乙肝实验室检查终版11.24

二 乙肝的病因及其危害
(1)病毒性肝炎的诊断
1.有流行病学史如密切接触病毒性肝炎患者或近期有输血史， 输血制品或不洁注射史以及既往肝炎病史等。 2.有临床症状：食欲不振、恶心、厌油、乏力、腹胀、巩膜黄 染，茶色尿、肝区痛、肝大或脾大体征。 3.生化指标：血清ALT（丙氨酸转氨酶）活力升高，有黄疸者 血 清胆红素升高。 4.病原学检查 甲型：抗HAV－IgM阳性，即可确诊。 乙型：HBsAg阳性、HBeAg阳性、抗HBc－IgM阳性）或 HBVDNA阳性。 丙型：抗HCV-IgG、HCV-IgM阳性，HCV－RNA阳性。 丁型：抗HDV－IgM阳性或HDV－RNA阳性。 戊型：抗HEV－IgM阳性。 庚型：抗HGV－IgM阳性
d.非特异性阳性 e. HBsAg极低检测不出 f.HBsAg、抗-HBs空白期 a.急性乙肝恢复期 HBeAb与HBsAb会并存数月/年
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b.既往有HBV感染，已有免疫力 c.感染后康复期 a.急性乙肝感染早期 孕妇阳性致婴儿感染率10% 孕妇阳性致婴儿感染率90% 继续跟踪，定期复查
1） 2） 3） 4） 5） 6） 大三阳 小三阳 １、５ ２、４、５或２、５ 单独HBsAg 单独HBcAb
四 乙肝两对半定量与定性检测的临床比较
（1）乙肝“两对半”检测应用的误区
“两对半”结果应用的较大的误区是因为：对这些病原体 感染者体内相应抗原抗体的发生发展以及对疾病状态和抗病毒 治疗之间的关系不了解所致。在乙肝“两对半”中，真正有定 量测定价值的只有抗 HBs 。但这种测定也不是用于临床乙肝患 者疗效观察，而是用于人群乙肝疫苗注射效果的判断；也就是 说，当某人注射疫苗后，如外周血中抗HBs定量超过10 mIU/ml，则说明受免疫者具有对乙肝病毒的免疫力，免疫力及 持续时间与抗HBs含量高低应成正比。总而言之，“两对半”
无保护性，需要加强接种
弱阳性，需要加强接种 可以保护1.5年 可以保护3年 可以保护7年
HBsAg
Anti-HBs
HBeAg
Anti-HBe
Anti-HBcቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
临床意义 a.既往或慢性感染 b.HDV或HCV共同感染
备注 建议联合检测HDV、HCV、HIV
各种模式临床意义
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c.逃避诊断的变异型
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— b.慢性HBsAg携带者 a.急性乙肝感染 — b.传染性强 a.急性感染趋向恢复
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b. HBsAg向HBsAb过渡 c. 传染性中等，慢性携带者 a.非典型急性感染 建议加做定量PCR确认
4.慢性化：特别是幼儿期感染，多为慢性化过程，长期携带 HBV，体内呈“免疫耐受”状态，不能将病毒清除，这个过 程可长达10-30年或更久，是重要的传染源 5.致癌性：HBV是肝癌的重要病因，约80％-90％的肝癌有乙 肝背景。癌变的原因是HBV的基因整合到肝细胞基因上，发 生突变，导致肝癌。 6.HBV的基因变异性：HBV是极度易变异的病毒之一，它的四 个基因组（S、C、P、X）均可变异，变异是病毒的特性 7.乙肝病毒的基因组最引人注目的一个特征就是它非常小， 而且乙肝病毒DNA的两链长短不一，长链完整，长度恒定， 为负链，短链是正链，长度可变，大概是长链的50％～80%。 表面抗原和核心抗原都是由Dane颗粒的DNA编码而来。
三 乙肝常用实验室检查分析
乙肝病毒的检测 1.乙肝六项 定性：ELISA 定量：电化学发光 2.乙肝病毒PCR定量：最直接的证据和最敏感的方法 3.乙肝病毒YMDD变异：抗病毒治疗是否有效的判断指标 酪氨酸(Y) 、蛋氨酸( M) 、天冬氨酸( D) 、天冬氨酸(D) 蛋氨酸( M) →异亮氨酸(I)/缬氨酸( V) 突变最常见 4.基因型检测：A 基因型可能与慢性化有关，B 基因型感染 者的肝组织学活动指数、坏死性炎症，C 基因型与肝癌的 发生相关
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（4）HBV自然复制周期
