ＥＢ １ 工作 台 （ 京 东 联 哈 尔 仪器 制 造 有 限公 司 ） Ｈ Ｑ— 北 ；Ｚ
１２２ 内生真 菌的分 离纯化及 培 养基 的筛选 ．． 组织培 养 ： 择无 病斑 新鲜黄 芪根块 冲洗 干净 ， 选 晾至表面无 水珠 ， 主根 切 成 约 ３ｃ 长 的小 段 ， 取 ｍ 注
角瓶 （ 海五 一玻璃 仪器 厂 ） 上 。
试验试药 ： 牛肉膏 、 酵母提取物、 胰化蛋白胨 、 蛋 白胨、 可溶性淀粉 （ 北京奥博 星生物技术有限责任 公司） 琼脂 （Ａ Ａ ．Ｏ ＯＤ Ｅ Ｇ Ａ Ｄ ； ； Ｊ Ｐ Ｎ Ｘ Ｉ Ｎ Ｌ Ｎ ） 葡萄糖 （ 分析纯 ， 天津基准化学试剂有 限公 司） 医用酒精 ；
马 伟 贾艳姝 李 娜 龚 贺 张艳 贺
（ 黑龙 江中医药大学 ， 哈尔滨 ，５０ ０ １ ０４ ）
摘 要 以蒙古黄芪健康植株上的块根为材料 ， 经过表 面消毒、 培养基选择 ， 不 同培养条件 下分 离获得 内生 在 真茵 ， 并对其进行 形态学鉴定。结果显示 ： 表面消毒方法有效 ， ４种培养基 上分 别获得不 同数 目的 内生真 茵株 ， 显 微镜 下获得 了 内生真茵形态特征。分 离获得黄 芪内生真菌 ２ 株 ， ８ 分列在 ７个茵属 中。
关键词 黄 芪； 内生真 茵； 态鉴定 形 分 类 号 ￥ ６ ． ５７２ Ｉｏａｉｎｏ Ｅ ｄ ｐ ｙ ｃＦＩｇ ｏ Ｒ ｏ ｆ ｓ ａａｕ ｍ ｒｎ ｃ ｕ ａ．ｍｏ ｇ ｏｉ ｓＭａＷｅ， ｉ Ｙ ｎｈ ，Ｌ ｓｌｔ ｆ ｎ ｏ ｈ ｔ Ｉ ｉｒ ｍ ｏｔｏ Ａ ｔ ｇ ｌｓｍｅ ｂａ ａｅ ｓｖｒ ｏ ｉ ｎ ｆ ｒ ｎ ｈ ｌ ｕ／ ｉ Ｊ ａ ｓｕ ｉ ｃ ａ Ｎ ，Ｇ ｎ ｅ Ｚ ａｇＹ ｎｅ Ｃｌ ｇ ｆ ｈｒ ａｅｔ ａ Ｓｉ ｃｓ ｅｏ ｇａ ｇＵ ｉｅ ｉ ｆ ｈｎｓ ｄｃ ｅ ａｂ ａ ｏ ｇＨ ， ｈｎ ａｈ （ ｏｅｅｏ ａｍ ｃｕ ｃｌ ｃ ｎｅ ，Ｈ ｉｎ ｉｎ ｎｖｒ ｔ ｏ ｉ ｅＭｅｉｎ ，Ｈ ｒｉ ｌ Ｐ ｉ ｅ ｌ ｉ ｓｙ Ｃ ｅ ｉ ｎ １０４ Ｐ ５ ００． ．Ｒ．Ｃ ｉａ ／ Ｊｕ ａ ｏ Ｎ ｒ ｅｓ Ｆ ｒｓｙＵ ｉｅｓｙ一 ０２ ４ （ ） － ２ ６ ，１ ｈｎ ）／ ｏｒｌ ｆ ｏｔ ａｔ ｏｅｔ ｎｖｒｉ ． ２ １ ，０ ４ ． ６ － ３ １６ ｎ ｈ ｒ ｔ
株 ， 肉膏蛋 白胨 固体 培养基 中得到 内生真 菌 ２株 ； 牛 菌株 在 Ｐ Ａ培养 基 中长势 最好 ， 分离 得 到 的 内生 Ｄ 且 真菌数 量最 多 （ １ 。用 ４种 不 同 的培 养基 进行 黄 表 ） 芪 内生 真菌 的分 离 时 ，Ｄ Ｐ Ａ培 养基 无 论 是 在提 取 菌 的数量 上 ， 是在 菌 的生 长 状 态上 都 要 明显 好 于 其 还 他 ３种培 养基 。因此 ， 确定 Ｐ Ａ培养 基 为本实 验 最 Ｄ 佳 的提取 分离 黄芪 内生真菌 的培 养基 。
