仪器分析电泳技术
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2011-1-27
2）加样与电泳 蛋白质样品在加样前需要和样品 缓 ） 冲液混合并煮沸5min，使蛋白质发生溶解、变 冲液混合并煮沸 ，使蛋白质发生溶解、 性。样品缓冲液中的甘油使样品溶液的密度变 避免加样后样品上漂； 巯基乙醇使蛋白 大，避免加样后样品上漂；2-巯基乙醇使蛋白 质 中的二硫键断裂，并不再形成新的二硫键， 中的二硫键断裂，并不再形成新的二硫键，溴 酚蓝是指示剂，显示电泳前沿线的位置。 酚蓝是指示剂，显示电泳前沿线的位置。将制 胶板中的密封教条除去，装入电泳槽， 胶板中的密封教条除去，装入电泳槽，在正负 极水槽中加入电极缓冲液， 极水槽中加入电极缓冲液，将预处理后的蛋白 质样品加入对应的梳空，装好电泳槽， 质样品加入对应的梳空，装好电泳槽，接好电 开始电泳。 源，开始电泳。施加在每块胶板上的电流强度 应该在30mA左右。 左右。 应该在 左右
2011-1-27
（三）转移电泳
2、试剂和仪器 转移电泳槽、转移缓冲液 转移电泳分槽式和半干式两种，由于半 干式转移有方便、快速和费用低等特点逐 渐成为人们主要选择的方法。
2011-1-27
（四）双向电泳
电泳技术
一、基本原理 二、电泳类型 三、操作规程
一、基本原理
电泳：在溶液中， 电泳：在溶液中，带电粒子在外加电场的作 用下向相反电极移动的现象叫做电泳。 用下向相反电极移动的现象叫做电泳。 电泳分离方法主要就是根据大分子的分子量 及电性差异将大分子在电场中彼此分来的。 及电性差异将大分子在电场中彼此分来的。 简单的说， 简单的说，这些带电粒子在电泳时的迁移率 与粒子所带的电荷量成正比， ，与粒子所带的电荷量成正比，与分子量大 小成反比。 小成反比。
2011-1-27
(2)BIO(2)BIO-RAD 水平电泳仪操作规程
1）打开电源 插上电泳仪电源，打开右侧面后部开关。主面板指示灯亮。 2）参数设置 电泳仪技术参数如下，在电泳仪使用时不要超过额定值。 最大电压：300 V 最大电流：400 mA 最大功率：75 W 最大时间：999 min 按下电泳仪主面板上“V/A Constant”按纽，进行恒压或恒流模式选择， “V”和 “A”上的指示灯来回切换，同时数显面板左方的“V”“mA”灯也 跟着切换。 恒压模式时，切换到“V”灯亮后，通过“+”和“－”进行调节电压数值 到 需要值。 恒流模式时与上一致。切换到“A”灯亮，设置所需电流值。 按下数显面板左方的“V/mA/时钟”按纽到时钟旁灯亮，可通过“+”“－” 调节设置时间值。 3）接上电泳槽电源线。意红色线插红色接口，黑色线插黑色接口。 4）按下“run/pause”按纽，“run”上的灯亮时开始电泳。 5）电泳过程中按下“V/mA/时钟”按纽可以当前运行电流电压和时间参数。 6）电泳过程中，可以按下“run/pause”按纽暂停电泳和继续电泳。 7）电泳完成后，按下“stop”按纽停止电泳。
2011-1-27
5、结果与讨论 、 1）制胶与实验结果重复性的关系：由于每 ）制胶与实验结果重复性的关系： 次制胶时这种试剂量的加入量有误差， 次制胶时这种试剂量的加入量有误差， 采用一次配制多块胶板的方法可大大提 高实验的重复性。 高实验的重复性。 2）样品分子量与凝胶浓度的关系：目标蛋 ）样品分子量与凝胶浓度的关系： 白质的分子量较大时， 白质的分子量较大时，应采用浓度较低 的凝胶，以获得较高的分辨率；反之， 的凝胶，以获得较高的分辨率；反之， 对分子量较小的蛋白质， 对分子量较小的蛋白质，应采用浓度较 高的凝胶。 高的凝胶。
2011-1-27
二、电泳类型
（二）琼脂糖凝胶电泳 （三）转移电泳 （四）双向电泳
