现代分离技术——天然活性成分的层析纯化策略PPT课件
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层析方法：大孔树脂 优点：常用于组分粗提、流速快、经济、吸 附少 局限性：选择性少，验证文件不健全。合成 原料及溶剂残留问题；缺乏公认统一的药用 标准、条件的规范化、重现性
4
层析方法：聚酰胺 优点：多用于提纯黄酮、内酯类成分 局限性：流速慢，验证文件不健全
5
层析方法：超临界萃取 优点：快速、回收率高、CO2成本低、无需 处理有机溶剂 局限性：设备成本高，强极性物质提取受限 制
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纯化平台：多糖
平台技术：水、醇提取—穿透式Sepharose离子 交换脱蛋白—Superdex 200/Sephacryl 3001000分子筛层析
一种药材里可以含有多种类型的多糖，其结构、 性质、功效不一。如香菇中含有水溶性、酸溶性、 碱溶性多糖，综合利用分子筛及离子交换层析可 进一步获得各组分纯品。
多糖中的蛋白质可引起临床副反应，穿透式阴阳 离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的 蛋白质，易于放大和自动化
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2019/9/24
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2019/9/24
纯化平台：生物碱 中、高压反相层析如Source15RPC或C18硅胶可 将纯度提高到90%以上。 Source是以聚苯乙烯为基架的反相介质，可耐受 1M强酸强碱，比传统的如反相介质使用范围更 宽广，寿命更长。
11
纯化平台：有机酸 平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换 Q Sepharose HP或Sephadex LH 20 — 中、高压 硅胶反相 有机酸多成盐，亲水性强。带负电荷，经Q Sepharose HP一步纯化可达50%纯度，然后再 上Sephadex LH 20 可至90%以上。
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纯化平台：黄酮、醌、多酚类 平台技术：水和醇提取— Sephadex LH 20—中、 高压硅胶反相 Sephadex LH 20
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纯化平台：内酯、萜类 平台技术：水和醇提取—中、高压硅胶反相 管道化的加压硅胶层析可在密闭的环境下操作， 大大提高生产速度、重复性、安全性、可控性。
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纯化平台：蛋白质、活性肽、动物毒素 平台技术：Sepharose离子交换； Superdex/Sephacryl分子筛层析—Source Ｒ ＰＣ反相层析 蛋白类物质在纯化时需留意保持其空间结构，避 免失活，所以一般采取温和的离子交换和分子筛 层析，寡肽分子则可使用反相层析
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纯化平台：生物碱
平台技术：〈PH3的酸水提取—阳离子交换 SP Sepharose HP — 中、高压硅胶反相
生物碱带碱性，在传统的硅胶或氧化铝层析上效 果往往不理想。
SP Sepharose HP 载量高、易于直接放大，对生 物碱有特殊的选择性，可从酸水粗提物中分离结 构近似的十几种生物碱，一步纯化可达60-80% 的纯度。
天然活性成分的层析纯化策略Baidu Nhomakorabea
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层析方法：正相硅胶 优点：经济、可常压操作、加压可提高效率 局限性：不可逆吸附、使用大量有害有机溶 剂、国产硅胶验证文件不健全
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层析方法：反相硅胶 优点：常用于检测、少量制备，有硅胶基架 的C4，C8，C18以及聚苯乙烯基架的 SOURCE介质多种选择，分辨率高。 局限性：成本高，介质昂贵、放大生产困难
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纯化平台：皂苷类 平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换 Q Sepharose HP— 中、高压硅胶反相 皂苷同时具有强极性的糖基和弱极性的母核。皂 苷含羧基
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纯化平台：黄酮苷类 平台技术：水和醇提取—阴离子交换 Q Sepharose FF 去色素— Sephadex LH 20—中、 高压硅胶反相 Q Sepharose FF是去处植物色素的有效方法，可 对提取物进行第一步纯化， Sephadex LH 20适 合精细纯化
6
层析方法：葡聚糖凝胶 优点：适合含羟基、氨基、羧基、芳香环的 苷类、黄酮、多酚、丹宁等。可多次使用 局限性：流速慢，比硅胶更适合亲水性物质， 可与硅胶为互补技术。
7
层析方法：离子交换 优点：适合生物碱、有机酸等的分离。有些 阴离子交换介质也适合苷类、皂苷、黄酮纯 化，可多次使用 局限性：受制于带电荷物质
