健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌流行现状及防治策略(新)

ｍｉｎ，３０个循环；７２℃延
伸７ ｍｉｎ。ＰＣＲ扩增产物经１％琼脂糖凝胶电泳， 紫外成像系统观察结果。ＥＳＢＩ。基因及ＥＡＥＣ毒 力基因ＰＣＲ扩增产物送至上海生物工程股份有限 公司进行测序，测序结果与Ｇｅｎｂａｎｋ数据库的已 知序列进行比对分析。 三、统计学方法 采用ＷＨＯＮＥＴ ５．６软件和统计学软件ＳＰＳＳ １３．０处理数据，率比较采用Ｙ２检验，Ｐ＜０．０５为 差异有统计学意义。
Ｙ，Ｌｕｏ
Ｃｅｎｔｅｒ，ｔｈｅ
Ｆｉｒｓｔ
Ｃｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１６，Ｃｈｉｎａ（Ｘ“’，ｙ，’Ｖａ”ｇ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｆ，Ｃａｏ
ＪＭ）；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ０厂
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，￡＾Ｐ Ｆｉｒｓｔ Ｐｅｏｐｌｅ’ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｙａｎｃｈｅｎｇ，Ｙａｎｃｈｅｎｇ ２２４００６，Ｃｈｉｎａ（Ⅵ，“，） ＣｏｒｒＰＪ声。月ｄｉ”ｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｗｕ Ｊｉａｎ，ＥｍａｉＺ：ｐｉａｏｘｕｅｌ９８２７１７＠～ｉｎａ．ｃｏｒｎ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ （ＥＡＥＣ）ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐｅｏｐｌｅ，ｉｎ Ｏｒｄｅｒ
结
果
一、大肠埃希菌检出 １７５例健康体检者中，共分离出肠杆菌科细菌 ２４２株，其中大肠埃希菌１６０株，检出率为９１．４％。 ＥＳＢＩ。检测阳性５８株，携带率为３６．３％（５８／１６０）。 １６０株大肠埃希菌电泳扩增后，ＥＡＥＣ共检出１６ 株，ａｓｔＡ阳性１４株（８．８％），ａｇｇＲ阳性２株
（１．３％）。见图１、２。
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ
ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐｅｏｐｌｅ
Ｘｕ
Ｊｕｎｍｉｎ，Ｗ“Ｊｉａｎ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ．Ｚ＾ｅｊｉａｎｇ
Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ
ｃｕｒｒｅｎｔ ｔＯ
ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｅｎｔｅｒｏａｇｇｒｅｇａｔｉｖｅ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ
ｈｅｌｐ ｆｏｒｍｕｌａｔｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ。
ｏｎ
Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｓｔｏｏｌ
ｒａｔｅ
ｈｅａｌｔｈｙ
ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ
ｈｉｇｈ ｃａｒｒｉｅｒ ｒａｔｅ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｍｅａｓｕｒｅｓ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ
ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ；
Ｆｕｎｄ
