培养基配制及适用性检查标准操作规程

目的：

建立培养基配制及适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作流程。

范围：

适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。

依据：

《药品生产质量管理规范（2010年修订）》、《中华人民共和国药典》2015年版第四部

职责：

1.微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验可以顺利进行。

2.微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。

内容

1 培养基的申购

根据检验项目、工作量和工作进度的需求，提前一个月进行所需的培养基申购。申购时需指定培养基供应商，必要时进行供应商审计。

2 培养基的验收

2.1 培养基到货后，微生物室检验员应进行验收。验收内容包括核对品名、数量、规格、生产厂商，应与申购单一致；检查培养基包装有无破损、包装是否完整、产品是否在有效期内。

2.2 验收合格后，登记于《培养基领用台账》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。

3 培养基的贮藏

3.1未开封的脱水培养基贮存于阴凉室，使培养基处于低温、干燥、和避光条件下。已

开封的脱水培养基应盖紧，贮存于阴凉库。

3.2灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存待用。灭菌后培养基储存期为7天。

4 培养基的配制

4.1培养基的配制和使用应填写《培养基配制及使用记录》（附记录文件编号：SMP-10-QC-009-02（00））。

4.2培养基配制批号原则：原材料批号-配制日期：比如2011年1月1日配制的培养基，培养基干粉批号000000，配制批号为:000000-110101。配制好的培养基贴《培养基标签》（附记录文件编号：R-SMP-10-QC-009-03）。（注：同一天同一培养基配置多次的，在原批号后加“-”加“数字”表示，如000000-110101-01）

4.3培养基配制方法

4.3.1 使用商品化脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配制，如重量/体积、pH、灭菌条件和操作步骤等。实验室使用各种基础成分制备培养基时，应按照配方准确配制，并记录相关信息如：培养基名称和类型及试剂级别，每个成分物质含量、制造商、批号，pH值，培养基体积/分装体积，灭菌条件（灭菌方式、温度及时间），配制日期、人员等，以便溯源。

4.3.2 水、容器具要求：培养基配制均采用纯化水，特殊说明时采用去离子水和蒸馏水。培养基配制所用容器和配套器具应洁净。对热敏感的培养基如糖发酵培养基其分装容器应先进行预灭菌，以保证培养基的无菌性。

4.3.3 称量与分装：快速称量所需量的脱水合成培养基（必要时佩戴口罩或在通风柜中操作，以防吸入含有有毒物质的培养基粉末）。以免吸潮。先加入适量的水，充分混合。注意避免培养基结块，然后加水至所需的量。根据说明书要求选择是否加热。分装体积不超过容器体积的2/3。配制斜面等含琼脂的培养基也需加热煮沸至完全溶解后分装。

4.4 pH 值的测定和调整

pH值采用pH计进行检测，温度25±2℃。取配后培养基10ml进行灭前pH测定。另取20ml于50ml三角瓶与同批配制培养基同时灭菌冷却至25±2℃检测灭后PH。灭菌前后pH应按下表进行控制。灭菌前可使用浓度约为40g/L（约1mol/L）的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L（约1mol/L）的盐酸溶液进行缓慢调整，避免反复调整而增加离子浓度。灭菌后培养基不符合标准时视为不合格，不进行使用。

4.5 培养基灭菌

培养基和试剂应采用湿热灭菌法或过滤除菌法。湿热灭菌在高压灭菌锅或蒸汽灭菌柜中进行，容器具若需湿热灭菌时，灭菌条件为121℃灭菌30 min。培养基严格按说明书条件进行灭菌。培养基灭菌后应立即取出，不得存放于高压灭菌器中。

5 培养基的质量控制

5.1计数培养基适用性检查

5.1.1菌种及菌液制备

菌种：试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。

菌液制备：按表1规定程序培养各试验菌株。取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，35℃培养18～24小时，取上述培养物1ml加入9ml 0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10-7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml的菌液备用；取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，25℃培养2～3天。取上述培养物1ml 加入9ml 0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10-7，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml的菌液备用；取黑曲霉的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基，经25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后吸出孢子悬液至无菌试管内，取上述培养物1ml加入9ml 0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10-7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml的菌液备用。

菌液制备后若在室温下放置，应在2 小时内使用；若保存在2〜8℃，可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2〜8℃,在验证过的贮存期内使用。

5.1.2 阴性对照

为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌生长。如阴性对照有菌生长，应进行偏差调查。

5.1.3培养基适用性检査

微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基