微生物实验报告细菌

微生物实验报告

题目脓汁和粪便标本中病原菌的检测年级专业2013级临床医学八年制

实验者

学号

小组

成员

指导老师

一、实验目的

1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。

2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。

3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。

4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。

5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。

6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。

7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。

二、实验器材

1.培养基的制备：干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网

2.空气与人体体表细菌学检查：琼脂培养基、酒精、碘酒

3.细菌的分离培养：脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机

4.细菌的纯培养：接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基

5.细菌的形态学检测：斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基

6.细菌的生化试验：葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片（青霉素、庆大霉素、头孢曲松）、玻片、兔血浆、生理盐水

7.细菌的血清学试验：玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯

三、实验方法与步骤

1.培养基的制备

称量琼脂粉→蒸馏水→加热溶化→分装→集中放在试管筐里→罩上硫酸纸、牛皮纸→用橡皮筋扎好→放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内→送到高压蒸汽灭菌室（洗刷室）→灭菌

2.空气与人体体表细菌学检查

2.1空气的细菌学检查

每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所→将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边→平板暴露于空气中15分钟→平板倒扣盖上→作标记→37℃温箱培养24小时→观察结果。2.2人体体表细菌学检查

甲丙常规洗手，乙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁分别共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

3.细菌的分离培养

3.1 实验方法

平板划线法：借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团（单菌落）。

3.2实验步骤

接种环烧灼灭菌→分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，→烧掉接种环上多余的标本→冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板（2份），粪便标本接种于伊红美蓝平板（2份）→接种环烧灼灭菌→将平板倒置37℃培养18～24h→观察结果。

4.细菌的纯培养

甲→普通平板→金黄色菌落(auratus，golden yellow)→1支斜面

乙→普通平板→白色菌落(albus，white)→1支斜面

丙→EMB平板→紫黑色菌落(atropurpureus)→1支斜面

丁→EMB平板→粉红色菌落(pink) →1支斜面

斜面正面上2/3作标记：组号+ 金黄、白色、紫黑、粉红。

5.细菌的形态学检测

5.1革兰试剂染色

5.2显微镜油镜使用步骤

10×物镜→看清标本→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）

混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。

5.3肉汤接种法

接种环烧灼灭菌→分别在斜面培养物中挑取菌苔少许→立即移入肉汤培养基管中→在接近液面的管壁上轻轻研磨→沾取少量肉汤调和→混匀→试管口通过火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→35℃培养4~6小时

6.细菌的生化试验

6.1细菌的糖发酵实验

接种针烧灼灭菌→用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔→分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内→接种环烧灼灭菌→将微量管平放在平板内→37℃培养过夜后→观察结果。

6.2药敏实验

接种环烧灼灭菌→分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布（如图6）→接种环烧灼灭菌→标记:青、头、庆→镊子火焰消毒→贴青霉素、头孢曲松、庆大霉素纸片→按压→镊子消毒→倒置37℃培养

6.3凝固酶实验

取干净玻片一张→在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴→接种环烧灼灭菌→冷却→分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔(2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合→边混匀边观察结果→接种环烧灼灭菌→稍等片刻，观察结果

6.4动力实验

接种针烧灼灭菌→分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌→从半固体培养基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底→循原来的路线退出接种针→试管口迅速通过

火焰2-3次灭菌→塞好棉塞→烧灼灭菌接种针→37℃培养24小时→观察结果

7.细菌的血清学试验

取洁净的载玻片一张→将磨面近端设为对照区→滴加生理盐水15ul→远端设为试验区→滴加福氏志贺菌诊断血清15ul→接种环烧灼灭菌→用接种环分别取粉红色菌苔→研磨于盐水或血清内，混合均匀→接种环烧灼灭菌→载玻片来回倾侧→观察结果

四、结果与讨论

1.人体体表细菌学检查

洗手前细菌较多，有黄色和白色两种菌；洗手后细菌总数没有明显减少甚至有增

加，以白色菌为主。用碘酒擦拭过的手无明显的细菌菌落，空白对照无菌落。

洗手可能只能洗掉部分暂住菌（黄色），而不能完全去除手上的全部细菌，碘酒

具有很好的杀菌功能，可基本杀灭手上的细菌。

2.细菌的分离培养结果

标本脓汁粪便

形态特征圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐、

不透明，菌落直径2mm左右具有金属光泽、大

而隆起、不透明，

菌落直径2～

3mm

半透明，直径

1～2mm

结果分析：