小鼠骨髓中嗜多染红细胞(PCE)微核实验简介-推荐下载
小鼠骨髓多染红细胞微核实验
小鼠骨髓多染红细胞微核实验目的和意义微核试验用于检测受试物在哺乳动物所引起的染色体或原红细胞有丝分裂器损伤，以确定该受试物有无诱变性。
通过本次实验学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞微核测定方法。
原理正常细胞的有丝分裂的分裂中期，染色体均匀地排列在赤道板附近，到分裂后期便分成两份，分别向两极移动，并在末期分别形成两个子细胞的核。
如果由于某种化学物质的作用而使分裂期的细胞染色体受到损伤，在中期就会观察到染色体断裂，在进入分裂后期时，这种断片落后于向两极移动的染色体而滞留在赤道板附近，当其它染色体分别形成子细胞核时，这些落后的断片便独立形成微核，如果纺锤体功能受损，也可产生微核。
由上可见，微核的出现和染色体畸变有密切相关性，同时微核的观察是在细胞的间期，不必分析中期相，这比分析染色体畸变要方便一些。
进行骨髓细胞微核分析一般观察红细胞，记数嗜多染红细脑中微核出现率。
器材与试剂1、器材载玻片、推片、血细胞计数器、滴管、注射器、解剖剪、镊子、止血钳、晾片架、滤纸、电吹风机、染色缸、研钵、恒温水浴箱、光学生物显微镜（或荧光显微镜）。
2、试剂小牛血清；甲醇；吉姆萨储备液：将1g 吉姆萨倒入研钵内，加入少许甘油混合研细，分次倒入剩余的甘油至66ml，转移到烧杯内（或试剂瓶内）。
放入55~60℃水浴中并不断搅动至2h。
取出冷却后加入60ml甲醇，混匀后置室温，2~3周后过滤，保存于棕色瓶内备用（存放时间越长染色效果越好）。
吉姆萨染色液：实验前取吉姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀。
磷酸盐缓冲液（pH 6.8）阳性对照物：环磷酰胺。
操作步骤一、试验动物及处理1、动物的选择：选用小鼠，每组10只动物，雌雄各半。
小鼠体重在18~20g，7~12w。
2、染毒途径：采用腹腔注射给药。
3、剂量选择：环磷酰胺按50mg/kg剂量染毒，同时设立阴性对照（空白对照）。
4、染毒次数和取样时间：采用30h给药法，即两次给药间隔24h，在第二次给药后6h处死动物采集骨髓。
小鼠骨髓细胞微核试验
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4.3 固定
将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，甲醇 溶液固定15分钟，取出，晾干。不能及时 染色的涂片也应固定好保存。
4.4 染色
将固定晾干后的涂片，用新鲜配制的 Giemsa (Giemsa储备液1份+pH6.8的磷酸盐 缓冲液9份) 染色10~15分钟，冲洗，晾干。
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MN NCE
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红细胞
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电镜
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单个微核
多个微核
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Hale Waihona Puke 16医学ppt17
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3 器材与试剂
3.1 器材 解剖器械，生物显微镜，载玻片 等。
3.2 试剂 甲醇（分析纯）、甘油（分析 纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa 储备 液、 pH 6.8磷酸盐缓冲液
3.3 阳性对照物 环磷酰胺
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4 操作步骤
4.1 试验动物及处理
动物选择 小鼠是微核试验的常规动物，通常用7～12
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4.5 观察计数
低倍镜下观察，选择细胞完整、分散均匀， 着色适当的区域，再在油镜下观察计数。
多染红细胞（PCE）呈灰蓝色，正染红细胞 （NCE）呈橘黄色。典型的微核多为单个、 圆形、边缘光滑整齐，嗜色性与核质一致， 呈紫红色或蓝紫色 。
计数1000个PCE中含微核的PCE数，并且计 数200个细胞中PCE与NCE的比值。
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化学致突变物
染色体
作用于纺锤丝
无着丝点,片或环
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
小鼠骨髓多染红细胞微核试验(氟化钠)
若微核发生在雌雄间有明显差异时，需按照性别分别进行统计分 析。 PCE/(PCE+NCE)不低于对照值的20%
PCE/NCE为评价细胞毒性的指标，受试组PCE/NCE值与阴性对照组比较有统 计学意义表示受试化学毒物的剂量过大，试验结果不可靠。 正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2），如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重 抑制；如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果不可靠。
