HPLC法测定头孢呋辛钠中EDTA含量-2019年文档

HPLC法测定头孢呋辛钠中EDTA含量

头孢呋辛钠是第二代头孢抗生素，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有效，临床多用于敏感菌所致的呼吸道，耳鼻喉，尿道，软组织，骨骼关节，产科等感染[1]。华北制药集团河北华民药业有限责任公司在生产头孢呋辛钠的过程中使用EDTA作为络合剂，EDTA对人体有害，根据WHO规定，EDTA二钠的每日允许摄入量为0-2.5mg/kg。测定不同介质中EDTA的方法有比色法[2]、滴定法和高效液相色谱法[3]、离子色谱法[4]等。滴定法和比色法会受到头孢呋辛钠的干扰，测定结果不能令人满意。高效液相色谱法是通过检测EDTA的金属络合物EDTA - Cu对EDTA 进行测定，本文通过对EDTA- Cu进行测定，来检测EDTA在头孢呋辛钠中的残留量。

1 仪器与试剂

1.1 仪器。安捷伦1260液相色谱仪，梅特勒托利多XS105电子天平。

1.2 试剂。头孢呋辛钠，华北制药河北华民药业有限责任公司提供，批号C2091306001；EDTA，优级纯，含量99.9% ；四丁基氢氧化铵，离子对试剂；乙腈，色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件。色谱柱Venusil XBP C18 （4.6mm×250mm，5.0μm）；柱温30℃；检测器波长254nm，流速1.5ml/min。在

此情况下，样品中EDTA获得了良好的分离。结果见图1。

2.2 对照品溶液制备。精密称取EDTA二钠约33mg，置100ml 量瓶中，加水使溶解并定量稀释成0.33mg/mlEDTA对照品储备液。

2.3 样品溶液制备。精密称取头孢呋辛钠供试品约1.0g，置100ml量瓶中，加水适量使溶解，加1%硫酸铜溶液5ml，加水稀释至刻度，过滤，即得。

2.4 线性关系。精密量取贮备液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1ml、1.2ml、1.5ml至100ml容量瓶中，加1%硫酸铜溶液5mL用纯化水稀释至刻度，得浓度为0.66μg/ml、1.65μg/ml、2.64μg/ml、

3.3μg/ml、3.96μg/ml、

4.95μg/ml溶液，依次进样20μl，按照上述色谱条件测定。以EDTA浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=8.3559x-0.2102，R2=0.9992。当信噪比（S/N）为3：1时，EDTA的浓度为0.1674μg/ml。

2.5 中间精密度。按照色谱条件，采用不同人不同时间进行样品测定，测得EDTA检测结果分别为

3.35、3.32、3.32、3.33、3.34、3.32，RSD为0.4%。

2.6 回收率实验。准确称取0.5g样品，分别加入不同浓度的对照品，按照上述色谱条件进行检测的回收率结果见表1。

3 讨论

3.1 本实验建立了HPLC检测头孢呋辛钠中EDTA的含量，以外标法进行计算，该方法具有检测限低，准确度及精密度高，样

品检测时间短的优势。

3.2 由于本法进样量较大，容易使色谱柱过载，在样品检测完后，应及时冲洗色谱柱。