2011-1-27
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、概述 、 聚丙烯酰胺凝胶是由丙稀酰胺和交联剂甲 叉双丙稀酰胺在催化剂的作用下聚合交联 成含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。 成含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中SDS-聚丙烯酰 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中 聚丙烯酰 胺凝胶电泳是对蛋白质及小分子核酸进行 量化、比较和特性鉴定的一种快速方法。 量化、比较和特性鉴定的一种快速方法。 在蛋白质样品中加入SDS后，所有的蛋白 在蛋白质样品中加入 后 质分子都与SDS结合并带有负电荷，因此 结合并带有负电荷， 质分子都与 结合并带有负电荷 蛋白质在电场中的移动主要取决于蛋白质 分子量的大小， 分子量的大小，而于蛋白质本身的等电点 无关。 无关。
2011-1-27
3）染色与脱色 电泳结束后，分离玻璃板，取出 ） 电泳结束后，分离玻璃板， 凝胶进行染色， 凝胶进行染色，可将无色的凝胶直接放入考 马氏亮蓝中振荡染色约1h，再转入脱色液中 马氏亮蓝中振荡染色约 ， 脱色。脱色过程中需要更换3～ 次脱色液 脱色。脱色过程中需要更换 ～4次脱色液 （如果在脱色液中加入海绵和泡沫碎片以吸附 染液中的考马氏亮蓝， 染液中的考马氏亮蓝，可加快脱色速度并且 可不必更换脱色液）。经染色、 ）。经染色 可不必更换脱色液）。经染色、脱色后可得 到条带清晰的凝胶， 到条带清晰的凝胶，在有图象记录和分析的 条件下， 条件下，可用凝胶成像系统对凝胶进行数字化 成像、储存及定量分析。 成像、储存及定量分析。
Βιβλιοθήκη Baidu2011-1-27
4、注意事项 、
1）设置电泳参数时不要超过其能达到的额定值。 ）设置电泳参数时不要超过其能达到的额定值。 2）电泳时电源线正负极不要插反（黑色线对应黑 ）电泳时电源线正负极不要插反（ 色插口，红色线对应红色插口）。 色插口，红色线对应红色插口）。 3）电泳槽放置时一定要电源线的一面朝上放置， ）电泳槽放置时一定要电源线的一面朝上放置， 以免向下放置时折断电源线。 以免向下放置时折断电源线。 4）电泳仪可以同时接四个电泳槽，如同时接多个 ）电泳仪可以同时接四个电泳槽， 电泳槽，应同时接上开始电泳。 电泳槽，应同时接上开始电泳。
2011-1-27
（二）琼脂糖凝胶电泳
1、概述 、 聚丙烯酰胺凝胶电泳对于分离生物 大分子具有较高的分辨率， 大分子具有较高的分辨率，但由于核酸分 子比蛋白质分子大得多， 子比蛋白质分子大得多，只能采用有较大 孔径的琼脂糖凝胶来分离核酸。 孔径的琼脂糖凝胶来分离核酸。由于核酸 分子本身中含有大量的磷酸根， 分子本身中含有大量的磷酸根，所以核酸 带有负电荷，在电场中会向正极移动。 带有负电荷，在电场中会向正极移动。
2011-1-27
3）凝胶聚合时间长短与凝胶质量的关系： ）凝胶聚合时间长短与凝胶质量的关系： 凝胶的聚合应该在30～60min内完成，聚 凝胶的聚合应该在 ～ 内完成， 内完成 合太快凝胶不均匀，太慢则浪费时间。 合太快凝胶不均匀，太慢则浪费时间。 聚合的快慢可以增减TEMED（四甲基乙 聚合的快慢可以增减 （ 二胺）的加入量来改变。 二胺）的加入量来改变。 4）电泳的快慢与电流之间强弱的关系：电 ）电泳的快慢与电流之间强弱的关系： 流强时电泳速度加快， 流强时电泳速度加快，但产热较多影响 奋力效果；电流过低时产热虽少， 奋力效果；电流过低时产热虽少，但对 蛋白质游离不利。 蛋白质游离不利。常用的电流强度应该 是每块胶板30mA左右。 左右。 是每块胶板 左右