小鼠骨髓多染红细胞微核实验中
3. 微核可出现于多种细胞中，但在有核细胞中难以与正常核的分 叶及核突出物区分，故常计数PCE细胞中的微核，因为成红细 胞发展为红细胞时，主核排出，成为PCE，这些细胞保持其嗜 碱性约24小时，然后成为NCE,并进入外周血。 4. 在主核排出时，已形成的微核可留在胞浆中。因此，这些在细 胞中没有主核，便于观察。观察并计数多染红细胞中的微核， 可反映染色体断裂和纺锤体损伤情况。本试验的测试终点为染 色体损伤。
?再计数200个红细胞记录pce在总红细胞pcence中的比例作为对细胞毒性的指标多染红细胞pce正染红细胞nce微粒浅兰色胞浆呈颗粒状油画淡红色胞浆呈均质状水彩画圆形或椭圆形边缘光滑染色与有核细胞的核一致紫红色大小约为红细胞的12015文档仅供参考不能作为科学依据请勿模仿
小鼠骨髓多染红细胞微核试验
• 本次实习采用一次染毒， 24小时后取样测定
操作步骤
24小时后 染毒 取材 制片 染色 镜检
取骨
擦净血污、剔去肌肉
பைடு நூலகம்
pH=6.4 Giemsa染色液染色10-15min
冲洗、晾干
剪去骨骺端 小 牛 pH=6.4 血 清 甲醇中固定2min 吹 干 混匀、推片 镜检、细胞计数
镜检
实验三小鼠骨髓细胞微核试验
实验三小鼠骨髓细胞微核试验实验三：小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的本实验旨在通过观察小鼠骨髓细胞微核率的变化，了解并评估骨髓细胞受到的损伤程度，为进一步研究生物样品中的毒性物质及其潜在危害提供依据。
二、实验原理微核试验是一种检测染色体畸变的快速、敏感的方法，常用于评价各种因素对机体的遗传毒性。
微核是由染色体的片段或整个染色体在细胞分裂后期或末期未能进入子代细胞核而形成的，因此微核率的高低可反映细胞染色体受损的程度。
骨髓细胞微核试验常用于检测体内外接触毒物的程度及检测药物的遗传毒性。
三、实验步骤1.选取健康的成年小鼠，进行试验前处理，包括脱毛、称重等。
2.对小鼠进行腹腔注射或口服给予不同剂量的待测毒物。
3.分别于24小时、48小时和72小时三个时间段采集小鼠骨髓细胞，制备骨髓细胞涂片。
4.对涂片进行染色处理，以便观察和计数。
5.在显微镜下观察每个涂片，记录微核数并计算微核率。
6.统计分析数据，对比不同剂量组与对照组的微核率差异。
7.根据实验结果，评估待测毒物的遗传毒性及对骨髓细胞的损伤程度。
四、实验结果与数据分析经过对小鼠骨髓细胞微核率的观察和计数，我们得到了不同剂量组与对照组的微核率数据。
通过对比分析，我们发现随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。
这表明待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致骨髓细胞的损伤。
为了更直观地展示实验结果，我们可以使用柱状图或折线图来表示不同剂量组与对照组之间的微核率差异。
通过观察图表，可以清楚地看到随着毒物剂量的增加，微核率也逐渐升高。
这进一步证实了待测毒物的遗传毒性和对骨髓细胞的损伤作用。
五、实验结论通过本实验，我们得出以下结论：1.待测毒物具有明显的遗传毒性，能够导致小鼠骨髓细胞的损伤。
2.随着待测毒物剂量的增加，小鼠骨髓细胞的微核率也逐渐升高。
3.实验结果提示，待测毒物可能对机体产生一定的危害作用，需要进一步研究其对人体健康的潜在影响。
4.微核试验作为一种快速、敏感的检测方法，可用于评估生物样品中的毒性物质及其潜在危害。
实验3-小鼠骨髓细胞微核试验-20121101
3.染毒次数及取样时间： 一般采用多次染毒方法，常用的 比较合理、方便的方法是 4 次染毒，即 每天染毒一次，连续 4 天，第 5 天（即 最 末 一 次 染 毒 后 24 小 时 ） 取 样 。 这 样 ， 仅 仅 取 样 一 次 就 能 复 盖 24~72 小 时，而且如果高峰在96小时，也不会漏 掉。（2次染毒，末一次染毒后6小时） 取样）
４.染毒剂量选择： 如有受试化学物的LD50资料，通常选 1/2 LD50作为高剂量，1/20 LD50为低剂 量，中间再安排两个剂量，并同时设立 阳性对照组和阴性对照组，阳性对照组 一般用环磷酰胺（小鼠按50～100 mg/kg )，按0.1ml/10g的体积，腹腔注 射一次或二次；阴性对照使用等体积的 溶剂注射.
实 验 四 小鼠骨髓细胞微核试验
一．实验目的
1.了解遗传毒理学技术和方法 2.掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE） 微核测定方法
二. 实验原理
染色体 断裂
影响纺 缍丝
染色体 化学致突变物
无着丝点,片或环
作用于纺锤丝
整条染色体 带着丝粒的环和断片
形成微核
于细胞分裂末期细胞质中
微核成因
1. 正常细胞在有丝分裂后期其染色体 逐渐从赤道向两极移动并在末期成为 两个子细胞的核心，若染色体断裂或 损伤，则它们在有丝分裂后期不能正 常向两极移动而滞留形成微核，从而 在有丝分裂的间期看到微核。
四、注意事项
1.Giemsa染液pH6.8是细胞染色质量的 重要保证； 2.推制良好的骨髓涂片是本试验的关 键步骤； 3.正确区分PCE细胞、NCE细胞及白细 胞； 4.正确区分微核与染料颗粒。
成熟红细胞模式图
红细胞
电镜
MN NCE
Thanks!