ｐ ｙ ｉ ｕ ｇ ｔａｎ ｒ ｂ ａｎ ｎ ｆ ｕ ｉ ｄ ｆ ｕ ｕ ｅｍｅ ｉ．Ｔ ｅ ｍｏ ｈ ｌ ｇｃ ｌ ｈ ｒ ｃｅ ｉｔ ｓｏ ｅ ｅ ｄ ｐ ｙ ｉ ｎ ｈ ｔ ｆ ｎ ａ ｓｒ ｉｓｗｅｅ ｏ ｔｉ ｅ ｏ ｏ ｒｋｎ ｓ ｏ ｈ ｒ ｄ ａ ｈ ｒ ｏｏ ｉａ ａ ａ ｔｒ ｉ ｔ ｎ ｏ ｈ ｔ ｆ － ｃ ｌ ｄ ｃ ｐ ｃ ｓｃ ｆ ｈ ｃｕ
第４ ｏ卷 第 ４期 ２１ ０ ２年 ４月
东
北
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业ห้องสมุดไป่ตู้
大
学
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报
Ｖｏ ． ０ Ｎｏ ４ １４ ．
Ａｐ ． ２ ２ ｒ ０１
Ｊ ＲＮＡＬ ＯＦ ＮＯＲ ＨＥ Ｔ Ｆ ＲＥ Ｔ Ｙ ＯＵ Ｔ ＡＳ Ｏ Ｓ Ｒ ＵＮＩ ＲＳＴ ＶＥ Ｉ Ｙ
植物 黄 芪根 内生 真 菌 的分 离
１ ０ ， ０ｍＬ 琼脂 ２ ，Ｈ＝ ． ７ ６ ０ ０ｇ ｐ ７ ４— ． 。
Ｆ６ 震荡培养箱 （ １０ 中国哈尔滨市东联 电子科技开发 有 限公 司 ） 隔水 式 恒 温 培 养 箱 （ 海 一 科 技 有 限 ； 上 恒
公 司） Ｎｋ ｎ ８ ｉ ； ｉｏ 一 ０ 显微镜 （ Ａ Ａ ； 板培 养 皿 、 Ｊ Ｐ Ｎ） 平 三
Ｐ Ａ（ — —Ｐ Ａ粉 末 与 蒸 馏 水 配 制 而成 ； Ｄ Ａ） Ｄ 牛 肉膏蛋 白胨 固体 培养基 （ —— 牛 肉膏 ３ｇ蛋 白胨 Ｂ） ， １ ，ａＩ ， ＯｇＮ Ｃ ｇ琼脂 ２ ， １ ０ Ｌ，Ｈ＝ ． ７６ ５ ０ｇ水 ０ｍ ｐ ７４— ． ； ０ Ｌ （ｕｉ— ｅｔ ｉ固体 培养基 （ ） —胰 蛋 白胨 １ Ｂ Ｌ ｒ Ｂ ｒｎ） ａ ａ Ｃ— ０ ｇ酵母提 取物 ５ｇＮ Ｃ ０ｇ琼 脂 ２ ； 氏 Ｉ 培 ， ， ａＩ ， １ ０ｇ 高 号 养基 （ — — 可溶性 淀 粉 ２ ， Ｎ １ ， ａ１ ． Ｄ） ０ｇ Ｋ Ｏ ３ Ｎ Ｃ ５ ｇ ０ ｇＫ Ｈ Ｏ ． ， Ｓ ４ ． ，ｅＯ ．＇ｇ蒸馏 水 ，２ Ｐ ４ ５ｇＭｇＯ ５ｇＦＳ ４ ０ ， ０ ０ ０ １
植在 ４ 种培养基平皿上 ， 置于相同条件下培养 ； ②接 洗涤水 ： 最 后 一 次 清洗 消 毒 组织 块 的无 菌水 ０ １ 将 ．
第 ４期
马
伟等： 植物黄芪根 内生 真菌的分离
ｍ Ｌ涂于 ４种培养基 表面， 置于相 同条件下培养 ， ③
