实验9影响酶活性的因素

备注
1% NaCl (mL)
1- - -
1% CuSO4（mL) - 1 - -
1% Na2SO4（mL) - - 1 -
水（mL)
-- -1
摇匀，37 ℃反应2分钟。（据第一次显色情况，调节观测频度）
唾液(mL)
0.5 0.5 0.5 0.5
在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始后每1-2min各管取 两滴反应液，碘显色观察；记录最先显著变浅的管号和 反应时间。将所有试管取出，加入2滴碘液，比较颜色。
5.6
6.2 6.8 7.4 8.0
1
1111
混匀，37 ℃孵育2 min
0.5
0.5 0.5 0.5 0.5
每 1 min 取一滴，碘显色，至一管颜色变淡时 取出所有试管，各加入2-5 滴碘液。摇匀，观察
结论：实验测得唾液淀粉酶的最适pH为？
四 离子对酶活力的影响
试
管
1% 淀粉 (mL)
1# 2# 3# 4# 1.0 1.0 1.0 1.0
实验操作与现象
一.酶的专一性
试
管
Leabharlann Baidu
0.1% 淀粉(mL)
无酶对照 底物对照
1# 2# 3# 4# 备 注 2 - 2-
0.1% 蔗糖(mL)
- 2-2
唾液(mL)
- - 0.5 0.5
水（mL)
0.5 0.5 - -
现
象
在白瓷盘中滴加2滴碘液，反应开始时和反应结束后分别取两滴反应 液，观察显色反应（37 ℃反应10 分钟）。（此处可初步判断酶活力）
实验 9
影响酶促反应的因素
——温度、pH、激活剂及抑制剂
实验目的
1.学习酶的催化作用特点及影响酶活力的主要因素 2.学习测定酶活力的实验方法
实验原理
生物机体广泛存在各种不同功能的酶，催化不同 的生物化学反应： 过氧化氢酶能催化过氧化氢分解释放氧气和水; 唾液淀粉酶可将淀粉逐步水解成各种糊精、麦芽 糖，用碘显色或本尼迪试剂可以检验酶催化的水 解反应产物，并比较反应速度，从而衡量酶的比 活性。通过试管颜色反应，可以定性研究影响酶 活性的因素。
结论：实验测得Cl-是唾液淀粉酶的？而Cu2+是？
讨论： 1. 酶催化反应的主要特征有哪些？ 2. 实验考查的各项因素对酶活性的调节机制？ 3. 酶活性在代谢途径中的快速调节方式有哪几种重 要的方式？ 4.本次实验中影响实验成败的关键环节有哪些？ 5.你认为本项实验设计还可以有哪些改进？为什么？
用具：50 mL 烧杯 2 ，试管，玻璃漏斗，刻度移 液管（2mL,5 mL) ，1000 uL移液器，37℃恒温 水浴，冰浴，电炉，沸水浴， 6孔白瓷板，一 次性吸管
实验操作与现象
一.酶液的收集制备
漱口后，收集唾液 > 0.5mL,加入30倍去离子 水稀释，混合。
配制酶促反应液时，其它组分均用刻度移液管 进行；最后添加酶液时，可用移液器；显色反 应，可用一次性吸管滴加试剂。
Cl-可以使淀粉酶的活力增加，是其激活剂；而 Cu2+ 使淀粉酶的活力下降，是其抑制剂。
实验器材
材料：唾液
试剂：0.1% 蔗糖，0.1%淀粉， 1% 淀粉，0.2 mol/L Na2HPO4, 0.2 mol/L NaH2PO4, 1% NaCl, 1% CuSO4,1% Na2SO4,本尼迪试剂，碘水，
酶催化反应的活力受到温度、酸碱度和离子强 度等因素的影响。一般，温度每增高10℃，反 应温度增加一倍，但同时，酶作为蛋白质，温 度过高会发生变性逐渐失活，反应速度达到最 大值时的温度称为某种酶的最适温度。
酶活力与环境酸碱度密切相关，某种酶只在一 定pH范围才具有活力，酶活最高时的pH称为该 酶的最适pH。
碘液 （滴）
22
1.0
沸水浴 0.5 沸水浴 冷却 2
1.0
0℃ 0.5 0℃ 37 ℃ 2
1.0
沸水浴 0.5 沸水浴 37 ℃ 2
现
象
操作注意：严格控制温度，碘显色反应均在控温处进行。酶活 力较大、小的组，可以调节酶用量，或室温代替37 ℃进行。
结论：本次实验条件下，唾液淀粉酶最适温度为？ 0 ℃ 可逆性抑制酶活性；沸水浴则使酶变性失活。
现
象
本尼迪试剂(mL)
0.1 0.1 0.1 0.1
沸水浴（min）
5 5 55
现
象
结论：唾液淀粉酶专一性催化淀粉水解。
二 温度对酶活力的影响
试
管
1# 2# 3#
4# 5#
备注
1% 淀粉(mL)
1.0 1.0
温度预处理 （2 min） 37 ℃ 0 ℃
唾液(mL)
0.5 0.5
反应 5 min
37 ℃ 0 ℃
三 pH对酶活力的影响
试
管
1#
2# 3# 4# 5# 备注
0.2 M Na2HPO4(mL) 0.2 M NaH2PO4(mL) 反应体系 pH
1% 淀粉(mL) 温度预处理 唾液(mL) 反应监控
现
象
0.16 0.56 1.47 2.43 2.84
2.84 2.44 1.53 0.57 0.16