微核试验
5．观察计数 先在低倍镜下观察，选择 分布均匀，染色较好的区域，再在油镜 下观察计数。PCE细胞呈灰蓝色，正染 红细胞（NCE）呈桔黄色。一个细胞内 可出现一个或多个微核。计数200个 PCE中含有微核的PCE数.
结果统计
本试验中只计数PCE中的微核。每一动 物为一观察单位，每组动物分别计算微 核PCE的均值。全班一起用t一检验统计。
什么是PCE?简单的说PCE就是一种刚 排核而未成熟的红细胞。红细胞是在骨 髓中生成的，骨髓中的红系祖细胞经过 数次分裂，最后脱核成为成熟的红细胞。 脱核后早期，红细胞内血红蛋白的主要 成分球蛋白的合成旺盛，因此胞质中存 在大量的核糖体，Giemsa染色呈灰蓝色， 这就是PCE。随着球蛋白合成完毕，核 糖体完全分解，PCE逐渐形成成熟的正 染红细胞。
注意事项
操作时推制良好的骨髓涂片及良好的染 色，是本实验的关键步骤。
熟悉并正确区分各种骨髓细胞。
MN NCE
பைடு நூலகம்细胞
电镜
单个微核
多个微核
（二）器材 晾片架， 1ml注射器及针头，载玻片及 推片，止血钳，显微镜（油镜头），细 胞计数器。
（三）动物 昆明种小鼠，体重24-28g，雄性。
实验方法
1．染毒：每组取小鼠4只，称重随机分 成二组，一组生理盐水组，腹腔注射生 理盐水0.2ml/10g，一组为环磷酰胺组， 环磷酰胺接100mg/kg腹腔注射 （0.2ml/10g）。
2．涂片 给药24小时后用颈椎脱臼方法 处死动物，四肢固定于解剖板，剖开胸 腹部，取下胸骨，剔去肌肉。将胸骨骨 髓挤于有一滴小牛血清的载玻片上，推 片。
3．固定 将推好晾干的标本玻片放入甲醇 溶液固定15分钟，取出晾干。
4．染色 用新鲜配制的10%Giemsa染液染 色15分钟。冲洗后晾干。
小鼠骨髓多染红细胞微核试验
小鼠骨髓多染红细胞微核试验实验原理微核是由细胞分裂末期滞留的染色体片段或整条迟滞的染色体在分裂间期的子代细胞浆内形成的游离团块物质。
微核实验作为细胞遗传损伤的标志之一，可用于染色体断裂剂和纺锤体损伤剂的检测。
当骨髓成红细胞发展成为红细胞时，主核排除，成为多染红细胞，这些细胞保持其碱性约24小时，然后成为正染红细胞，并进入外周血中。
在主核排出时，已形成的微核可留在胞浆中。
由于这些细胞没有主核，便于观察微核。
观察并计数多染红细胞中的微核，可反映染色体断裂和纺锤体损伤情况。
本次试验的检测终点为染色体损伤。
一、实验动物健康的成年ICR小鼠50只，体重18-22g，每组10只，雌雄各半，随机分组。
二、试剂与其器材40%工业久效磷，环磷酰胺，PH6.8的小牛血清，甲醇，PH6.8的磷酸缓冲液，Giemsa 染液；注射器、小鼠灌胃针头、动物秤、剪刀、镊子、纱布、载玻片、染色盘、染色架、固定用染色缸、显微镜。
三、试验方法1.实验动物：采用配伍组设计法对小鼠进行分组。
每组10只，共5组。
2.剂量分组：设置阳性对照及阴性对照组。
阳性对照物采用120mg/kg环磷酰胺，阴性对照物采用蒸馏水。
此外设计三个剂量组，分别为高中低剂量组。
通常取受试物LD50的1/2,1/4,1/8等剂量。
剂量分别为13.2mg/kg，6.6mg/kg，3.3mg/kg。
3.染毒途径：经口灌胃染毒。
4.染毒次数及骨髓采样时间：一次染毒，24小时后取样测定。
5.取材：按照上述步骤染毒24小时后，颈椎脱臼处死动物，仔细剥离并取下一侧后肢股骨。
用纱布擦净碎肉，减去股骨两端，露出骨髓腔，用注射器吸取少量小牛血清冲洗骨髓腔数次，冲洗物滴在玻片上。
6.制片：蘸取骨髓液，推片3张，干燥后取其中较好的两张用甲醇固定5分钟。
7.染色：用1:9的Giemsa-磷酸缓冲液（PH6.8）染色约10-15分钟，自来水冲洗后，自然干燥。
8.镜检：每只小鼠选择一张染色最成功的片子，在低倍镜下观察染色及分散情况。
(x)小鼠骨髓嗜多染红细胞微
结果评价
♦ 正常小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率为千
分之五以下，超过千分之五为异常 。
实验步骤（制片）
♦ (4)固定 放在甲醇液中固定5~1Omin，如
当日不染色，也需固定后保存。 ♦ (5)染色 在Giema应用液中染色10~l5min， 最后用蒸馏水冲洗。
观察计数
♦ 选择细胞分散均匀、形态完整、染色良好的区
域，在油镜下按一定顺序进行嗜多染红细胞 (PCE)及微核计数。嗜多染红细胞呈灰蓝色， 而成熟红细胞呈桔红色。PCE中微核的嗜色性 与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。典型的微核 呈圆形，边缘光滑、整齐，其直径通常为红细 胞的1/20~1/5。偶尔也可呈椭圆形、肾形、马 蹄形及环形。PCE中微核多数为一个，也可能 有两个或两个以上的微核，此时仍按一个有微 核的PCE计算。每只动物计数200O个PCE，观察 含有微核的PCE数，微核率以千分率表示。
实验原理
♦ 骨髓中PCE数量充足，微核容易辨认，
而且微核自发率低。由于这些优点，骨 髓的PCE细胞成为骨髓微核试验的首选 细胞群。故一般检查嗜多染红细胞中微 核的多少来鉴别是否异常;
试剂和材料
♦ 主要试剂 ♦ 胎牛血清 ♦ 材料： ♦ 小平皿、滤纸、载玻
片、离心机、显微镜 ♦ 成年小鼠，体重1822克。
实验步骤（制片）