直 接 印迹 ： 与 上述 同样 条 件 处 理过 的 根段 直 接 在 将 ４种培 养基 表 面做 印迹 。 培 养基 的选 择 ： 上 述 处理 过 的根 段在 无 菌 条 将 件 下 切去 两 端 ， 部 分分 割成 小 片 ， 机将 小片 分 剩余 随 别 种植 于 ４种 培养 基 平 板 上 ， 种 培 养 基 设 ３个 平 每 行皿 ， 每皿 ４片 ， 于 ３ 置 ０℃恒 温 培 养 箱 中培 养 ３～ ７ ｄ 并 以 ４种空 白培 养基 做对 照 。空 白对 照做 ３种处 ，
ｇ ｏ ｓｒｅ ｒｕｈｔｅｍｃｏｃｐ ｅ ａ ｚｄ ｔ ｆ ８ｓ ａ ｓ ｆ ｎ ｏｈｔ ｎ ｅ ｏａ ｄｆ ｍ ｔｅｈａ ｈ ｉ ｂｅｖｄｔ ｏ ｇ ｉ ｓｏｅｗ ｒ ａ ｌ ｅ．Ａ ｔ ａ ｏ ｔ ｉ ｄｐｙｉ ｆ ｇｗ ｒ ｉ ｌ ｅ ｏ ｅｌ ｙ ｈ ｈ ｒ ｅｎ ｙ ｏ ｌ ２ ｒｎ ｏｅ ｃ ｕｉ ｅ ｓ ｔ ｒ ｈ ｔ
生 物 的角度 出发 ， 离有 价 值 的 黄芪 内生 真 菌对 保 分
（ 齐齐 哈尔 市鹤 城消毒 剂厂 ） 。
植物材料为蒙 古黄芪 ［ ｓａａ ｓｍ ｍ ｒ ａｅｓ Ａｔ ｇｌ ｅ ｂ ｎｃ ｒ ｕ ａ ｕ （ ｉ ． ｇ． ａ ｍ ｎｈｌｕ （ ｇ． Ｈ ｉ ］ Ｆ ｈ ）Ｂｅ ｖｔ ｏｇｏｃｓ Ｂ ｅ） ｓ ｏ 的健康 ｓ ． ／ ａ 植株， 采集时间为 ２０ ０９年 １ ０月， 采集地点为黑龙江 省农科院园艺分院黑龙江中医药大学黄芪试验 田。 １ ２ 方 法 ．
１ 博士点基金 ” ）“ 新教师类课 题 （ ０９ ３ ７ ２０ ７ 、 育部科 ２ ０２ ２ １ ０ ） 教 ０ 学技术研究重点项 目（ ０９ ４ ） ２０ ０ ２ 资助。 第一作者简介 ： 马伟， ，９９年 ７月 生 ， 女 １６ 黑龙 江 中医药大学 药 学院 ， 研究员。 收稿 日期 ：０ １ ｌ ２ １ 年 １月 ７ １ ３。 责任编辑 ： 戴芳 天。
意保持切 口的整齐。 培养组织表面消毒： 自来水冲洗干净，５ 乙醇 ７％ 漂洗 ３ ｉ， ｎ 无菌水冲洗 ３ ， ％ 的次氯酸钠溶液 ｍ 次 １ ０ 浸泡 ７ ｉ， ｎ 无菌水冲洗 ３ ， ｍ 次 每次 ２ ｉ。为检查材 ｎ ｍ 料表面消毒是否彻底做对照实验如下 ： ①接组织块 ： 将 与上述 同样 条件 处 理过 的根 段不 作 分 割 ， 接 种 直
蒙 古 黄 芪 ［ ｓａａ ｓｍ ｍ ｒｎｃ ￣（ ｉ ． Ａｔ ｇｌ ｅ ｂ ａｅ ｒ ｕ ａ ｕ Ｆｓ ） ｈ Ｂ ｅ ａ ｏｇ ｏｃｓ（ ｇ． ｓ ｏ 为 名贵 中药 ｇ．ｖｒ ．ｍ ｎｈｌｕ Ｂｅ ）Ｈ ｉ ］ ｉ ａ 材。但 目前对其过度 的采挖 ， 已造成传统道地黄芪 已远远 不能 满足市 场 需求 Ｊ 因此 从 天然 药 用微 。