ｐｒｏｇｒａｍ：Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ（ＬＹｌ４Ｈ１５０００４）；Ｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ
图１ ａ，ＨｇＲ基因扩增产物电泳结目
ＥＡＥＣ检出率为１０．０％，其中ａｓｔＡ阳性１４株， ａｇｇＲ阳性２株，与前述文献报道相接近；ＥＳＢＬ阳 性的ＥＡＥＣ菌株为５６．３％，提示健康老年人肠道 中ＥＡＥＣ的耐药性也较高。 ＣＴＸ—Ｍ型ＥＳＢＩ。对头孢噻肟有较高的水解能 力，备受医学界关注。社区来源的ＥＳＢＬ阳性菌株 中ＣＴＸ～Ｍ型检出率达６０％以上¨…。本研究中， ＥＳＢＬ阳性的ＥＡＥＣ菌株均产ＣＴＸ—Ｍ型酶，其中
二、ＥＡＥＣ毒力基因 ＥＡＥＣ总检出率为１０．０％（１６／１６０），ＥＡＥＣ
万方数据
。｝岂印Ｉｔ’’？：杂志２（）Ｉ Ｇ年７月第３５卷第７期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｇｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｌｙ ２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．７
和聚集黏附性菌毛介导，ａｇｇＲ是其调节基因； ＥＡＥＣ产生的耐热毒素（耐热聚集黏附性肠毒素 工）由质粒上ａｓｔＡ基因编码。本研究检测了 ＥＡＥＣ的ａｓｔＡ和ａｇｇＲ ２个毒力基因，结果显示
ｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｆｒｏｍ １７５ ｈｅａｌｔｈｙ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐｅｏｐｌｅ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ＶＩＴＥＫ一２
ｂｌｏｏｄ ｐｌａｔｅｓ．ＳＳ ｐｌａｔｅｓ，ａｎｄ ＭＡＣ ｐｌａｔｅｓ．
ｃｏｍｐａｃｔ ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ａｎｄ ｍａｓｓ
ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ．Ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｅｘｔｅｎｄｅｄ—ｓｐｅｃｔｒｕｍ ｂｅｔａ—ｌａｃｔａｍａｓｅｓ（ＥＳＢＬ）ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｄｏｕｂｌｅ—ｄｉｓｋ ｓｙｎｅｒｇｙ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ＥＡＥＣ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｓｔＡ ａｎｄ ａｇｇＲ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ），ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｌｓｏ ｕｓｅｄ
采用Ｖｉｔｅｋ一２ Ｃｏｍｐａｃｔ全自动微生物鉴定仪和
ＭＡＩ。ＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ鉴定仪对细菌进行鉴定，按说明
书进行操作。 ３．超广谱８内酰胺酶（ＥＳＢＬ）表型的检测：采 用双纸片协同法心１检测所有大肠埃希菌ＥＳＢＩ。表 型。平板中心贴ＡＭＣ，距其边缘１５ ｍｍ处贴 ＣＴＸ、ＡＴＭ、ＣＲＯ、ＣＡＺ纸片，各纸片边缘间距
２５
ｍｍ，ＡＭＣ与各纸片间出现坑或ＡＭＣ侧纸片
抑菌环增大现象，即可判断为产ＥＳＢＬ菌株。 ４．ＰＣＲ法检测ＥＡＥＣ毒力基因：对１６０株非 重复大肠埃希菌ＥＡＥＣ毒力基因ａｓｔＡ、ａｇｇＲ进 行检测，参见文献［３］。ａｓｔＡ、ａｇｇＲ任意１个或２ 个均阳性的菌株，采用Ｈｅｐ ２细胞黏附试验确证 后，判断为ＥＡＥＣ。采用ＰＣＲ扩增检测ＥＳＢＩ。表 型阳性ＥＡＥＣ菌株基因型，以质粒ＤＮＡ作为 ＰＣＲ反应的模板，用于扩增ｂｌａＴＥＭ、ｂｌａＳＨＶ、
ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ鉴定仪购自德国Ｂｒｕｋｅｒ公司； ＭＡＬＤＩ—ＴＯＦ ＭＳ所用试剂如三氟乙酸（ＴＦＡ）、
糖核苷三磷酸（ｄＮＴＰ），０．２５肛ｌ
３弘１
ＤＮＡ聚合酶，
ＤＮＡ模板，上下游引物各１肛１，用无菌纯水补
ｍｉｎ；９４℃１
足到５０＂ｌ。ＰＣＲ扩增条件：９４℃５
ｍｉｎ，４６℃１ ｍｉ百度文库，７２℃２
ａ一氰－４－羟基苯丙烯酸（ＨＣＣＡ）、色谱纯乙腈、甲酸、 无水乙醇购自美国Ｓｉｇｍａ公司；Ｔ—ｐｅｒｓｏｎａｌ
ＰＣＲ
扩增仪购自德国Ｂｉｏｍｅｔｒａ公司；基因组提取试剂 盒购自美国Ａｘｙｇｅｎ公司（批号：Ａ４０３０８７５）；ＰＣＲ 反应试剂盒、ＤＮＡ标准带购自日本Ｔａｋａｒａ公司。 ２．菌株分离和鉴定：留取３０ ｍｉｎ内的新鲜粪 便依次接种血平板、ＳＳ平板和麦康凯平板，置 ３５℃孵育箱培养２４ ｈ，分离生长的肠杆菌科细菌。
ｂｌａＣＴＸ—Ｍ—ｌ、 ｂｌａＣＴＸ—Ｍ一２、 ｂｌａＣＴＸ—Ｍ一８、
对象和方法
ｂｌａＣＴＸ—Ｍ一９，引物参照文献［４］。反应体系：
５弘ｌ
１０×Ｂｕｆｆｅｒ缓冲液，３肛１ Ｍｇ＋２，４ ｐｌ脱氧核
Ｔａｑ
一、对象 选取２０１３年３月２０一３０日浙江省中医院医 疗保健中心年龄≥６０岁的健康体检者１７５例，人 选标准：（１）无严重肝肾功能异常及胰腺炎、结肠 炎、消化道溃疡及出血等消化系统疾病，排除肿瘤、 肝、肾移植术后等免疫异常患者；（２）近２周未出现 腹泻，未使用任何抗生素；（３）高血压、冠心病等各 种慢性疾病患者处于疾病稳定期。 二、方法 １．仪器及试剂：血平板（批号：１００４４３１５１２）、 ＳＳ平板（批号：１００４２０６１２８）、ＭＨ平板（批号： １００４６３２５２４）、麦康凯平板（批号：１００４３３２７５６）购自 法国生物梅里埃公司；氨曲南（ＡＴＭ）、头孢曲松 （ＣＲＯ）、头孢他定（ＣＡＺ）、头孢噻肟（ＣＴＸ）、阿莫 西林／克拉维酸（ＡＭＣ）由ＯＸＯＩＤ公司提供；
ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｔＯ
ｗｅｒｅ
ｄｅｔｅｃｔｅｄ ＥＡＥＣ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ Ｅ．ｃｏｌｉ，ｗｉｔｈ
ａｎ
ＥＳＢＬ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ．
ｒａｔｅ
Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ １ ７５
ｓａｍｐｌｅｓ，１ ６０
ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ
ＥＳＢＩ，一ｐｏｓｉｔｉｖｅ
ｏｆ ３６．３％（５８／１６０）；１６
ＥＡＥＣ不仅是腹泻患者的病原菌，在健康老年人群中具
有较高的携带率和耐药性，提醒我们应加强防范。
【关键词】埃希菌属；
大肠杆菌感染
基金项目：浙江省自然科学基金项目（ＬＹｌ４Ｈ１５０００４）；浙江省医药卫生科技计划项目
（２０１５ＫＹＢ２６２）
Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｊｉａｎｇｙａｎ，‰ｎｇ玩ａｎ，Ｌｕｏ Ｆｅｎｇ，Ｃａｏ
ｓｔａｉｎｓ（１０．０％，１６／１６０）ｗｅｒｅ ＥＡＥＣ，ｏｆ ｗｈｉｃｈ，１４
ｓｔｒａｉｎｓ（８．７５％）ｗｅｒｅ
ｒａｔｅ
ａｓｔＡ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ２ ｓｔｒａｉｎｓ（１．３％）ｗｅｒｅ ａｇｇＲ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ。ａｎｄ ｔｈｅ ＥＳＢＬ—ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｏｆ ｔｈｅ ＥＡＥＣ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ５６．２５％（９／１６）．Ａｌｌ ｏｆ ｔｈｅ ＥＡＥＣ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ＥＳＢＬｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｗａｓ
结果 １７５例标本中，共检出１６０株大肠埃希菌，
ＥＳＢＩ，携带率为３６．３％（５８／１６０）；检出ＥＡＥＣ １６株（１０．０％），其中ａｓｔＡ阳性１４株（８．８％），ａｇｇＲ阳
性２株（１．３％）；ＥＡＥＣ菌株的ＥＳＢＬ携带率为５６．３％（９／１６），其基因型均为ＣＴＸ—Ｍ型，其中以
ＣＴＸ—Ｍ一１４最多。占６６．７％（６／９）。 结论
７２８
主堡耋生匿芏盘查！！！！芏！旦箜！！鲞箜！塑堡！！！』鱼！！坠！！！！！！！！！！！∑！！：！！：堕！：！
・Ｉｔ＇盔ｉ床研究・
健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌
流行现状及防治策略
许江燕
王原
骆丰
曹俊敏
吴健
３１００１６杭州，浙江中医药大学附属第一医院实验诊断中心（许江燕、王原、骆丰、曹俊 敏）；２２４００１江苏省盐城市第一人民医院检验科（吴健） 通信作者：吴健，Ｅｍａｉｌ：ｐｉａｏｘｕｅｌ９８２７１７＠ｓｉｎａ．ＣＯＩｎ
ＣＴＸ—Ｍ ｔｙｐｅｓ，ａｎｄ ＣＴＸ～Ｍ一１４
Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｄｏｍｉｎａｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅ，ａｃｃｏｕｎｔｉｎｇ ｆｏｒ ６６．７％（６／９）．
ａ
ＥＡＥＣ ｉｓ ｉｎ
ａ
ｃｏｍｍｏｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｄｉａｒｒｈｅａ ａｎｄ ｈａｓ ｅｌｄｅｒｌｙ ｐｅｏｐｌｅ。Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｈｅｉｇｈｔｅｎｅｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
Ｄ０１：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０２５４—９０２６．２０１６．０７．０１０
【摘要】 防治策略。
目的分析健康老年人肠道中肠集聚性大肠埃希菌（ＥＡＥＣ）的流行情况，并依此提出 方法收取１７５例健康老年人的粪便标本，分别接种于血平板、Ｓｓ平板、麦康凯平板进
行细菌培养，用全自动微生物鉴定仪和质谱仪鉴定细菌到种；对分离出大肠埃希菌采用双纸片协同 法检测其超广谱Ｂ内酰胺酶（ＥＳＢＬ）的表型，用ＰＣＲ法扩增其ＥＡＥＣ毒力基因ａｓｔＡ和ａｇｇＲ；用ＰＣＲ 法检测ＥＳＢＬ表型阳性的ＥＡＥＣ菌株基因型。
万方数据
中华老年医学杂志２０１６年７月第３５卷第７期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｇｅｒｉａｔｒ，Ｊｕｌｙ
２０１６，Ｖ０１．３５，Ｎｏ．７
类重要的条件致病菌；特别是老年人免疫力普遍已 较低，细菌侵入肠壁组织或肠外器官，即可引起腹 泻、泌尿系炎症等肠内外感染。我们将某些能导致 人类腹泻的大肠埃希菌血清型称为致泻性大肠埃 希菌，根据其不同的血清型别、毒力和所致的临床 症状的不同，可将致泻性大肠埃希菌分为不同的 群［１］。其中，肠聚集性大肠埃希菌（ＥＡＥＣ）近年来 愈来愈受到人们的关注，该菌株在部分地区为致腹 泻的主要病原菌，且对常规抗菌药物有较高的耐药 性。目前，国内外对ＥＡＥＣ菌株的相关报道较多， 但大多局限于对腹泻患者的研究；健康人群特别是 老年人肠道ＥＡＥＣ的检出情况国内外报道甚少。 我们对年龄≥６０岁健康体检者的粪便标本进行常 规细菌培养，对ＥＡＥＣ耐药基因及毒力基因进行 检测，以期获得ＥＡＥＣ在杭州地区健康老年人中 的流行现状，并针对性地提出相应的防治策略。
Ｈｅａｈｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２０１ ５ＫＹＢ２６２）
大肠埃希菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ Ｃｏｌｉ，Ｅ．ｃｏｌｉ）即大肠 杆菌，是肠道菌群的主要成员，婴儿出生后数小时
大肠杆菌就定居于肠道并伴随终生。大肠杆菌合 成代谢产物可为宿主提供一定的营养，同时也是人