关于标准曲线的制作
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1、标准品的定义
标准品：
必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增，并且扩增效率相同
标准品必须是经过准确定量的
标准品必须是标准化的（例如，同一化的细胞数）
在每组实验时，必须用相同的阈值设定来确定CT值
标准品可以是含有目的基因的线性化的质粒DNA，也可以是比扩增片段长的纯化后的PCR产物，当然也可以是基因组DNA，甚至cDNA，但前提是所有的作为标准品的核酸都必须保证稳定。
2、标准品的制备
（1）基因组DNA标准品的制备
（2）
质粒标准品的制备
（3）
PCR产物标准品的制备
（
5
）体外转录RNA标准品的制备
如图1
将如图
1得到的RNA纯化后，按照图2进行梯度稀释后上机进行PCR扩增反应。
目的
10倍稀释
9ul水
1ul
9ul水9ul水9ul水9ul水混匀后
取
1ul
混匀后
取
1ul1ul
混匀后混匀后
取
1ul
标准品原液
稀释后标准品
8ul水
2ul
8ul水8ul水8ul水8ul水混匀后
取
2ul
混匀后
取
2ul2ul
混匀后混匀后
取
2ul 5倍稀释
图2
图
1
目的基因Total RNA
PCR产物
T7 Promoter TTTT……T
目的基因cDNA
目的基因
3、标准曲线的制作
上机后得到如图的扩增曲线
仪器根据扩增曲线给出如下图的标准曲线