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分离 菌 的培 养 ： 观察实 验培 养皿 及对 照皿 情况 ， 随 时观察 出菌情 况及 组织 片变 化 ， 根 组 织 边 缘 长 待
出菌后 ， 挑取菌丝或菌体 ， 经平板划线法和平板稀释 法反 复分 离 、 纯化 ， 养 观 察 菌 落 的形 态 ， 培 比较 ４种 培养基 对 黄芪 内生 真 菌 的分离 情 况 ， 对 菌 落 的 生 并
表 １ 各 菌 株 在 各 自提 取 培 养 基 上 培 养 ９ 的 菌 落 形 态 ６ｈ时 特征
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毒操 作 过程 中 ， 倒 入 培 养 基 的 培 养皿 开盖 暴 露 于 将
超净台内， 目的是 为 了验证 培 养基 、 菌水 和超净 台 无 灭 菌是 否彻底 。
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护野生资源具有重要意义 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 仪器及试药 ． 试 验仪 器 ：Ａ ０４型 电子 分 析 天平 （ 海 良平 Ｆ ２０ 上
仪器 仪 表有 限公 司 ） Ｄ Ｋ — ； Ｚ Ｗ Ｃ型 仪表 恒 温 不 锈 钢 水 浴 锅 （ 海树 立仪器 仪表 有 限公 司 ） 手提 式 压力 上 ； 锅（ 上海 申安 医疗 器 械厂 ） Ｃ Ａ Ｓ１Ｔ Ｐ ２洁 净 ；Ｌ Ｓ Ｙ ＥＢ １ 工作 台 （ 京 东 联 哈 尔 仪器 制 造 有 限公 司 ） Ｈ Ｑ— 北 ；Ｚ
１２２ 内生真 菌的分 离纯化及 培 养基 的筛选 ．． 组织培 养 ： 择无 病斑 新鲜黄 芪根块 冲洗 干净 ， 选 晾至表面无 水珠 ， 主根 切 成 约 ３ｃ 长 的小 段 ， 取 ｍ 注
角瓶 （ 海五 一玻璃 仪器 厂 ） 上 。
试验试药 ： 牛肉膏 、 酵母提取物、 胰化蛋白胨 、 蛋 白胨、 可溶性淀粉 （ 北京奥博 星生物技术有限责任 公司） 琼脂 （Ａ Ａ ．Ｏ ＯＤ Ｅ Ｇ Ａ Ｄ ； ； Ｊ Ｐ Ｎ Ｘ Ｉ Ｎ Ｌ Ｎ ） 葡萄糖 （ 分析纯 ， 天津基准化学试剂有 限公 司） 医用酒精 ；
马 伟 贾艳姝 李 娜 龚 贺 张艳 贺
（ 黑龙 江中医药大学 ， 哈尔滨 ，５０ ０ １ ０４ ）
摘 要 以蒙古黄芪健康植株上的块根为材料 ， 经过表 面消毒、 培养基选择 ， 不 同培养条件 下分 离获得 内生 在 真茵 ， 并对其进行 形态学鉴定。结果显示 ： 表面消毒方法有效 ， ４种培养基 上分 别获得不 同数 目的 内生真 茵株 ， 显 微镜 下获得 了 内生真茵形态特征。分 离获得黄 芪内生真菌 ２ 株 ， ８ 分列在 ７个茵属 中。