♦ (2)离心 以10OOrpm离心5min，用毛细吸
管吸去上清液。如沉淀物较多，可留下 少许血清，否则应吸去全部上清液。最 后，用毛细吸管尖端把沉淀物混匀。 ♦ (3)涂片 吸取一小滴混悬液滴于玻片的 一端，按常规血涂片法涂片，约2·3cm长 度，在空气中晾干(若立即染色，可在酒 精灯上稍加烘烤)。
实验步骤
♦灌药 ♦制片
实验步骤（灌药）
实验四.小鼠骨髓细胞微核试验
院系：理学院专业：农药学学号：0931******* 姓名：王熠实验四：小鼠骨髓细胞微核试验1、实验目的通过检测哺乳动物骨髓细胞中嗜多染红细胞（PCE）的微核出现率，间接反映骨髓细胞染色体畸变发生率的高低，从而判断受试动物是否具有致突变作用。
主要用于测试干扰细胞有丝分裂的物质。
2、实验原理微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。
红细胞在成熟之前最后一次分离后数小时可将主核排出，但微核仍保留于PCE细胞中，因此可通过计数PCE细胞中的微核来判断受试物的致突变作用。
3、实验材料3.1实验动物7～12周龄健康小鼠，体重20~30g，10只，雌雄各半。
3.2试剂小牛血清（灭活）；甲醇；姬姆萨染色液：磷酸盐缓冲液（pH6.8）：丝裂霉素C。
3.3器材生物显微镜、恒温水浴箱、解剖剪、镊子、止血钳、注射器、灌胃针头、载玻片、玻璃染色缸、塑料吸瓶、吸管、乳钵、干净纱布、滤纸等。
4、操作步骤4.1试剂的配制4.1.1小牛血清（灭活）小牛血清滤菌后置于56℃恒温水浴保温30 min进行灭活。
4.1.2磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1/15mol/L磷酸氢二钠溶液：磷酸氢二钠(Na2HPO4) 9.47 g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸二氢钾溶液：磷酸二氢钾(KH2PO4) 9.07g溶于1000ml蒸馏水中;1/15mol/L磷酸氢二钠溶液50ml与1/15mol/L磷酸二氢钾溶液50ml混合即可。
4.1.3姬姆萨染色液将Giemsa染料和少量甲醇于乳钵里仔细研磨，再加入甲醇至375 ml，待完全溶解后，再加入125ml甘油，混合均匀。
置37℃恒温箱中保温48h。
保温期间振摇数次，促使染料的充分溶解。
取出过滤，即为姬姆萨储备液，两周后可使用。
实验前取姬姆萨储备液与磷酸盐缓冲液（pH 6.8）1 : 9混匀，即可。
4.2实验动物的处理步骤如下:（1）给药根据急性LD50，选用使动物出现中毒，但不引起动物死亡的剂量，受试小鼠腹腔注射丝裂霉素C1.5～2mg/kg（2）骨髓细胞液的制备在给与受试物6h后，小鼠脱颈椎处死，打开胸腔，沿着胸骨柄与肋骨交界处剪断，剥掉附着其上的肌肉，用滤纸擦干血污（3）PCE及微核的观察涂片在洁净的玻片一端滴小牛血清1滴，横向剪开胸骨，暴露骨髓腔，然后用止血钳挤出骨髓液至血清中，混匀，推片（长度约2～3cm），在空气中晾干（一般以两节胸骨髓液涂一张片子为宜）固定将干燥的涂片置甲醇液中固定5～10min，取出晾干染色固定好的涂片放入姬姆萨应用液中染色15～30min，蒸馏水冲洗，干燥镜检先在低倍镜下观察，选择分布均匀，染色较好的视野，然后换到油镜下观察计数。
小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验文稿演示
小 鼠 正 常 精 子 形 态
正常
单头双尾
无香 钩蕉
头
胖 头
双头
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
双尾
尾折叠 无定型
双头双尾
无定型
无钩
微核形成过程
（三）PCE及其微核形态
MN
NCE
MN
MN
MN
二、正常精子及畸形形态
精子畸形
• 精子畸形如圆锥形头､双头､双尾､尾卷曲等 • 精子畸形率的增高,往往间接反映了睾丸生精功
能的障碍,也必然影响到精子的活力和受精能力｡ • 据统计,当精子畸形率超过20%时,不育率增加｡精
子形态异常往往与少精或活力差同时存在,但有 时也单独存在｡对精子形态的评价要针对整个精 子:即包括头､中段和尾｡
PCE与NCE在光镜下的区别
胞
名称
胞体
核
PCE 椭圆或圆盘状 无
NCE 圆盘状
无
胞 着色 灰蓝色 桔黄色
质 分布 不均匀 均匀
骨髓细胞组成
骨髓血细胞分化规律图
各种血细胞 1.2.3.单核细胞 4.5.6.淋巴细胞 7.8.9.10.11.中性粒细胞 12.13.14.嗜酸性粒细胞 15.嗜碱性粒细胞 16.红细胞 17.血小板
小鼠骨髓细胞微核及精子畸形实验文稿演示
• 嗜多染红细胞（Polychromatic Erythrocyte, PCE）：未成熟红细胞，是红细胞成熟过程中 的一个中间阶段，此时因胞质内仍含有核糖体， 可通过选择性的染色而与成熟红细胞区别开来。
• 正染红细胞（Normochromatic Erythrocyte, NCE）：成熟红细胞，因其核糖体已消失，可 通过选择性的染色而与未成熟红细胞区别开来。
《小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验报告》消毒产品检验报告(模板 样式)
小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
