耐热冻干保护剂活疫苗生产工艺
合集下载
耐热保护剂配方资料
猪伪狂犬病毒耐热冻干保护剂
谷氨酸钠2%
L-精氨酸盐酸盐2%
酶解酪蛋白7.6%
D-山梨醇2%
明胶4%
海藻糖1%
牛血清白蛋白2%
蔗糖15.2%
冻干曲线：①产品预冻阶段：常温进箱，1h内将板层温度降至-42℃并维持3h；②升华干燥阶段：2h内将板层温度从-42℃升至0℃并维持15h；③解析干燥阶段：2h内将板层温度从0℃升至28℃并维持8h；④冻干结束，曲线全长约31h
制成的活疫苗经37℃7天的耐老化试验，病毒含量仅下降0.45个滴度，2-8℃保存可达2年，其滴度不下降。
高致病性猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬病二联活疫苗的耐热保护剂配方
明胶0.8～1.2%、大豆蛋白胨4～6%、甘氨酸0.5～1.5%、蔗糖3～5%、海藻糖2～3%、聚乙烯吡咯酮1～2%、甘露醇0.5～1%、维生素E0.1～0.2%，。
耐热冻干保护剂活疫苗的生产工艺共85页文档
耐热冻干保护剂疫苗的生产工艺
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
END
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
36、“不可能”这个字(法语是一个字 )，只 在愚人 的字典 中找得 到。--拿 破仑。 37、不要生气要争气，不要看破要突 破，不 要嫉妒 要欣赏 ，不要 托延要 积极， 不要心 动要行 动。 38、勤奋，机会，乐观是成功的三要 素。(注 意：传 统观念 认为勤 奋和机 会是成 功的要 素，但 是经过 统计学 和成功 人士的 分析得 出，乐 观是成 功的第 三要素 。
END
39、没有不老的誓言，没有不变的承 诺，踏 上旅途 ，义无 反顾。 40、对时间的价值没有没有深切认识 的人， 决不会 坚韧勤 勉。
16、业余生活要有意义，不要越轨。——华盛顿 17、一个人即使已登上顶峰，也仍要自强不息。——罗素·贝克 18、最大的挑战和突破在于用人，而用人最大的突破在于信任人。——马云 19、自己活着，就是为了使别人过得更美好。——雷锋 20、要掌握书，莫被书掌握；要为生而读，莫为读而生。——布尔沃
一种动物活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用[发明专利]
![一种动物活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b527ddcf0722192e4436f61c.png)
专利名称：一种动物活疫苗耐热冻干保护剂、其制备方法及应用
专利类型：发明专利
发明人：马良,刘萌,邵葳,周建民,潘春刚
申请号：CN201310553466.X
申请日：20131108
公开号：CN103656660A
公开日：
20140326
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供了一种动物活疫苗耐热冻干保护剂，各成分含量为：乳糖80-200g/L、水解乳白蛋白10-40g/L、聚乙烯吡咯烷酮5-20g/L、甘露醇0-20g/L、谷氨酸钠5-20g/L、精氨酸盐酸盐5-15g/L、水解蚕丝蛋白10-30g/L，加水溶解后高压灭菌制得。
将冻干保护剂与病毒液混合，冷冻干燥后即得冻干疫苗。
本发明的耐热冻干保护剂配方简单，制备容易，适于大规模生产，对疫苗具有良好的保护功效。
制得的疫苗安全无菌、质量稳定，具有耐热、保存时间长的特点，解决了疫苗在运输过程中需要低温冷冻、贮存不便等问题。
本发明的耐热冻干保护剂可以使猪繁殖与呼吸综合征疫苗和伪狂犬活疫苗在2～8℃条件下保存24个月。
申请人：中牧实业股份有限公司
地址：100070 北京市丰台区南四环西路188号总部基地八区16-19号楼
国籍：CN