关键词 黄 芪； 内生真 茵； 态鉴定 形 分 类 号 ￥ ６ ． ５７２ Ｉｏａｉｎｏ Ｅ ｄ ｐ ｙ ｃＦＩｇ ｏ Ｒ ｏ ｆ ｓ ａａｕ ｍ ｒｎ ｃ ｕ ａ．ｍｏ ｇ ｏｉ ｓＭａＷｅ， ｉ Ｙ ｎｈ ，Ｌ ｓｌｔ ｆ ｎ ｏ ｈ ｔ Ｉ ｉｒ ｍ ｏｔｏ Ａ ｔ ｇ ｌｓｍｅ ｂａ ａｅ ｓｖｒ ｏ ｉ ｎ ｆ ｒ ｎ ｈ ｌ ｕ／ ｉ Ｊ ａ ｓｕ ｉ ｃ ａ Ｎ ，Ｇ ｎ ｅ Ｚ ａｇＹ ｎｅ Ｃｌ ｇ ｆ ｈｒ ａｅｔ ａ Ｓｉ ｃｓ ｅｏ ｇａ ｇＵ ｉｅ ｉ ｆ ｈｎｓ ｄｃ ｅ ａｂ ａ ｏ ｇＨ ， ｈｎ ａｈ （ ｏｅｅｏ ａｍ ｃｕ ｃｌ ｃ ｎｅ ，Ｈ ｉｎ ｉｎ ｎｖｒ ｔ ｏ ｉ ｅＭｅｉｎ ，Ｈ ｒｉ ｌ Ｐ ｉ ｅ ｌ ｉ ｓｙ Ｃ ｅ ｉ ｎ １０４ Ｐ ５ ００． ．Ｒ．Ｃ ｉａ ／ Ｊｕ ａ ｏ Ｎ ｒ ｅｓ Ｆ ｒｓｙＵ ｉｅｓｙ一 ０２ ４ （ ） － ２ ６ ，１ ｈｎ ）／ ｏｒｌ ｆ ｏｔ ａｔ ｏｅｔ ｎｖｒｉ ． ２ １ ，０ ４ ． ６ － ３ １６ ｎ ｈ ｒ ｔ
株 ， 肉膏蛋 白胨 固体 培养基 中得到 内生真 菌 ２株 ； 牛 菌株 在 Ｐ Ａ培养 基 中长势 最好 ， 分离 得 到 的 内生 Ｄ 且 真菌数 量最 多 （ １ 。用 ４种 不 同 的培 养基 进行 黄 表 ） 芪 内生 真菌 的分 离 时 ，Ｄ Ｐ Ａ培 养基 无 论 是 在提 取 菌 的数量 上 ， 是在 菌 的生 长 状 态上 都 要 明显 好 于 其 还 他 ３种培 养基 。因此 ， 确定 Ｐ Ａ培养 基 为本实 验 最 Ｄ 佳 的提取 分离 黄芪 内生真菌 的培 养基 。
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第４ ｏ卷 第 ４期 ２１ ０ ２年 ４月
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植物 黄 芪根 内生 真 菌 的分 离
１ ０ ， ０ｍＬ 琼脂 ２ ，Ｈ＝ ． ７ ６ ０ ０ｇ ｐ ７ ４— ． 。
Ｆ６ 震荡培养箱 （ １０ 中国哈尔滨市东联 电子科技开发 有 限公 司 ） 隔水 式 恒 温 培 养 箱 （ 海 一 科 技 有 限 ； 上 恒
公 司） Ｎｋ ｎ ８ ｉ ； ｉｏ 一 ０ 显微镜 （ Ａ Ａ ； 板培 养 皿 、 Ｊ Ｐ Ｎ） 平 三
Ｐ Ａ（ — —Ｐ Ａ粉 末 与 蒸 馏 水 配 制 而成 ； Ｄ Ａ） Ｄ 牛 肉膏蛋 白胨 固体 培养基 （ —— 牛 肉膏 ３ｇ蛋 白胨 Ｂ） ， １ ，ａＩ ， ＯｇＮ Ｃ ｇ琼脂 ２ ， １ ０ Ｌ，Ｈ＝ ． ７６ ５ ０ｇ水 ０ｍ ｐ ７４— ． ； ０ Ｌ （ｕｉ— ｅｔ ｉ固体 培养基 （ ） —胰 蛋 白胨 １ Ｂ Ｌ ｒ Ｂ ｒｎ） ａ ａ Ｃ— ０ ｇ酵母提 取物 ５ｇＮ Ｃ ０ｇ琼 脂 ２ ； 氏 Ｉ 培 ， ， ａＩ ， １ ０ｇ 高 号 养基 （ — — 可溶性 淀 粉 ２ ， Ｎ １ ， ａ１ ． Ｄ） ０ｇ Ｋ Ｏ ３ Ｎ Ｃ ５ ｇ ０ ｇＫ Ｈ Ｏ ． ， Ｓ ４ ． ，ｅＯ ．＇ｇ蒸馏 水 ，２ Ｐ ４ ５ｇＭｇＯ ５ｇＦＳ ４ ０ ， ０ ０ ０ １