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HBV复制的基本要素 催化剂：乙肝病毒DNA聚合酶 模板 ：在感染肝细胞之后，半环状的DNA正链就会以负链为模 板，在催化剂──乙肝病毒DNA聚合酶的作用下延长，最终 形成完整的环状。这时的乙肝病毒基因组就形成了一个完 全环状的双股DNA. 称做共价闭合环状DNA （即cccDNA）， 这就是乙肝病毒复制的原始模板 CccDNA:是乙肝病毒复制中重要的中间产物，一旦它在肝 细胞核内形成，就具有了高度的稳定性，可长期存在于肝 细胞内，很难完全清除。只要肝细胞内有很少量的 cccDNA，当停药后，核内的cccDNA又可以再次成为病毒复 制的“模型”，继续复制乙肝病毒的DNA，这也是乙肝很难 根治的原因。
定量检测乙肝Anti-HBS浓度对疫苗接种的指导意义
肝炎的治疗和恢复是一个动态的发展过程，定量检测可以 给临床提供准确、量化的动态观察指标，特别是Anti-HBS的定 量检测可以对乙肝病毒感染后机体的免疫状态以及乙肝疫苗接 种做出精准的评估。 Anti-HBS浓度 临床意义
﹤10 IU/L
10～100 IU/L 100～1000 IU/L 1000～10000 IU/L ﹥10000 IU/L
乙肝实验室检查
金域检验集团
主要内容
1 乙肝（我国）患者及治疗情况现状
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乙肝的危害及其病理原因
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乙肝常用实验室检查分析
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乙肝两对半定量与定性检测的临床比较
一 乙肝（我国）患者及治疗情况现状
慢性乙型肝炎（简称乙肝）是指乙肝病毒检测为阳性，病程 超过半年或发病日期不明确而临床有慢性肝炎表现者。 以下一组数据，是关于我国目前乙肝患者及乙肝治疗情况： 1、我国HBV感染者1.3亿多，有2000万以上慢性乙肝患者; 2、我国73%慢性肝病患者，78%肝硬化及71%肝癌患者与乙肝 病毒感染有关; 3、我国每年用于治疗慢性肝炎、肝硬化、肝癌的直接诊疗 耗费约300-500亿元人民币; 4、以拉米夫定为代表的核苷类似物是抗HBV治疗的推荐疗 法，目前其耐药问题日益突出，已成为全球关注的热点。SFDA 批准的拉米夫定、阿德福韦酯和恩替卡韦都存在不同程度的耐 药情况。 可见目前我国乙肝患者人数及乙肝治疗的现状不容乐观， 如何有效治疗乙肝已经成为人们谈论的焦点。
危害：成年人一旦罹患乙肝大三阳，病毒就会通过不断复
制，破坏自身免疫系统，相当一部分人最终恶化为肝硬化和肝 癌。乙肝表面抗原阳性者，最终有1/3的人转变成慢性迁延性 肝炎患者，这其中又有1/3转变成肝硬化，肝硬化患者中又有 1/3转变成肝癌。
(2)乙肝病毒的特性
1.顽强的抵抗力：对热、对低温、对干燥、对紫外线及一般浓 度的化学消毒剂，都能耐受；在零下20度时可存活20年；在 37度时可存活7天，在55度时仍然能存活6小时；酒精、来苏 儿、碘酒等对它不起作用。但是，加热到100度10分钟可使 其失去传染活性，对0.5％过氧乙酸、3％漂白粉、0.2％新 洁尔灭敏感 2.嗜肝性：HBV一旦入侵人体，侵袭肝脏，并在那里定居繁衍 后代，这就是它们的嗜肝性。据研究，这是因为肝细胞表面 有一种“受体”的缘故，专门接受HBV。大量HBV集中于肝细 胞内，并在其中复制，不断侵袭，诱发肝细胞发生免疫损伤 3.严格的种属特性：到目前为止，只有人、黑猩猩、长臂猿、 狒狒对HBV易于感染，虽然在吸血昆虫体内检查到HBV的踪迹， 但只是暂时“居住”而已，一般不会在它们体内复制和增殖
一个完整的乙肝病毒颗粒，也叫Dane颗粒，直径只有42纳 米 ，有外壳和核心两个部分 ，外壳厚7-8纳米，由脂质双 层和蛋白质组成的囊膜。脂质双层内含有S抗原、前S1和前 S2抗原，它们一起又构成了外壳上大、中、小三种蛋白形式， 统称为乙肝表面抗原（HBsAg）。剥去Dano颗粒的外壳，暴 露出乙肝病毒的核心颗粒，核心颗粒直径28纳米，呈二十面 体立体对称，由乙肝病毒的核心抗原(HBcAg)组成 。核心颗 粒的表面才是病毒真正的衣壳 ，通过强去垢剂或者酶处理 的方法，还可以暴露出HBV的另一个主要的抗原e抗原.