代理机构：北京路浩知识产权代理有限公司
代理人：王文君
更多信息请下载全文后查看。
耐热冻干保护剂活疫苗的生产工艺幻灯片
小分子部分（过滤部分） 不匹配的滤芯也会影响保护剂的质量。不合理滤芯 对耐热保护剂中各物质分子吸附过多，致使保护剂 各成分的最终含量低于保护剂配方的要求含量。影 响耐热保护剂活疫苗的产品质量
解决方法： 要求吸附性小的滤芯，最好是进口的。进口滤芯 （Millipore）即可以增加使用次数，除菌效果 又好。国产滤芯吸附性大，而且使用次数少，又 不稳定，影响保护剂的质量
脱脂奶粉、明胶（175、225、325）在冻干过程中的作用 促进升华 易取得均质产品 加热灭菌 扩大细胞相互间的距离
3. 按保护剂功能和性质分类 （1）耐热冻干保护剂 疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变性。如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（PVP）等 （2）填充剂 防止组分随水蒸气一起升华逸散。如：甘露醇、明胶等
一.耐热冻干保护剂的分类 二.耐热冻干保护剂作用机理 三.耐热保护剂在配制过程中注意事项 四.耐热冻干保护剂活疫苗冻干工艺的优化 五.耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见 异常现象的处理
1. 耐热保护剂特性 有免疫活性但无药理活性 能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性 在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌 低成本易获取 易灭菌 可2）缓冲剂 （3）冻干加速剂 抗氧化剂 ①自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧，使 冻干样品物料不被氧化 ② 给出电子或氢原子，阻断冻干样品中的氧化链 式反应 ③ 通过抑制氧化酶的活性而防止冻干样品的氧化 变质。如：维生素E、维生素C、硫代硫酸钠、硫脲
缓冲剂 蛋白质具有两性电解质性质，既能和酸又能和碱作 用。在中、性环境中，大多数蛋白质是稳定的 ① 由于蛋白质溶液在冻结过程中，溶液的浓度逐渐 升高。在高浓度时可改变溶液的PH，pH值变化4个单 位导致蛋白质变性，使生物制品失活。 ②在冻干保护剂配方中，需添加适量缓冲剂。如： 磷酸二氢钾、磷酸氢二钠
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
➢ 表面活性剂在冻结和脱水过程中降低冰-水界面 张力所引起的冻结和脱水变形，又能在复水过程 中对活性组分起到润湿剂和重褶皱剂的作用。
➢ 表面活性剂可分为离子型和非离子型。凡是溶于 水时能电离成离子的，称为离子型表面活性剂， 否则，称为非离子型表面活性剂。
➢ 在冻干生物制品测定长期储藏中，表面活性剂并 没有保护作用。
疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变 性。如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（PVP） 等 （2）填充剂 防止组分随水蒸气一起升华逸散。如：甘露醇、明 胶等
8
（3）抗氧化剂 ➢ 自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧 ➢ 阻断冻干样品中氧化链式反应 ➢ 抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过
白质药物的破坏
21
不同氨基酸对微生物的保护 ➢ 甘氨酸、谷氨酸钠－病毒、细菌、HVT ➢ L－精氨酸－POX、HVT、PPV ➢ L-半胱氨酸－ND、IBD、IBV ➢ L-组氨酸－MD、IBD、IBV