植在 ４ 种培养基平皿上 ， 置于相同条件下培养 ； ②接 洗涤水 ： 最 后 一 次 清洗 消 毒 组织 块 的无 菌水 ０ １ 将 ．
第 ４期
马
伟等： 植物黄芪根 内生 真菌的分离
ｍ Ｌ涂于 ４种培养基 表面， 置于相 同条件下培养 ， ③
直 接 印迹 ： 与 上述 同样 条 件 处 理过 的 根段 直 接 在 将 ４种培 养基 表 面做 印迹 。 培 养基 的选 择 ： 上 述 处理 过 的根 段在 无 菌 条 将 件 下 切去 两 端 ， 部 分分 割成 小 片 ， 机将 小片 分 剩余 随 别 种植 于 ４种 培养 基 平 板 上 ， 种 培 养 基 设 ３个 平 每 行皿 ， 每皿 ４片 ， 于 ３ 置 ０℃恒 温 培 养 箱 中培 养 ３～ ７ ｄ 并 以 ４种空 白培 养基 做对 照 。空 白对 照做 ３种处 ，
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生 物 的角度 出发 ， 离有 价 值 的 黄芪 内生 真 菌对 保 分
（ 齐齐 哈尔 市鹤 城消毒 剂厂 ） 。
植物材料为蒙 古黄芪 ［ ｓａａ ｓｍ ｍ ｒ ａｅｓ Ａｔ ｇｌ ｅ ｂ ｎｃ ｒ ｕ ａ ｕ （ ｉ ． ｇ． ａ ｍ ｎｈｌｕ （ ｇ． Ｈ ｉ ］ Ｆ ｈ ）Ｂｅ ｖｔ ｏｇｏｃｓ Ｂ ｅ） ｓ ｏ 的健康 ｓ ． ／ ａ 植株， 采集时间为 ２０ ０９年 １ ０月， 采集地点为黑龙江 省农科院园艺分院黑龙江中医药大学黄芪试验 田。 １ ２ 方 法 ．
１ 博士点基金 ” ）“ 新教师类课 题 （ ０９ ３ ７ ２０ ７ 、 育部科 ２ ０２ ２ １ ０ ） 教 ０ 学技术研究重点项 目（ ０９ ４ ） ２０ ０ ２ 资助。 第一作者简介 ： 马伟， ，９９年 ７月 生 ， 女 １６ 黑龙 江 中医药大学 药 学院 ， 研究员。 收稿 日期 ：０ １ ｌ ２ １ 年 １月 ７ １ ３。 责任编辑 ： 戴芳 天。
意保持切 口的整齐。 培养组织表面消毒： 自来水冲洗干净，５ 乙醇 ７％ 漂洗 ３ ｉ， ｎ 无菌水冲洗 ３ ， ％ 的次氯酸钠溶液 ｍ 次 １ ０ 浸泡 ７ ｉ， ｎ 无菌水冲洗 ３ ， ｍ 次 每次 ２ ｉ。为检查材 ｎ ｍ 料表面消毒是否彻底做对照实验如下 ： ①接组织块 ： 将 与上述 同样 条件 处 理过 的根 段不 作 分 割 ， 接 种 直