检验机构全称
检验报告
样品受理编号：第页/共页
样品名称接样日期
检验项目小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验检验完成日期
一、材料和动物
1．受试样品：名称及批号、剂型、颜色、嗅味、液体比重等。
2．阳性对照物：名称、来源和批号。
3．动物：品种、来源、等级、合格证号、动物数、性别、体重范围，饲料及饲养环境条件。
4. 其它可能影响试验结果的材料及其有关情况。
二、方法：
1. 检测依据 (写明所依据的资料及所在的条目)。
2．简述动物分组、剂量设计、受试物配制、染毒方法、取材时间、制片、观察、统计方法和阴性、阳性对照组的处理。
3．检测依据中未包括或需要特殊说明可能影响检测结果的问题。
三、试验结果
文字叙述染毒后动物中毒表现。
将试验结果列表6-61，并说明统计学检验结果。
表6-61 小鼠骨髓细胞微核试验结果
分组
剂量
（mg/kg）
动物数
（只）
受检PCE数含微核PCE数
微核细胞率
（‰）
PCE/NCE
试验组
阴性对照组
阳性对照组
注：微核细胞率（‰）和PCE/NCE均以小鼠为单位统计，表示为均值±标准差。
四、结论：
受试物对小鼠骨髓嗜多染红细胞有无致微核作用。
法定代表人(或授权的技术负责人) (签字) 检验机构
盖章
最终审核日期年月日
( ) 量认（）字（）号。
小鼠骨髓细胞微核试验
五、操作步骤
染色 涂片充分晾干后 染色：1. 平置涂片于染色架上，滴加试剂一5滴， 迅速均匀盖满涂片，染色1.5 min 不要丢弃试剂一，直接滴加试剂二10滴，轻轻均匀摇晃涂片使染液均匀覆盖涂片，染色8 min 水洗涂片30s, 待干后镜检
五、操作步骤
观察 显微镜的使用 低倍镜：细胞群 高倍镜：分布均匀、染色良好 油镜：细胞形态、微核
微核成因 染色体或染色单体的无着丝点断片 纺锤丝受损而丢失的整个染色体 细胞分裂后期遗留在胞质中，单独形成规则的次核
植物细胞微核实验（蚕豆根尖）
淋巴细胞微核实验
双核微核实验
小鼠骨髓微核实验
嗜多染红细胞（PCE）
嗜多染红细胞是分裂后期的红细胞，由幼年发展为成熟红细胞的一个阶段 特点： 无主核、易识别微核（有核细胞中微核与正常核叶及核的突起难以鉴别） 胞内含核糖体，染色后成灰蓝色（区别于成熟红细胞，其无核糖体、染色呈淡橘红色） 骨髓中PCE数量充足，满足实验计数的要求
检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
01
检测能使染色体发生断裂或使染色体和纺锤体联结损伤的化学物（DNA断裂剂和非整倍体诱变剂）。
02
辐射损伤、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。
03
三、意义及应用
器材：手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、晾片架、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器
六、注意事项
镜下观察
03
01
正染红细胞
嗜多染红细胞
微核
有核细胞
镜下观察
有微核的嗜多染红细胞
有核细胞 正染红细胞
实验三小鼠骨髓细胞微核试验
实验三小鼠骨髓细胞微核试验一、实验目的通过本次实验，学习和掌握小鼠骨髓多染红细胞（PCE）微核测定方法。
二、实验原理微核试验是用于染色体损伤和干扰细胞有丝分裂的化学毒物的快速检测方法。
微核是指存在于细胞中主核之外的一种颗粒，大小相当于细胞直径的1/20～1/5，呈圆形或杏仁状，其染色与细胞核一致，在间期细胞中可以出现一个或多个。
一般认为微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝分裂后期滞留在细胞核外的遗传物质。
所以，微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常核的分叶及核突出物相区别。
由于红细胞在成熟之前最后一次分离后数小时可将主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，因此通常计数PCE细胞中的微核。
三、器材与试剂1、器材手术刀、手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、干净纱布、带橡皮头吸管、台式离心机、刻度离心管、晾片染、电吹风机、玻璃蜡笔、玻璃染色缸、2ml注射器及针头、载玻片及推片、定时钟、带油镜头显微镜、细胞计数器。
2、试剂－甲醇（分析纯）、甘油（分析纯）、小牛血清、生理盐水、Giemsa储备液（取Giemsa染料lg，甘油66m1，甲醇60ml。
先将染料置于研钵内，加入少量甘油混合研细，再分次倾人剩余的甘油继续研磨，然后转移至烧杯内，盖上玻璃表面皿，置60oC水浴2h，取出待冷却后加入甲醇，混合静置2周后，过滤于棕色瓶内，存放阴凉处。
该储备液存放的时，间越长，染色效果越好。
临用时用pH6.8的磷酸盐缓冲液配制为10％的应用液）、pH6.8的磷酸盐缓冲液。
（1）1/15mol/L磷酸二氢钾（KH2PO4）溶液：称取分析纯KH2PO49.06g，用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
