细胞工程论文(胚胎干细胞)

细胞工程

课程论文

题目：胚胎干细胞在生物医学方面的研究及用学号：20100412310035

姓名：周文斌

年级：2010级

专业：生物工程（1）班

指导教师：

完成日期：2013 年11 月28 日

成绩：

胚胎干细胞在生物医学方面的研究及应用

摘要：干细胞，在医学中被称为“万用细胞”，是一类具有自我更新和分化潜能的细胞，在生命的生长与发育中其起主干作用的原始细胞。本文即以干细胞为基础，从胚胎干细胞概念出发，介绍胚胎干细胞的生物学特性，对近年来国内外胚胎干细胞的研究历程做出梳理与总结，并对其研究成果、应用前景及存在问题作出概述。

关键词：干细胞；胚胎干细胞；生物学特性；研究历程及成果；应用前景；存在问题

一、干细胞

干细胞(stem cells, SC)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞(totipotent stem cell,TSC)、多能干细胞（pluripotent stem cell）和单能干细胞（unipotent stem cell）。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。

二、胚胎干细胞（ESC）

胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESC）是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞[1]。它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。1981年，埃文斯（Evans）和考夫曼（Kaufman）从小鼠胚囊内细胞团建立了未分化的小鼠胚胎干细胞[2,3]。1998年，汤姆森（Thomson）在体外受精5 天的人囊胚中成功分离出hES细胞, 体外培养维持不分化状态均传代30 代以上,建立了人的胚胎干细胞系开创了胚胎干细胞的新纪元[4]。

三、生物学特性

1、形态学特征

ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞质胞浆少，结构简单。体外培养时，细胞排列紧密，呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色，ES细胞呈棕红色，而周围的成纤维细胞呈淡黄色[5]。

2、全能性或多能性

ES 细胞全能性或多能性的基础是其具有的高度的分化潜能。细胞分化终究归结为在胚胎发育过程中基因组中的特定基因按一定顺序相继活化和表达, 所以,细胞全能性的实质是细胞基因组中决定蛋白质编码的所有基因按一定顺序表达。细胞全能性或多能性与细胞分化状态的相对稳定性密切相关。细胞分化具有相对的稳定性, 但在一定条件下, 细胞分化又是可逆的。低等生物细胞和高等动物的早期胚胎细胞具有全能性, 但用成年绵羊的乳腺细胞和胎儿成纤维细胞为供体进行核移植生出了绵羊羔,这表明:不但未分化的胚胎细胞具有全能性, 已分化的体细胞在特定条件下经过脱分化( Dedifferent iation) 也具有全能性。已分化的细胞具有全能性的前提条件是这种细胞在体外诱导进入休眠状态。细胞全能性是细胞核基因在不断变化的胞质环境的作用下有次序、有系统地表达的结果,在分化的细胞内存在有可逆性修饰的遗传物质。但并非所有的体细胞均具有全能性,例如红细胞, 在成熟时失去细胞核, 丧失了可逆性分化的遗传物质。

四、研究历程及成果

1、60年代，几个近亲种系的小鼠睾丸畸胎瘤的研究表明其来源于胚胎生殖细胞（embryonic germ cells, EG细胞），此工作确立了胚胎癌细胞（embryonic carcinoma cells, EC细胞）是一种干细胞[6]。

2、1981年，Evan, Kaufman 和Martin从小鼠胚泡内细胞群分离出小鼠ES细胞。他们建立了小鼠ES细胞体外培养条件。由这些细胞产生的细胞系有正常的二倍型，像原生殖细胞一样产生三个胚层的衍生物。将ES细胞注入上鼠，能诱导形成畸胎瘤[2,3]。

3、1992 年, 两组科学家直接从受精后8～12 天的鼠胚中成功分离出mEG细胞【7，8】。

1994年，通过体外授精和病人捐献的人胚泡处于2-原核期。胚泡内细胞群在培养中得以保存其周边有滋养层细胞聚集，ES样细胞位于中央。

4、1998年美国有两个小组分别培养出了人的多能( pluripotent )干细胞：James

A. Thomson在Wisconsin大学领导的研究小组从人胚胎组织中培养出了干细胞株[4]。他们使用的方法是：人卵体外受精后，将胚胎培育到囊胚阶段，提取 inner cell mass细胞，建立细胞株。经测试这些细胞株的细胞表面marker 和酶活性，证实他们就是全能干细胞。用这种方法，每个胚胎可取得15－20干细胞用于培养。John D. Gearhart在Johns Hopkins大学领导的另一个研究小组也从人胚胎组织中建立了干细胞株。他们的方法是：从受精后5－9周人工流产的胚胎中提取生殖母细胞( primordial germ cell )。由此培养的细胞株，证实具有全能干细胞的特征。

5、2000年，由Pera、Trounson 和Bongso 领导的新加坡和澳大利亚科学家从治疗不育症的夫妇捐赠的胚泡内细胞群中分离得到人ES细胞，这些细胞体外增殖，保持正常的核型，自发分化形成来源于三个胚层的体细胞系。将其注入免疫缺陷小鼠错开内产生畸胎瘤。

6、2002年重庆妇幼保健院生殖与遗传研究所完成了中国首例囊胚胎培养技术。该技术不仅大提高了试管婴儿的妊娠成功率，还有效地降低多胞胎发生率。美国哈佛大学医学院正与重庆妇幼保健院生殖与遗传研究所合作，人工共同研究干细胞的分化，为“克隆”人体器官创造条件。

7、2003，建立了人类皮肤细胞与兔子卵细胞种间融合的方法，为人胚胎干细胞研究提供了新的途径。

8、2008年1月美国加利福尼亚州从事干细胞研究的Stemagen公司采用克隆多利的技术来建立人体晶胚，首次宣布由人体细胞成功克隆人体胚胎，虽然这些比针头还要小的晶胚细胞只存活了5天时间，它们却被视为治疗阿尔茨海默症、帕金森氏症等疾病的一个里程碑.

9、2009年2月2日山东省干细胞工程技术研究中心宣布首次成功克隆人类囊胚，此研究选择了健康卵细胞志愿捐献者12人，经过促排卵共获得135枚卵细胞，其中77枚卵细胞进行了预实验，58枚卵细胞用于实验，最终成功获取囊胚5枚。其中4枚囊胚的供体细胞来源于正常人皮肤纤维细胞，1枚来源于帕金森患者外周血淋巴细胞。因而，揭示了在构建胚胎发育过程中的部分科学和技术问题，这使治疗性克隆研究向前迈进了一大步。