【CN109731015A】一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂及制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910102902.9

(22)申请日 2019.02.01

(71)申请人 安徽农业大学

地址 230036 安徽省合肥市蜀山区长江西

路130号

(72)发明人 胡丰林　陆瑞利　何亚琼　尉杰　

(74)专利代理机构 合肥金安专利事务所(普通

合伙企业) 34114

代理人 金惠贞

(51)Int.Cl.

A61K 36/068(2006.01)

A61P 37/04(2006.01)

(54)发明名称一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂及制备方法(57)摘要本发明涉及一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂及制备方法。一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂为白色干燥粉末，主要成分为糖类、氨基酸及其衍生物和核苷类化合物，具有免疫增强作用，可提高人体免疫，具有广阔的市场。本发明通过添加代谢诱导物等方法，优化中国被毛孢菌的培养，使培养物中免疫活性物质增加；通过提取和色谱分离制备工艺优化，得到中国被毛孢菌发酵物中免疫活性物质的最佳提取工艺。本发明免疫活性物质主要是从中国被毛孢培养液中得到，而作为副产物的中国被毛孢丝体还可代替野生冬虫夏草加工相关保健品，一举两得。本发明由室内发酵生产，可工厂化全年生产，不受野生冬虫夏草的高原低温等恶劣环境影响，不破坏生

态环境。权利要求书2页 说明书6页CN 109731015 A 2019.05.10

C N 109731015

A

权　利　要　求　书1/2页CN 109731015 A

1.一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂，其特征在于：所述免疫增强剂为白色干燥粉末；其中糖类含量为5～50%、氨基酸及其衍生物含量为3～30%、核苷类含量为1～10%。

2. 权利要求1所述一种基于中国被毛孢菌的免疫增强剂的制备方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）制备一级固体菌种

将分离纯化的中国被毛孢（Hirsutella sinensis）斜面菌种接种于平板固体培养基，接种量为每支斜面接种2个9cm平皿；温度17～20℃、培养20～30天，得到一级固体菌种；

（2）制备二级液体菌种

将一级固体菌种接种于液体培养基中，接种量为每100mL液体培养基接种1平皿一级固体菌种；振荡培养：温度17～20℃、转速160～200转/分钟；培养10～20天，得到二级液体菌种；

（3）制备三级液体菌种

将二级液体菌种按5～20%体积比接入发酵系统的种子罐中，发酵罐的液体培养基装液量50～70%；通气量按体积比1:1（v/v），压力0.1MP，在温度17～20℃条件下，培养5～15天，得到三级液体菌种；

所述液体培养基配方与二级液体菌种所用的液体培养基相同；

（4）制备发酵液

将三级液体菌种按5～10%体积比接入发酵系统的发酵罐中，发酵罐装液量50～70%；通气量按体积比1:1（v/v），压力0.1MP，在温度17～20℃条件下，培养5～30天后加入100～1000mg/L一号添加剂；继续培养10～40天加入1.0～100.0 mg/L二号添加剂剂，继续培养20～40天；得到发酵液；

所述发酵培养基和液体培养基配方相同；

所述一号添加剂：由硫酸锌：植物鞘胺醇：甘露糖按重量比0.1～0.9：0.01～0.2：0.1～0.5配制得到；

所述二号添加剂：由双氧水（H2O2）：亚硝基二磺酸钾（K2NO(SO3)2）按重量比0.01～0.8：0.5～0.01配制得到；

（5）制备中国被毛孢免疫增强剂

将发酵液加热至50.0～99.9℃、保持5～20分钟；冷却至室温，加入发酵液体积0.1～2.0倍的乙醇，温度0～20℃、静置1～24小时；离心分离取上清或过滤取滤液；将上清或滤液浓缩到原体积的1/10～1/2，过反相碳18色谱柱，用0～90%乙醇洗脱，收集进样后2～50分钟的洗脱物，脱去洗脱物中的溶剂，回收乙醇，即得中国被毛孢免疫增强剂。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述固体培养基：马铃薯煮汁200g、葡萄糖20g、麦芽糖10g、蛋白胨10g、酵母粉10g、硫酸镁（MgSO4）1.5g、磷酸二氢钾（KH2PO4）3g、琼脂20g、加水至1L，用浓度1M的氢氧化钠（NaOH）调pH到6.5。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）和（3）中，所述液体培养基：葡萄糖20g、蚕蛹粉30g、酵母粉20g、硫酸镁（MgSO4）0.5g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1g、加水至1L，用浓度1M的氢氧化钠（NaOH）调pH值为6.5。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，所述发酵培养基：葡萄糖20g、蚕蛹粉30g、酵母粉20g、硫酸镁（MgSO4）0.5g、磷酸二氢钾（KH2PO4）1g、加水至1L，用浓度

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