（2）1/15mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液：称取分析纯Na2HPO49.45g/kg或Na2HPO42H2011.87g;Na2HPO47H2017.87g;Na2HPO412H2023.88g）用蒸馏水溶解并定容至1000ml。
小鼠骨髓细胞微核试验
四、
操作步骤
1． 动物一般选用 7~12 周的、体重 20~30g 的小鼠，也可选用体重 150~200g 的大鼠。 每个剂量组至少用两种性别的动物各 5 只。 若需多次采样， 则每组的动物数需增加， 每个采样时间至少有 8 性质 （尤其是溶解度、 水溶性或脂溶性） ， 确定溶剂。 一般采用水或食用植物油，不容者可用淀粉制成混悬液。 一般在受试物的 1/2~1/30LD50 范围内选择 3~4 个剂量组。 也可采用急性毒性试验中出现中毒 而不致死的剂量作为染毒最高剂量组，以畜禽的可能摄入量作为最低剂量组，中间插入 1~2 个剂量组。同时设对照组，即空白对照、溶剂对照和阳性对照。阳性对照组用环磷酰胺生理 盐水溶液一次腹腔注射 30~50mg/kg，或以环磷酰胺水溶液 80~120mg/kg，经口染毒两次， 间隔 24h。 3．染毒途径根据受试物的性质及畜禽接触方式不同，可分别选用灌胃、腹腔注射、皮 下或肌肉注射等染毒途径。 4．染毒方法一般采用 2 次染毒方法，两次间隔 24h。 5．制片 （1）骨髓细胞液的制备在第二次给予受试物 6h 后，小鼠脱颈椎处死。取下小鼠两侧股 骨，剔去肌肉，用滤纸或纱布擦去血污和肌肉，减去股骨两端。用配有 6 号针头 1ml 注射器 吸取小牛血清约 0.05ml 冲洗骨髓腔数次，将冲洗物滴在载玻片上。 （2） 涂片将玻片上的冲洗物调匀后， 推片若干张。 迅速干燥， 可在酒精灯上短时烘烤。 （3）固定将干燥的涂片置甲醇液中固定 5~10min，取出晾干。当日不染色的涂片亦应 固定后保存。 （4）染色固定好的涂片用 1:10 的吉姆萨-磷酸缓冲液（pH6.4）染色 15~30min。用蒸馏 水冲洗，干燥，待检。 为了便于诊断，可选用吖啶橙染色法。固定好的涂片放入 0.24mmol/L 吖啶橙磷酸缓冲 液内，染色 2~3min。用 Ph6.8 磷酸缓冲液冲洗 3 次，每次 1~2min。晾干后在荧光显微镜下 观察，如微核带红色荧光，可再冲洗数分钟，直至发黄绿色荧光。在染色、干燥过程中均应 避光，以防荧光减弱或消失。 （5）封片染色干燥后的涂片，若需长时间保存，可放入二甲苯透明 6min，取出后趁湿 滴上适量中性树脂胶， 盖上盖玻片， 平置。 待干后却可收入盒内备检。 若在短时内进行观察， 涂片不需制成涂片。 （6）镜检先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞完整、分布均匀和染色良好的区域，再 以油镜检查计数。 可用细胞形态是否完好， 作为判断制片优劣的标准。 嗜多染红细胞 （PCE） 呈灰蓝色，成熟的正染红细胞（NCE）呈粉红色。 每只动物需计数 1000 个嗜多染红细胞， 并计算含微核的嗜多染红细胞数， 列入表实 6-1。 在一个嗜多染红细胞中出现两个或多个微核，仍按一个为细胞计算。微核率按下式计算，并 以千分率表示。 微核率列入表实 6-2。 另外， 在计数 PCE 时， 计数见到的 NCE 数， 求出 PCE/NCE 的比值。 嗜多染红细胞微核率=有微核的嗜多染红细胞总数/检查嗜多染红细胞数× 100% 表示 6-1 出现微核的嗜多染红细胞数统计 性别 空白对照组 低剂量组 中剂量组 高剂量组 阳性对照组
最新实验八小白鼠骨髓嗜多染红细胞微核检测方法-药学医学精品资料
三、实验方法与步骤
1、染毒：提前两天小鼠腹腔注射环磷酰胺， 剂量分别为：250mg/kg体重 ， 100mg/kg体 重，空白对照组。 2、取材：取两腿股骨，用注射器吸取1ml灭 活小牛血清，将针头插入骨髓腔上段冲洗， 用离心管接收冲洗液，两根股骨的骨髓冲 洗在一支离心管中。即成骨髓细胞悬液。
3．离心 ：1000r/min离心5min，弃大部分上 清液，留少许液体，用毛细吸管将细胞团 块轻轻吹打均匀，即成骨髓细胞悬液。 4、涂片： 混匀后的液体滴1滴于载玻片上， 血常规涂片法涂片，每个同学涂一张，自 然干燥。 5、固定： 玻片标本置于甲醇溶液中固定 5min～10min，晾干 6．染色： Giemsa原液用磷酸缓冲液按1∶10 的比例稀释，染色10min。自来水轻轻冲去 多余染液，晾干，镜检。
实验八 小白鼠骨髓嗜多染红细胞 微核检测方法
一、实验目的
1、熟悉微核实验的基本原理和方法 2、理解微核实验的意义
二、实验原理及意义
细胞在受到射线或有害化学物质的作用后， 可产生除细胞核以外的次级核，因其化学 成分与细胞主核相同，且体积很小，故称 微核。 本实验用环磷酰胺作诱导剂，促使小白鼠 骨髓细胞中染色体断裂，产生微核 。 由于微核的产生与染色体和DNA损伤有较 大关系，故常将微核的检出率作为DNA损 伤的一种指标。
7．观察 ：先在低倍镜下选择细胞分散均匀、 形态完整、染色良好的区域，再转到油镜 下，观察嗜多染红细胞的微核。典型的微 核多为单个、圆形、边缘光滑整齐，偶尔 呈肾形、马蹄形或环形，嗜色性与主核一 致，直径通常为主核的1/20~1/5。