层析方法：大孔树脂 优点：常用于组分粗提、流速快、经济、吸 附少 局限性：选择性少，验证文件不健全。合成 原料及溶剂残留问题；缺乏公认统一的药用 标准、条件的规范化、重现性
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层析方法：聚酰胺 优点：多用于提纯黄酮、内酯类成分 局限性：流速慢，验证文件不健全
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层析方法：超临界萃取 优点：快速、回收率高、CO2成本低、无需 处理有机溶剂 局限性：设备成本高，强极性物质提取受限 制
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纯化平台：多糖
平台技术：水、醇提取—穿透式Sepharose离子 交换脱蛋白—Superdex 200/Sephacryl 3001000分子筛层析
一种药材里可以含有多种类型的多糖，其结构、 性质、功效不一。如香菇中含有水溶性、酸溶性、 碱溶性多糖，综合利用分子筛及离子交换层析可 进一步获得各组分纯品。
多糖中的蛋白质可引起临床副反应，穿透式阴阳 离子交换法可以一、两步快速去除多糖中残存的 蛋白质，易于放大和自动化
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纯化平台：生物碱 中、高压反相层析如Source15RPC或C18硅胶可 将纯度提高到90%以上。 Source是以聚苯乙烯为基架的反相介质，可耐受 1M强酸强碱，比传统的如反相介质使用范围更 宽广，寿命更长。
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纯化平台：有机酸 平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换 Q Sepharose HP或Sephadex LH 20 — 中、高压 硅胶反相 有机酸多成盐，亲水性强。带负电荷，经Q Sepharose HP一步纯化可达50%纯度，然后再 上Sephadex LH 20 可至90%以上。
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纯化平台：黄酮、醌、多酚类 平台技术：水和醇提取— Sephadex LH 20—中、 高压硅胶反相 Sephadex LH 20
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纯化平台：内酯、萜类 平台技术：水和醇提取—中、高压硅胶反相 管道化的加压硅胶层析可在密闭的环境下操作， 大大提高生产速度、重复性、安全性、可控性。
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纯化平台：蛋白质、活性肽、动物毒素 平台技术：Sepharose离子交换； Superdex/Sephacryl分子筛层析—Source Ｒ ＰＣ反相层析 蛋白类物质在纯化时需留意保持其空间结构，避 免失活，所以一般采取温和的离子交换和分子筛 层析，寡肽分子则可使用反相层析
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纯化平台：生物碱
平台技术：〈PH3的酸水提取—阳离子交换 SP Sepharose HP — 中、高压硅胶反相
生物碱带碱性，在传统的硅胶或氧化铝层析上效 果往往不理想。
SP Sepharose HP 载量高、易于直接放大，对生 物碱有特殊的选择性，可从酸水粗提物中分离结 构近似的十几种生物碱，一步纯化可达60-80% 的纯度。
天然活性成分的层析纯化策略Baidu Nhomakorabea
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层析方法：正相硅胶 优点：经济、可常压操作、加压可提高效率 局限性：不可逆吸附、使用大量有害有机溶 剂、国产硅胶验证文件不健全
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层析方法：反相硅胶 优点：常用于检测、少量制备，有硅胶基架 的C4，C8，C18以及聚苯乙烯基架的 SOURCE介质多种选择，分辨率高。 局限性：成本高，介质昂贵、放大生产困难
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纯化平台：皂苷类 平台技术：〉PH11的碱水提取—阴离子交换 Q Sepharose HP— 中、高压硅胶反相 皂苷同时具有强极性的糖基和弱极性的母核。皂 苷含羧基
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纯化平台：黄酮苷类 平台技术：水和醇提取—阴离子交换 Q Sepharose FF 去色素— Sephadex LH 20—中、 高压硅胶反相 Q Sepharose FF是去处植物色素的有效方法，可 对提取物进行第一步纯化， Sephadex LH 20适 合精细纯化
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层析方法：葡聚糖凝胶 优点：适合含羟基、氨基、羧基、芳香环的 苷类、黄酮、多酚、丹宁等。可多次使用 局限性：流速慢，比硅胶更适合亲水性物质， 可与硅胶为互补技术。
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层析方法：离子交换 优点：适合生物碱、有机酸等的分离。有些 阴离子交换介质也适合苷类、皂苷、黄酮纯 化，可多次使用 局限性：受制于带电荷物质