检测原理：电化学发光法
定量肝炎试剂与定性肝炎试剂的区别
电化学发光法定量检测肝炎项目优势
常规方法存在HBsAg漏检的情况，电化学发光法检测的灵 敏度达0.01-0.04IU/ml，常规方法对于高浓度的Anti-HBs样本 要进行预稀释，以致带来系统误差和重复测定的浪费，电化学 发光法在无样本预稀释下，线性范围可达1000IU/L，覆盖了多 数样本可能达到的浓度。Anti-HBc测定由于血清中乙肝核心抗 体蛋白的干扰，可出现假阳性。电化学发光法使用特制的DTT 进行标本预处理后，能极大地减少假阳性。HbsAg与Anti-HBc 的检测都会受到干扰物质非特异性信号的影响，电化学发光法 采用灵敏的标记物和高纯度、高特异性的试剂，有效解决了非 特异性信号的干扰。
在电子显微镜下可以观察到乙肝病毒3种不同的形态： 大球形颗粒、小球形颗粒和管形颗粒。大球形颗粒就是 Dano颗粒。小形球颗粒，是乙肝病毒感染后血液中最多见 的一种。它由表面抗原组成，并不含有乙肝病毒的DNA以 及DNA聚合酶。管形颗粒实际上是由几个小球形颗粒聚合 在一起而成。不管是小球还是管形颗粒都不是完整的乙肝 病毒颗粒，它们是乙肝病毒在感染肝细胞时合成过剩的囊 膜，游离在人体的血循环中
病理：（1）HBV抗原和抗体系统 1.HBsAg和抗-HBs
PreS1 PreS2 S
大分子蛋白 S蛋白 中分子蛋白
表面抗原(HBsAg)：
★HBV外膜糖蛋白=S+L+M蛋白
S蛋白：狭义的HBsAg指S蛋白。
HBsAg阳性说明机体有HBV感染。
中分子蛋白：preS2+S 大分子蛋白：preS1+preS2+S
结果的实质其实只是机体感染 HBV 后免疫应答结果的反 映，与乙型肝炎的发生和发展过程之间并无必然的联系。
因为绝大部分 HBV感染者并不出现肝炎症状，而只是表现为携 带者，但其同样会有免疫应答的产生，而得到不同的“两对 半”结果模式。因此，从根本意义上来讲，“两对半”结果的 阳性，反映的只是感染了 HBV，与临床病情轻重之间可以说毫 无因果关系。
（2）HBeAg 和抗-HBe
e抗原(HBeAg)： 是可溶性蛋白质 只存在于血液中
是病毒复制和传染性的标志
e抗体(抗-HBe)： 对HBV感染有一定的保护作用
其出现标志着病毒复制减少、
传染性降低
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（3）HBV 的三种形态
1,Hepatitis B virion(Dane particle) 2,secreted filament 3,secreted sphere
5.HBcAb:出现较早，常紧继HBsAg 和HBeAg之后就可在血清中 检出，早期以IgM为主，一般持续6-18周． HBcAb-IgM可作 为急性HBV感染的的指标．慢性期以IgG为主 6.HBcAg:是HBV存在和复制活跃的直接指标之一,不能直接检测 7.前S1抗原:比HBsAg更早出现
（2）常见模式
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（1）乙肝六项
1.HBsAg：感染后4-7周出项，ALT上升前数周，急性自限 性感染者,HBsAg在血清中存在时间不超过6个月。S基 因发生变异，导致HBsAg多肽氨基酸序列改变的HBV感 染，现行的HBsAg检测试剂无法检出，即HBsAg阴性的 HBV感染 2.HBsAb：中和性抗体，对同型病毒的再感染有保护作用， 可持续存在数年，是乙肝痊愈及HBsAg疫苗免疫成功的 标志 3.HBeAg:HBV复制的指标之一在潜伏期与HBsAg同时或在 HBsAg出现数天后可在血清中检出，存在时间一般不超 过10周，如超过则提示感染转为慢性化 4.HBeAb：出现于HBeAg转阴后，出现比HBcAb晚但消失较 10 早
（2）乙肝两对半定量和定性检测的临床意义比较
简介 传统的乙肝病毒抗原抗体检测方法多为酶联免疫法，只提 供“阴性”或“阳性”结果。无法动态观察病情及监测治疗， 检测变异株能力较弱，易造成“漏检”。 检验科引进国际先进的电化学发光免疫分析仪定量检测乙 肝相关指标，高灵敏度、高特异性，有利于乙肝早期诊断。能 够给临床提供准确的定量分析结果，动态监测病情和指导临床 治疗；能识别主要的病毒变异株，可以有效避免漏检。