每个同学观察并计数100个嗜多染红细 胞中的微核细胞，以小组为单位，统计数 据，得出微核细胞的千分率，并将结果写 成实验报告交老师。 微核计数以“细胞”为单位，即1个细胞中 出现2个或2个以上微核时，只按“1”计算
微核试验_精品文档
.
图13-1 细胞周期可划分为四个阶段
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微核（micronucleus）
是染色体或染色单体的无着丝点片断或纺锤体 受损而丢失的整个染色体，于细胞分裂后期留在 细胞质中，末期后，单独形成一个或几个规则的 次核，包含在子细胞的胞质内，比主核小，故叫 微核。
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原理：
1 有丝分裂毒物的作用使个别染色体或带着丝点 的染色体环和断片在细胞分裂后期被滞留在细胞 质中
2 断片或无着丝点染色体在细胞分裂后期不能定向 移动，从而遗留在细胞质中
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结论：
微核试验能检测化学或其他物质因素诱导产生 的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗 传学终点
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微核可出现于多种细胞中，但在有核细胞中 难以与正常核的分叶及核突出物区分，故常计数 PCE细胞中的微核，因为在此阶段，主核排出，易 于观察微核，这些细胞保持其嗜碱性约24小时， 然后成为正染红细胞（NCE）,并进入外周血。
２ 计数：1000个PCE中含微核的PCE数，并计算 200个细胞中PCE/NCE的比值
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结果与分析：
1 结果：试验只计数PCE中的微核，微核率 以千分率表示。每组的雌雄动物分开计数 微核PCE均值。
2 分析：正常的PCE/NCE比值为1（0.6-1.2）， 如果＜0.1，则表示PCE形成受到严重抑制； 如果＜0.05，则表示受试物剂量过大，结果 不可靠。
2 固定：将推好凉干的骨髓片放进染色缸，甲醇 固定15分钟，取出晾干
3 染色：用新鲜配制的Giemsa应用液（Giemsa储 备液一份加pH6.8的磷酸盐缓冲液9份）染色10－ 15分钟，细流水冲掉玻片染色液，晾干
抗生素89—07小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
抗生素89—07小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验
黄正南
【期刊名称】《中国抗生素杂志》
【年(卷),期】1997(22)5
【摘要】用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验，检查抗生素８９－０７的遗传效应，根据小鼠ＬＤ５０，选择１０，２０，４０ｍｇ／ｋｇ三个剂量组，一次静脉给予。
给药２４ｈ时采样制作标本。
镜检结果经统计表明三个剂量组与阴性对照组相比嗜多染红细胞微核无明显增加。
【总页数】2页(P382-383)
【作者】黄正南
【作者单位】国家医药管理局上海医药工业研究院
【正文语种】中文
【中图分类】R978.12
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伟源;覃良;
3.N,O-羧甲基壳聚糖对小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核试验 [J], 张萍;江善祥;万荣
峰
4.亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究 [J], 李元新;刘来利;王必成;张鹏
岳
5.丝裂霉素C诱发小鼠外周血嗜多染红细胞、正染红细胞以及骨髓嗜多染红细胞微核率的比较 [J], 黄建;曹佳;杨录军;周利军
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亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究
亚硒酸钠小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验研究
李元新;刘来利;王必成;张鹏岳
【期刊名称】《畜牧兽医杂志》
【年(卷),期】2016(035)003
【摘要】为评价亚硒酸钠的致突变性,进行了小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微杭试验.结果表明:当受试物终浓度为2 mg/kg,1 mg/kg剂量组PCE微核率与阴性对照组比较有极显著性差异(p＜0.01),结果为阳性;0.5 mg/kg剂量组PCE微核率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(p＞0.05),为阴性结果.结论:亚硒酸钠具有一定的致突变性.