2011-1-27
5、结果和讨论 、 由于通常在凝胶缓冲液中加入了荧光物 质溴化乙锭，荧光在254nm波长的紫外光照射 质溴化乙锭，荧光在 波长的紫外光照射 下产生红色荧光，可在紫外光下照相， 下产生红色荧光，可在紫外光下照相，或者采 用图像记录系统储存试验结果。 用图像记录系统储存试验结果。 琼脂糖凝胶电泳的制胶过程比聚丙烯酰 胺凝胶电泳要简单得多。琼脂糖浓度得选择与 胺凝胶电泳要简单得多。 聚丙烯酰胺凝胶电泳类似， 聚丙烯酰胺凝胶电泳类似，即在分离分子量较 大的核酸时，应选用较小的琼脂糖浓度；反之， 大的核酸时，应选用较小的琼脂糖浓度；反之， 则选用较大的琼脂糖浓度。 则选用较大的琼脂糖浓度。
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2、试剂 、 丙稀酰胺溶液中含有甲叉双丙稀酰胺 过硫酸铵（聚合的引发剂） 过硫酸铵（聚合的引发剂） 四甲基乙二胺是加速剂， 四甲基乙二胺是加速剂，可加快聚合的速度
2011-1-27
3、仪器 、 垂直板电泳槽和电泳仪
2011-1-27
4、操作步骤 、
1） 倒制胶板 首先选择凝胶的浓度，高浓度凝胶的 孔径较 ） 首先选择凝胶的浓度， 小 对于小分子量的蛋白质有较高的分辨率， 对于小分子量的蛋白质有较高的分辨率，相反低浓度的凝胶 对于大分子量的蛋白质有较高的分辨率。 对于大分子量的蛋白质有较高的分辨率。将两玻璃板密封 将所需浓度的分离胶溶液按比例加入烧杯混匀。 好，将所需浓度的分离胶溶液按比例加入烧杯混匀。倒入密 封好的玻璃板间隙中（如果采用倒胶槽， 封好的玻璃板间隙中（如果采用倒胶槽，可将胶液直接倒入 倒胶槽）用少量正丁醇覆盖液面，以隔绝空气， 倒胶槽）用少量正丁醇覆盖液面，以隔绝空气，并产生整齐 的上液面（注意：由于丙稀酰胺是神经毒， 的上液面（注意：由于丙稀酰胺是神经毒，在制胶过程中需 要戴手套，凝胶聚合后则不再有毒性），胶液的聚合大约需 要戴手套，凝胶聚合后则不再有毒性），胶液的聚合大约需 ）， 要半小时， 要半小时，随后倒掉胶板上沿的液体并加入配置好的浓缩胶 溶液，插入梳子，聚合后移去梳子。 溶液，插入梳子，聚合后移去梳子。
2011-1-27
（三）转移电泳
1、概述 、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要功能是将混 聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要功能是将混 离成可观察的条带， 合的蛋白质样品分 离成可观察的条带，但如果需 要用特定抗体在凝胶中寻找特异的蛋白质条带或 需要切割下某一条带进行氨基酸序列分析， 需要切割下某一条带进行氨基酸序列分析，在凝 胶上操作就极为不方便， 胶上操作就极为不方便，这时就需要将所有蛋白 质转移或印记到硝酸纤维素膜上， 质转移或印记到硝酸纤维素膜上，这一过程叫做 蛋白质转移电泳，也叫做蛋白质印记。 蛋白质转移电泳，也叫做蛋白质印记。 在电场作用下， 在电场作用下，带负电荷的蛋白质分子向正 极移动，在转移膜的表面沉积下来， 极移动，在转移膜的表面沉积下来，转移到膜上 的蛋白质条带的分布形式与原来的凝胶中的蛋白 质分布形式完全一样。 质分布形式完全一样。
2011-1-27
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳
为了增加分辨率通常采用不连续凝胶体系， 为了增加分辨率通常采用不连续凝胶体系， 该体系是由浓缩胶、分离胶两部分组成。 该体系是由浓缩胶、分离胶两部分组成。 浓缩胶与分离胶由于有不同的凝胶浓度和 缓冲液pH值 缓冲液 值，蛋白质样品在浓缩胶中受 到浓缩效应、 到浓缩效应、电荷效应和分子筛效应的影 可被浓缩成一条极为狭窄的条带， 响，可被浓缩成一条极为狭窄的条带，因 此当蛋白质样品进入分离胶时就形成了彼 此分离的清晰条带，大大提高了分辨率。 此分离的清晰条带，大大提高了分辨率。
2011-1-27
（二）琼脂糖凝胶电泳
2、试剂和仪器 、 水平电泳槽、 水平电泳槽、电泳仪 溴化乙锭是荧光染料与核酸结合后在紫外 线照射下可产生橙红色荧光， 线照射下可产生橙红色荧光，由于溴化乙 锭有潜在的致癌性，操作时需要戴手套。 锭有潜在的致癌性，操作时需要戴手套。
2011-1-27
3、操作方法 、 （1）含有琼脂糖的缓冲液经微波炉加热后 ） 被溶解，倒入制胶系统中，插入梳子， 被溶解，倒入制胶系统中，插入梳子，琼 脂糖凝固后，拔掉梳子， 脂糖凝固后，拔掉梳子，将塑料托盘放入 电泳槽，加入缓冲液， 电泳槽，加入缓冲液，经加样后即可接通 电源进行电泳。 电源进行电泳。
2011-1-27
二、电泳类型
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳 电泳支持介质分类 第一类： 第一类：纸、醋酸纤维素膜 分离原理： 分离原理：基于蛋白质的电荷密度 分辨率： 分辨率：较低 第二类：淀粉、琼脂糖、 第二类：淀粉、琼脂糖、 聚丙烯酰胺（分辨率高，机械强度好） 聚丙烯酰胺（分辨率高，机械强度好） 分离原理： 分离原理：分子筛效应 分辨率： 分辨率：较高
2）加样与电泳 蛋白质样品在加样前需要和样品 缓 ） 冲液混合并煮沸5min，使蛋白质发生溶解、变 冲液混合并煮沸 ，使蛋白质发生溶解、 性。样品缓冲液中的甘油使样品溶液的密度变 避免加样后样品上漂； 巯基乙醇使蛋白 大，避免加样后样品上漂；2-巯基乙醇使蛋白 质 中的二硫键断裂，并不再形成新的二硫键， 中的二硫键断裂，并不再形成新的二硫键，溴 酚蓝是指示剂，显示电泳前沿线的位置。 酚蓝是指示剂，显示电泳前沿线的位置。将制 胶板中的密封教条除去，装入电泳槽， 胶板中的密封教条除去，装入电泳槽，在正负 极水槽中加入电极缓冲液， 极水槽中加入电极缓冲液，将预处理后的蛋白 质样品加入对应的梳空，装好电泳槽， 质样品加入对应的梳空，装好电泳槽，接好电 开始电泳。 源，开始电泳。施加在每块胶板上的电流强度 应该在30mA左右。 左右。 应该在 左右
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（三）转移电泳
2、试剂和仪器 转移电泳槽、转移缓冲液 转移电泳分槽式和半干式两种，由于半 干式转移有方便、快速和费用低等特点逐 渐成为人们主要选择的方法。
2011-1-27
（四）双向电泳
电泳技术
一、基本原理 二、电泳类型 三、操作规程
一、基本原理
电泳：在溶液中， 电泳：在溶液中，带电粒子在外加电场的作 用下向相反电极移动的现象叫做电泳。 用下向相反电极移动的现象叫做电泳。 电泳分离方法主要就是根据大分子的分子量 及电性差异将大分子在电场中彼此分来的。 及电性差异将大分子在电场中彼此分来的。 简单的说， 简单的说，这些带电粒子在电泳时的迁移率 与粒子所带的电荷量成正比， ，与粒子所带的电荷量成正比，与分子量大 小成反比。 小成反比。
2011-1-27
(2)BIO(2)BIO-RAD 水平电泳仪操作规程