22
其它添加剂类 （1）抗氧化剂 （2）缓冲剂 （3）冻干加速剂
➢ 抗氧化剂
①自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧，使
程中氧化变质。如硫代硫酸钠 、维生素E、维生素C （4）酸碱调整剂
将生物制品pH调整到活性物质的最稳定范围进行冷 冻、干燥。如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠
9
4. 按物质的种类分类 糖/多元醇类 聚合物类 表面活性剂类 其它添加剂类
10
糖/多元醇类 ① 单糖：葡萄糖、半乳糖 ② 低聚糖：蔗糖、海藻糖 ③ 多元醇：甘露醇 、山梨醇 、丙三醇 功能和作用: ➢ 糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了
14
聚合物类 如：聚乙烯毗咯烷酮、葡聚糖、牛血清白蛋白 ➢ 聚合物类具有以下的性质： ① 聚合物在冻结过程中优先析出 ② 具有一定的表面活性 ③ 在蛋白质分子之间产生位阻 ④ 提高溶液黏度
15
⑤ 显著提高玻璃化转变温度 ⑥ 抑制小分子赋形剂（如蔗糖）的结晶 ⑦ 抑制溶液pH值变化
16
➢ 聚乙烯毗咯烷酮（PVP K30）
① 常被用作澄清剂、色素稳定剂和胶体稳定剂
② PVP对生物材料的低温保存和冷冻干燥，都是很
好的保护剂
③ 它在脱水干燥过程中又是很好的填充剂，对生
物制品起到很强的支撑作用
④ 在含有缓冲剂的乳酸脱氢酶配方中，10％的PVP
因能抑制磷酸氢二钠的结晶，从而抑制了系统的 pH降低
17
表面活性剂类 降低界面的张力，亲水、亲油基组成的化合物。
冻干样品物料不被氧化
② 给出电子或氢原子，阻断冻干样品中的氧化链
式反应
③ 通过抑制氧化酶的活性而防止冻干样品的氧化
变质。如：维生素E、维生素C、硫代硫酸钠、硫脲
23
➢ 缓冲剂 蛋白质具有两性电解质性质，既能和酸又能和碱作 用。在中、性环境中，大多数蛋白质是稳定的 ① 由于蛋白质溶液在冻结过程中，溶液的浓度逐渐 升高。在高浓度时可改变溶液的PH，pH值变化4个单 位导致蛋白质变性，使生物制品失活。 ②在冻干保护剂配方中，需添加适量缓冲剂。如： 磷酸二氢钾、磷酸氢二钠
原有水的位置起保护作用糖一样，官能团也是羟基
11
➢ 海藻糖 ①具有相对较高的玻璃化转变温度。海藻糖—蛋
白质—水微冰晶的形成而提高，有效防止了水 对玻璃化态的增塑作用 ②较弱的吸湿性 ③内部氢键少，有利于蛋白质分子之间形成氢键 ④化学活性非常低
12
➢ 甘露醇 ①白色 结晶粉末，无臭、味甜，水中易溶 ②无菌滤液稳定，不易被氧化 ③提供支持结构 ④不与活性组分发生反应 ⑤1.4%PVP冻干样品脆断力为142g，有收缩迹象，与
耐热冻干保护剂活疫苗生产工艺 技术要点
1
一.耐热冻干保护剂的分类 二.耐热冻干保护剂作用机理 三.耐热保护剂在配制过程中注意事项 四.耐热冻干保护剂活疫苗冻干工艺的优化 五.耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见
异常现象的处理
2
一. 耐热冻干保护剂基质的分类
1. 耐热保护剂特性 – 有免疫活性但无药理活性 – 能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性 – 在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌 – 低成本易获取 – 易灭菌 – 可溶性 – 外形美观
3
2. 按相对分子量分类 低分子化合物—提高微生物存活率形成均一悬液。
①酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸 ②中性物质：乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇 ③碱性物质：精氨酸、组氨酸 高分子化合物—对微生物保护作用，促进升华形 成耐热骨架阻断热传导和热辐射。如：白蛋白、 明胶、蛋白胨、脱脂奶粉