【总页数】2页(P20-21)
【作者】李元新;刘来利;王必成;张鹏岳
【作者单位】甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉744000;甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉744000;甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉744000;甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉744000
【正文语种】中文
【中图分类】S852.651
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小鼠骨髓中嗜多染红细胞（PCE）微核实验简介
微核（micronucleus），与染色体损伤有关，是染色体或染色单体的无着丝点断片或纺锤丝受损而丢失的整个染色体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质中，比主核小，故称微核。
故微核试验能检测化学毒物或物理因素诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两种遗传学终点。
实验目的
1.学习和掌握小鼠骨髓嗜多染红细胞（PCE）微核测定方法
2.了解细胞染色体损伤情况，掌握检测断裂剂和部分非整倍体致突
变剂的测定方法
3.进一步熟练制片和镜检操作
器材与试剂
1.器材
手术剪、无齿镊、小型弯止血钳、载玻片、玻璃染色缸、定时钟、晾片架、显微镜（带油镜）、注射器及针头、干净纱布、乳头吸管、玻璃铅笔、电吹风机
2.试剂
甲醇、Giemsa储备液、磷酸盐缓冲液（PH6.8）环磷酰胺
操作步骤
1.试验动物及处理
（1）动物选择：一般选用大小鼠，小鼠最常用，18-20g，每组10只，雌雄各半。
（2）染毒途径：根据研究目的或受试物性质不同，原则上可尽量采用人类接触受试物的途径：通常采用灌胃法和腹腔注射。
（3）染毒次数：多次染毒法（每天染毒一次，连续4天，第五天取样）或两次染毒法（处死前30h+处死前6h）
（4）剂量及对照选择据受试物的LD50，以1/2LD50为最高剂量组，下设3-4个剂量组。
同时设立阳性（环磷酰胺）和阴性对照
（溶剂组）
2.骨髓细胞制片和涂片：最后一次染毒后，在确定时间脱颈椎处死
动物，迅速剪取其胸骨，剔去肌肉，用干净纱布擦拭，剪去每节骨骺端，用小型弯止血钳挤出骨髓液，点在载玻片一端预先滴好的一滴小牛血清中。
混匀后推片。
长度为2-3cm。
3.固定：将推好晾干的骨髓片放入染色缸中，用甲醇固定15min,取
出晾干。
4.染色：Giemsa应用液染色15min.冲洗染色液，晾干。
5.观察计数：先以低倍镜、高倍镜粗检，选择细胞分布均匀、疏密
适度、形态完整、染色良好的区域，再在油镜下按一定顺序进行PCE和微核计数。
PCE细胞呈灰蓝色、成熟红细胞呈橘黄色。
微核多数为圆形，边缘整齐，嗜色性与核质一致，呈紫红色或蓝紫色。
PCE细胞中微核多为一个，也可有两个或以上微核，此时仍按有微核的PCE计算。
计算微核率即1000个细胞中含微核的PCE数。
同时考虑200
个细胞中PCE与NCE的比值。
（可作为细胞毒性指标：0.6-1.2正常；
<0.1表明PCE形成收到严重抑制；<0.05受试物剂量过大，结果不
可靠）
结果评价
1. 结果分析指标为微核率
2.评价：微核实验阳性的两个判断标准为：微核率有明显的剂量反
应关系；至少在某一剂量能显示出可重复的并与对照组比较具有统计学意义的阳性反应。
注意事项
1.防止小牛血清污染
2.胸骨须擦拭干净，以免影响结果。
3.涂片不要过厚或过薄。
4.选择分布均匀、疏密适度、形态完整、染色好的区域镜检。
由
低倍镜到高倍镜，并按一定顺序镜检。
5.注意微核与颗粒异物的区分，PCE与其他骨髓细胞不同阶段血
细胞区分。