1）打开电源 插上电泳仪电源，打开右侧面后部开关。主面板指示灯亮。 2）参数设置 电泳仪技术参数如下，在电泳仪使用时不要超过额定值。 最大电压：300 V 最大电流：400 mA 最大功率：75 W 最大时间：999 min 按下电泳仪主面板上“V/A Constant”按纽，进行恒压或恒流模式选择， “V”和 “A”上的指示灯来回切换，同时数显面板左方的“V”“mA”灯也 跟着切换。 恒压模式时，切换到“V”灯亮后，通过“+”和“－”进行调节电压数值 到 需要值。 恒流模式时与上一致。切换到“A”灯亮，设置所需电流值。 按下数显面板左方的“V/mA/时钟”按纽到时钟旁灯亮，可通过“+”“－” 调节设置时间值。 3）接上电泳槽电源线。意红色线插红色接口，黑色线插黑色接口。 4）按下“run/pause”按纽，“run”上的灯亮时开始电泳。 5）电泳过程中按下“V/mA/时钟”按纽可以当前运行电流电压和时间参数。 6）电泳过程中，可以按下“run/pause”按纽暂停电泳和继续电泳。 7）电泳完成后，按下“stop”按纽停止电泳。
2011-1-27
5、结果与讨论 、 1）制胶与实验结果重复性的关系：由于每 ）制胶与实验结果重复性的关系： 次制胶时这种试剂量的加入量有误差， 次制胶时这种试剂量的加入量有误差， 采用一次配制多块胶板的方法可大大提 高实验的重复性。 高实验的重复性。 2）样品分子量与凝胶浓度的关系：目标蛋 ）样品分子量与凝胶浓度的关系： 白质的分子量较大时， 白质的分子量较大时，应采用浓度较低 的凝胶，以获得较高的分辨率；反之， 的凝胶，以获得较高的分辨率；反之， 对分子量较小的蛋白质， 对分子量较小的蛋白质，应采用浓度较 高的凝胶。 高的凝胶。
2011-1-27
二、电泳类型
（二）琼脂糖凝胶电泳 （三）转移电泳 （四）双向电泳
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（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳
1、概述 、 聚丙烯酰胺凝胶是由丙稀酰胺和交联剂甲 叉双丙稀酰胺在催化剂的作用下聚合交联 成含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。 成含有酰胺基侧链的脂肪族大分子化合物。 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中SDS-聚丙烯酰 在聚丙烯酰胺凝胶电泳中 聚丙烯酰 胺凝胶电泳是对蛋白质及小分子核酸进行 量化、比较和特性鉴定的一种快速方法。 量化、比较和特性鉴定的一种快速方法。 在蛋白质样品中加入SDS后，所有的蛋白 在蛋白质样品中加入 后 质分子都与SDS结合并带有负电荷，因此 结合并带有负电荷， 质分子都与 结合并带有负电荷 蛋白质在电场中的移动主要取决于蛋白质 分子量的大小， 分子量的大小，而于蛋白质本身的等电点 无关。 无关。
2011-1-27
3）染色与脱色 电泳结束后，分离玻璃板，取出 ） 电泳结束后，分离玻璃板， 凝胶进行染色， 凝胶进行染色，可将无色的凝胶直接放入考 马氏亮蓝中振荡染色约1h，再转入脱色液中 马氏亮蓝中振荡染色约 ， 脱色。脱色过程中需要更换3～ 次脱色液 脱色。脱色过程中需要更换 ～4次脱色液 （如果在脱色液中加入海绵和泡沫碎片以吸附 染液中的考马氏亮蓝， 染液中的考马氏亮蓝，可加快脱色速度并且 可不必更换脱色液）。经染色、 ）。经染色 可不必更换脱色液）。经染色、脱色后可得 到条带清晰的凝胶， 到条带清晰的凝胶，在有图象记录和分析的 条件下， 条件下，可用凝胶成像系统对凝胶进行数字化 成像、储存及定量分析。 成像、储存及定量分析。
Βιβλιοθήκη Baidu2011-1-27
4、注意事项 、