4
明胶 ➢ Sigma公司：175、225、325 ➢ 水解明胶：德国、美国 ➢ 国产明胶（北京、上海）
5
脱脂奶粉 ➢ Difco脱脂奶粉 ➢ 国产脱脂奶粉 ➢ 制备酸奶用，无抗生物素 ➢ 食品用脱脂奶粉 ➢ 工业用，沉淀剂、絮凝剂
6
脱脂奶粉、明胶（175、225、325）在冻干过程中 的作用
➢ 促进升华 ➢ 易取得均质产品 ➢ 加热灭菌 ➢ 扩大细胞相互间的距离
7
3. 按保护剂功能和性质分类 （1）耐热冻干保护剂
① 甘氨酸、谷氨酸或谷氨酸钠 ② L-半胱氨酸 ③ L-组氨酸 ④ L-精氨酸 ⑤ 复合氨基酸（199、MEM）
20
➢ 甘氨酸 ①低浓度甘氨酸可通过抑制10或100mol/L磷酸缓冲
盐结晶，所致pH值的改变而阻止蛋白质药物变性 ②可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集 ③能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋
甘露醇联合使用，抗断裂的强度可提高3～25倍， 保证冻干物料的颜色和质地均匀，没有收缩
13
➢ 山梨醇
① 山梨醇是甘露醇的同分异构体，但其溶解度比
甘露醇大，在常温下黏稠状透明液体，有旋光性； 略有甜味，具有吸湿性，高温下不稳定。在冷冻 干燥配方中，山梨醇用作填充剂
② 与PVPk30合用减少产品裂纹，易碎性
18
氨基酸类保护剂 ➢ 氨基酸是蛋白质的基本构成单位，其中最主要
的是α-氨基酸。它是由一个氨基（-NH2）、一 个羧基（-COOH）、一个氢原子（-H）和一个R 基团（-R）连接在一个α碳原子所组成 ➢ 常用的氨基酸类的保护剂：甘氨酸、谷氨酸、 精氨酸、组氨酸 ➢ 甘氨酸是最好的填充剂
19
➢ 氨基酸
➢ 表面活性剂可分为离子型和非离子型。凡是溶于 水时能电离成离子的，称为离子型表面活性剂， 否则，称为非离子型表面活性剂。
➢ 在冻干生物制品测定长期储藏中，表面活性剂并 没有保护作用。
疫苗在冻结和干燥过程中，防止活性组分发生变 性。如：海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯酮（PVP） 等 （2）填充剂 防止组分随水蒸气一起升华逸散。如：甘露醇、明 胶等
8
（3）抗氧化剂 ➢ 自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧 ➢ 阻断冻干样品中氧化链式反应 ➢ 抑制氧化酶的活性，防止样品在冷冻干燥及储藏过
白质药物的破坏
21
不同氨基酸对微生物的保护 ➢ 甘氨酸、谷氨酸钠－病毒、细菌、HVT ➢ L－精氨酸－POX、HVT、PPV ➢ L-半胱氨酸－ND、IBD、IBV ➢ L-组氨酸－MD、IBD、IBV
22
其它添加剂类 （1）抗氧化剂 （2）缓冲剂 （3）冻干加速剂
➢ 抗氧化剂
①自身氧化，消耗冻干样品内部和环境中的氧，使
程中氧化变质。如硫代硫酸钠 、维生素E、维生素C （4）酸碱调整剂
将生物制品pH调整到活性物质的最稳定范围进行冷 冻、干燥。如：磷酸二氢钾、磷酸氢二钠
9
4. 按物质的种类分类 糖/多元醇类 聚合物类 表面活性剂类 其它添加剂类
10
糖/多元醇类 ① 单糖：葡萄糖、半乳糖 ② 低聚糖：蔗糖、海藻糖 ③ 多元醇：甘露醇 、山梨醇 、丙三醇 功能和作用: ➢ 糖与生物制品活性组分的分子形成氢键而代替了
14
聚合物类 如：聚乙烯毗咯烷酮、葡聚糖、牛血清白蛋白 ➢ 聚合物类具有以下的性质： ① 聚合物在冻结过程中优先析出 ② 具有一定的表面活性 ③ 在蛋白质分子之间产生位阻 ④ 提高溶液黏度
15
⑤ 显著提高玻璃化转变温度 ⑥ 抑制小分子赋形剂（如蔗糖）的结晶 ⑦ 抑制溶液pH值变化
16
➢ 聚乙烯毗咯烷酮（PVP K30）
