肝糖原的提取和鉴定

肝糖原的提取和鉴定

一、实验目的

1、学会和掌握肝糖原提取和鉴定的原理和方法。

2、正确掌握使用离心机的方法步骤。

二、实验原理糖原属于高分子糖类化合物，是动物体内糖的主要储存形式，在肝脏内储量较为丰富。糖原在体内的合成与分解代谢，对血糖浓度的调节起着重要的作用。

糖原微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。常用的提取肝糖原的方法是将新鲜的肝组织与石英砂共同研磨以破坏肝组织，加入三氯醋酸溶液沉淀其中的蛋白质，离心除去沉淀。上清液中的肝糖原则通过加入乙醇沉淀而得。将沉淀的糖原溶于水，取一部分加入碘观察颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂（Benedict）检验。

三、实验步骤

（一）、肝糖原提取

1、用脱臼法处死白鼠，立即取出肝脏，迅速以滤纸吸取附着的血液。称取肝组织约2g，置

研钵中，加入10%三氯乙酸2ml，用剪刀把肝组织剪碎，再加石英砂少许，研磨5min。

2、再加5%三氯乙酸4ml，继续研磨1min，至肝脏组织已充分磨成糜状为止，转入离心管，然后

以2000r/min 离心10min 。

3、小心将离心管上清液转入另一个离心管中，加入同体积的95%乙醇，混匀后，此时糖原

成絮状沉淀析出。

4、溶液以2000r/min离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上1~2min。

5、在沉淀内加入蒸馏水2ml ，用细玻璃棒搅拌沉淀至溶解，即成糖原溶液。

（二）、鉴定

1、取2支小试管A、B, —支A加糖原溶液10滴，另一支B加蒸馏水10滴，然后在两管中各加

碘-碘化钾溶液1 滴，混匀，比较两管溶液颜色有何不同。

2、再取2 支小试管，将剩余的糖原溶液平分倒入两试管，试管甲加浓盐酸 3 滴，试管乙

加蒸馏水3 滴，将两管在沸水浴中加热10min 以上。取出冷却，试管甲中逐滴加入20%NaOH 溶液，并且PH 试纸检验，直至溶液成中性。试管乙中加入同等滴数的蒸馏

水。

3、向甲、乙两试管各加入班氏试剂2ml，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察有无沉

淀生成。

注意事项：

1 、实验小白鼠在实验前必须饱食。

2、脱臼法处死小白鼠：手提着小白鼠将其小白鼠尾巴将其从笼子里取出，使其四脚着地，另一支手

按着小白鼠耳后，尾巴向外拉，使其脊柱断节，背部脊髓断裂，致使四肢瘫痪。

3、肝脏离体后，所得肝脏必须迅速以三氯乙酸处理。

4、研磨应充分，这是实验成败的关键。

5、离心时与另一组同学的离心管平衡，对称放入离心机。

6、鉴定的第（2）步，试管甲中溶液必须调至中性或偏碱性。

四、实验结果

试管甲 砖红色沉淀 分析： 1、 实验小白鼠在实验前必

须饱食，因为空腹时，血糖含量降低，肝糖原分解来提高血 糖含量，肝糖原含量易于减少或

耗尽。 2、 吸去肝脏附着的血液， 可能是血液中含有还原性的葡萄糖， 会影响后面糖原的鉴定。 3、 肝脏离体后， 肝糖原会在酶的作用下迅速分解。 所以肝脏必须迅速以三氯乙酸使蛋 白质变

性以防其分解。

4、 研磨应充分，研磨使细胞破裂，肝糖原释放出来。研磨不充分会得不到糖原或含量 很少，影

响后面的鉴定。加石英砂利于研磨。

5、 经第一次离心，蛋白质会沉于离心管底部糖原则留于溶液中。 （上清液中） 。

6、 糖原不溶于乙醇溶液，所以加入同体积的 95% 乙醇，混匀后，糖原会成絮状沉淀析

出。浑浊程度反映了糖原的多少。越浑浊，糖原越多。

7、 经第二次离心，糖原沉于离心管底部，糖原微溶于水，所以在加入蒸馏水后，沉淀 会在搅拌

下溶解成糖原溶液。

8、 糖原为高分子化合物，与碘作用呈棕红色，所以试管 A 出现棕红色溶液。试管 B

中为水，加入碘 -碘化钾后，将仍为碘 - 碘化钾溶液的颜色，黄色。

9、 糖原无还原性，不会与班氏试剂在沸水浴中生成砖红色的

Cu2O 沉淀，所以试管乙

中仍为班氏试剂的颜色，蓝色，无沉淀。 10、 糖原会在浓盐酸在沸水浴下分解成小分子化合物， 其中有还原性的麦芽糖和葡

萄糖。还原性糖会在碱性条件下， 班氏试剂与其在沸水浴下生成砖红色 Co2O 沉淀。 班氏试剂为碱性溶液，所以须用 20%NaOH 溶液中和至中性。所以试管甲中会出现 砖红色沉淀。 11、 班氏试剂中有 CuS04, NaC03和柠檬酸钠。CO32-提供碱性环境，柠檬酸钠

为络合物，帮助 Cu2+与葡萄糖反应，沸水浴下， Cu2+变为Cu+，即Cu20, Cu20

为砖红色沉淀。 葡萄糖被氧化为糖酸， 麦芽糖亦如此。 所以试管甲中有砖红色沉淀。 12 、 结果表明，肝糖原被成功提取出来，且含量较多。

试管 A

棕红色

试管 B 黄色

试管

乙

无沉