1）设置电泳参数时不要超过其能达到的额定值。 ）设置电泳参数时不要超过其能达到的额定值。 2）电泳时电源线正负极不要插反（黑色线对应黑 ）电泳时电源线正负极不要插反（ 色插口，红色线对应红色插口）。 色插口，红色线对应红色插口）。 3）电泳槽放置时一定要电源线的一面朝上放置， ）电泳槽放置时一定要电源线的一面朝上放置， 以免向下放置时折断电源线。 以免向下放置时折断电源线。 4）电泳仪可以同时接四个电泳槽，如同时接多个 ）电泳仪可以同时接四个电泳槽， 电泳槽，应同时接上开始电泳。 电泳槽，应同时接上开始电泳。
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（二）琼脂糖凝胶电泳
1、概述 、 聚丙烯酰胺凝胶电泳对于分离生物 大分子具有较高的分辨率， 大分子具有较高的分辨率，但由于核酸分 子比蛋白质分子大得多， 子比蛋白质分子大得多，只能采用有较大 孔径的琼脂糖凝胶来分离核酸。 孔径的琼脂糖凝胶来分离核酸。由于核酸 分子本身中含有大量的磷酸根， 分子本身中含有大量的磷酸根，所以核酸 带有负电荷，在电场中会向正极移动。 带有负电荷，在电场中会向正极移动。
2011-1-27
3）凝胶聚合时间长短与凝胶质量的关系： ）凝胶聚合时间长短与凝胶质量的关系： 凝胶的聚合应该在30～60min内完成，聚 凝胶的聚合应该在 ～ 内完成， 内完成 合太快凝胶不均匀，太慢则浪费时间。 合太快凝胶不均匀，太慢则浪费时间。 聚合的快慢可以增减TEMED（四甲基乙 聚合的快慢可以增减 （ 二胺）的加入量来改变。 二胺）的加入量来改变。 4）电泳的快慢与电流之间强弱的关系：电 ）电泳的快慢与电流之间强弱的关系： 流强时电泳速度加快， 流强时电泳速度加快，但产热较多影响 奋力效果；电流过低时产热虽少， 奋力效果；电流过低时产热虽少，但对 蛋白质游离不利。 蛋白质游离不利。常用的电流强度应该 是每块胶板30mA左右。 左右。 是每块胶板 左右
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5、结果和讨论 、 由于通常在凝胶缓冲液中加入了荧光物 质溴化乙锭，荧光在254nm波长的紫外光照射 质溴化乙锭，荧光在 波长的紫外光照射 下产生红色荧光，可在紫外光下照相， 下产生红色荧光，可在紫外光下照相，或者采 用图像记录系统储存试验结果。 用图像记录系统储存试验结果。 琼脂糖凝胶电泳的制胶过程比聚丙烯酰 胺凝胶电泳要简单得多。琼脂糖浓度得选择与 胺凝胶电泳要简单得多。 聚丙烯酰胺凝胶电泳类似， 聚丙烯酰胺凝胶电泳类似，即在分离分子量较 大的核酸时，应选用较小的琼脂糖浓度；反之， 大的核酸时，应选用较小的琼脂糖浓度；反之， 则选用较大的琼脂糖浓度。 则选用较大的琼脂糖浓度。
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2、试剂 、 丙稀酰胺溶液中含有甲叉双丙稀酰胺 过硫酸铵（聚合的引发剂） 过硫酸铵（聚合的引发剂） 四甲基乙二胺是加速剂， 四甲基乙二胺是加速剂，可加快聚合的速度
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3、仪器 、 垂直板电泳槽和电泳仪
2011-1-27
4、操作步骤 、
1） 倒制胶板 首先选择凝胶的浓度，高浓度凝胶的 孔径较 ） 首先选择凝胶的浓度， 小 对于小分子量的蛋白质有较高的分辨率， 对于小分子量的蛋白质有较高的分辨率，相反低浓度的凝胶 对于大分子量的蛋白质有较高的分辨率。 对于大分子量的蛋白质有较高的分辨率。将两玻璃板密封 将所需浓度的分离胶溶液按比例加入烧杯混匀。 好，将所需浓度的分离胶溶液按比例加入烧杯混匀。倒入密 封好的玻璃板间隙中（如果采用倒胶槽， 封好的玻璃板间隙中（如果采用倒胶槽，可将胶液直接倒入 倒胶槽）用少量正丁醇覆盖液面，以隔绝空气， 倒胶槽）用少量正丁醇覆盖液面，以隔绝空气，并产生整齐 的上液面（注意：由于丙稀酰胺是神经毒， 的上液面（注意：由于丙稀酰胺是神经毒，在制胶过程中需 要戴手套，凝胶聚合后则不再有毒性），胶液的聚合大约需 要戴手套，凝胶聚合后则不再有毒性），胶液的聚合大约需 ）， 要半小时， 要半小时，随后倒掉胶板上沿的液体并加入配置好的浓缩胶 溶液，插入梳子，聚合后移去梳子。 溶液，插入梳子，聚合后移去梳子。