① 常被用作澄清剂、色素稳定剂和胶体稳定剂
② PVP对生物材料的低温保存和冷冻干燥，都是很
好的保护剂
③ 它在脱水干燥过程中又是很好的填充剂，对生
物制品起到很强的支撑作用
④ 在含有缓冲剂的乳酸脱氢酶配方中，10％的PVP
因能抑制磷酸氢二钠的结晶，从而抑制了系统的 pH降低
17
表面活性剂类 降低界面的张力，亲水、亲油基组成的化合物。
冻干样品物料不被氧化
② 给出电子或氢原子，阻断冻干样品中的氧化链
式反应
③ 通过抑制氧化酶的活性而防止冻干样品的氧化
变质。如：维生素E、维生素C、硫代硫酸钠、硫脲
23
➢ 缓冲剂 蛋白质具有两性电解质性质，既能和酸又能和碱作 用。在中、性环境中，大多数蛋白质是稳定的 ① 由于蛋白质溶液在冻结过程中，溶液的浓度逐渐 升高。在高浓度时可改变溶液的PH，pH值变化4个单 位导致蛋白质变性，使生物制品失活。 ②在冻干保护剂配方中，需添加适量缓冲剂。如： 磷酸二氢钾、磷酸氢二钠
原有水的位置起保护作用糖一样，官能团也是羟基
11
➢ 海藻糖 ①具有相对较高的玻璃化转变温度。海藻糖—蛋
白质—水微冰晶的形成而提高，有效防止了水 对玻璃化态的增塑作用 ②较弱的吸湿性 ③内部氢键少，有利于蛋白质分子之间形成氢键 ④化学活性非常低
12
➢ 甘露醇 ①白色 结晶粉末，无臭、味甜，水中易溶 ②无菌滤液稳定，不易被氧化 ③提供支持结构 ④不与活性组分发生反应 ⑤1.4%PVP冻干样品脆断力为142g，有收缩迹象，与
耐热冻干保护剂活疫苗生产工艺 技术要点
1
一.耐热冻干保护剂的分类 二.耐热冻干保护剂作用机理 三.耐热保护剂在配制过程中注意事项 四.耐热冻干保护剂活疫苗冻干工艺的优化 五.耐热冻干保护剂活疫苗在冻干过程中常见
异常现象的处理
2
一. 耐热冻干保护剂基质的分类
1. 耐热保护剂特性 – 有免疫活性但无药理活性 – 能在冻干和保存时维持疫苗的稳定性 – 在初次干燥时适宜的温度下疫苗不倒塌 – 低成本易获取 – 易灭菌 – 可溶性 – 外形美观
3
2. 按相对分子量分类 低分子化合物—提高微生物存活率形成均一悬液。
①酸性物质：谷氨酸、天冬氨酸、乳酸 ②中性物质：乳糖、蔗糖、海藻糖、山梨醇 ③碱性物质：精氨酸、组氨酸 高分子化合物—对微生物保护作用，促进升华形 成耐热骨架阻断热传导和热辐射。如：白蛋白、 明胶、蛋白胨、脱脂奶粉
4
明胶 ➢ Sigma公司：175、225、325 ➢ 水解明胶：德国、美国 ➢ 国产明胶（北京、上海）
5
脱脂奶粉 ➢ Difco脱脂奶粉 ➢ 国产脱脂奶粉 ➢ 制备酸奶用，无抗生物素 ➢ 食品用脱脂奶粉 ➢ 工业用，沉淀剂、絮凝剂
6
脱脂奶粉、明胶（175、225、325）在冻干过程中 的作用
➢ 促进升华 ➢ 易取得均质产品 ➢ 加热灭菌 ➢ 扩大细胞相互间的距离
7
3. 按保护剂功能和性质分类 （1）耐热冻干保护剂
① 甘氨酸、谷氨酸或谷氨酸钠 ② L-半胱氨酸 ③ L-组氨酸 ④ L-精氨酸 ⑤ 复合氨基酸（199、MEM）
20
➢ 甘氨酸 ①低浓度甘氨酸可通过抑制10或100mol/L磷酸缓冲
盐结晶，所致pH值的改变而阻止蛋白质药物变性 ②可阻止冻干过程中重组人生长激素的聚集 ③能升高成品的塌陷温度，阻止因塌陷而引起的蛋
甘露醇联合使用，抗断裂的强度可提高3～25倍， 保证冻干物料的颜色和质地均匀，没有收缩
13
➢ 山梨醇
① 山梨醇是甘露醇的同分异构体，但其溶解度比
甘露醇大，在常温下黏稠状透明液体，有旋光性； 略有甜味，具有吸湿性，高温下不稳定。在冷冻 干燥配方中，山梨醇用作填充剂
② 与PVPk30合用减少产品裂纹，易碎性
18
氨基酸类保护剂 ➢ 氨基酸是蛋白质的基本构成单位，其中最主要
的是α-氨基酸。它是由一个氨基（-NH2）、一 个羧基（-COOH）、一个氢原子（-H）和一个R 基团（-R）连接在一个α碳原子所组成 ➢ 常用的氨基酸类的保护剂：甘氨酸、谷氨酸、 精氨酸、组氨酸 ➢ 甘氨酸是最好的填充剂
19
➢ 氨基酸