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（三）转移电泳
1、概述 、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要功能是将混 聚丙烯酰胺凝胶电泳的主要功能是将混 离成可观察的条带， 合的蛋白质样品分 离成可观察的条带，但如果需 要用特定抗体在凝胶中寻找特异的蛋白质条带或 需要切割下某一条带进行氨基酸序列分析， 需要切割下某一条带进行氨基酸序列分析，在凝 胶上操作就极为不方便， 胶上操作就极为不方便，这时就需要将所有蛋白 质转移或印记到硝酸纤维素膜上， 质转移或印记到硝酸纤维素膜上，这一过程叫做 蛋白质转移电泳，也叫做蛋白质印记。 蛋白质转移电泳，也叫做蛋白质印记。 在电场作用下， 在电场作用下，带负电荷的蛋白质分子向正 极移动，在转移膜的表面沉积下来， 极移动，在转移膜的表面沉积下来，转移到膜上 的蛋白质条带的分布形式与原来的凝胶中的蛋白 质分布形式完全一样。 质分布形式完全一样。
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（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳
为了增加分辨率通常采用不连续凝胶体系， 为了增加分辨率通常采用不连续凝胶体系， 该体系是由浓缩胶、分离胶两部分组成。 该体系是由浓缩胶、分离胶两部分组成。 浓缩胶与分离胶由于有不同的凝胶浓度和 缓冲液pH值 缓冲液 值，蛋白质样品在浓缩胶中受 到浓缩效应、 到浓缩效应、电荷效应和分子筛效应的影 可被浓缩成一条极为狭窄的条带， 响，可被浓缩成一条极为狭窄的条带，因 此当蛋白质样品进入分离胶时就形成了彼 此分离的清晰条带，大大提高了分辨率。 此分离的清晰条带，大大提高了分辨率。
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（二）琼脂糖凝胶电泳
2、试剂和仪器 、 水平电泳槽、 水平电泳槽、电泳仪 溴化乙锭是荧光染料与核酸结合后在紫外 线照射下可产生橙红色荧光， 线照射下可产生橙红色荧光，由于溴化乙 锭有潜在的致癌性，操作时需要戴手套。 锭有潜在的致癌性，操作时需要戴手套。
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3、操作方法 、 （1）含有琼脂糖的缓冲液经微波炉加热后 ） 被溶解，倒入制胶系统中，插入梳子， 被溶解，倒入制胶系统中，插入梳子，琼 脂糖凝固后，拔掉梳子， 脂糖凝固后，拔掉梳子，将塑料托盘放入 电泳槽，加入缓冲液， 电泳槽，加入缓冲液，经加样后即可接通 电源进行电泳。 电源进行电泳。
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二、电泳类型
（一）聚丙烯酰胺凝胶电泳 电泳支持介质分类 第一类： 第一类：纸、醋酸纤维素膜 分离原理： 分离原理：基于蛋白质的电荷密度 分辨率： 分辨率：较低 第二类：淀粉、琼脂糖、 第二类：淀粉、琼脂糖、 聚丙烯酰胺（分辨率高，机械强度好） 聚丙烯酰胺（分辨率高，机械强度好） 分离原理： 分离原理：分子筛效应 分辨率： 分辨率：较高