新生儿溶血病 (2)

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未释放出抗体
• 最后一次洗涤红细胞的液体，留下备用，做平行 对照，若对照试验阳性，则说明红细胞未洗涤干 净，试验结果无效。
• 只有当放散液中检出相应抗体，同时新生儿RBC 上又存在对应抗原时才认为释放试验是阳性。
• Rh-HDN放散试验结果判断：任何一孔出现凝集 则放散出不规则抗体，需进一步做抗体鉴定。三 孔均不出现凝集则没有放散出不规则抗体 。
小结
1.新生儿血型可不做反定，但需加做抗A,B
2.熟练掌握ABO-HDN和Rh-HDN的区别，一般先 分离出患儿标本游离血清及相应三洗红细 胞，进行血型鉴定后，以此为基础选择三 项实验，例如ABO-HDN一般常采用冷冻放散 或者热放散法，Rh-HDN则多采用乙醚放散 法。
小结
3.对于游离和释放实验，只有当检出的抗体 是针对新生儿RBC上的抗原时才认为阳性
【实验室检查】
血液一般检查：WBC 13.2×109/L，Hb 78g /L，PLT 130×109/L，Ret 6.9%。
肝功能检查：总胆红素 823.7μmol/L，间 接胆红素 634.0μmol/L，血钙 1.62mmol/L，血糖4.8mmol/L
病例分析
1．诊断依据 根据母亲血型O型，父亲血型 为A型，患儿出生后24h内出现皮肤黄染， 且进行性加重，并出现嗜睡，精神萎靡， 少吃，少动。巩膜黄染，肝大，拥抱反射、 觅食反射减弱。实验室检查发现贫血，间 接胆红素显著升高，怀疑为新生儿溶血病、 胆红素脑病。
分别将1%浓度的阳性对照、阴性对照和患 儿红细胞各50ul加入到低离子/抗人球 蛋白卡中，1030rpm离心10min后观 察结果。
游离试验
原理 检测新生儿血清（血浆）中是否存 在针对新生儿RBC血型抗原的IgG血型抗体。
检测出
A型－－－抗A B型－－－抗B AB型－－－抗A、抗B或抗A、B Rh阳性－－－抗D（抗E、抗C等）
4. 释放试验的特点是敏感度高，由于释放试 验制备的抗体比直接抗球蛋白试验参与的 抗体量多2个数量级，因此有较高的敏感度， 是三项试验中敏感度最高的试验，因此该 试验阳性是判断新生儿溶血病最有利的证 据。
【家族史】 其母血型为O型，Rh阳性，无有毒物质 接触史，孕期体健，无高血压、抽搐等病史，其 父血型为A型，身体健康。
【体检】 反应差，哭声弱，巩膜黄染，全身皮肤 粘膜黄染，未见出血点。前囟1.4× 1.4cm2，平 软，双肺呼吸音清，心率155次/分，律齐，未闻 及病理性杂音。腹软，肝肋下约2cm，质软，边 缘锐利。脾肋下未及。四肢肌张力稍高，拥抱反 射、觅食反射减弱。
放散液制备
热放散
取洗涤压积RBC 1份（1ml左右）
+ 等量生理 盐水1份
56℃水浴 轻摇7分钟 立即离心
上清液即 为
放散液
放散液制备
乙醚放散：
1份RBC 1份盐水 2份乙醚
上层乙醚
振摇1min（排气）
中层RBC基质
离心3min
下层放散液
吸管吸出放散液，置37℃水浴中10~30min， 除尽乙醚后再离心鉴定抗体。
放散液中抗体的检测（卡式法）
ABO-HDN放散试验
酶处理AC 酶处理BC 酶处理OC 放散液
酶A管 酶B管 酶O管
50μl
50μl
50μl
25μl 25μl 25μl
放散液中抗体的检测（卡式法）
Rh-HDN放散试验
酶处理 1号细胞 2号细胞
3号细胞
放散液
1
50μl
2
50μl
3
50μl
25μl 25μl 25μl
• 达亚美LISS/Coombs低离子/抗人球蛋白卡、 生理盐水液、抗A，抗B单克隆血清、抗A,B 血清、IgM抗D试剂、IgG抗D试剂、ABO反定 型细胞、筛选细胞、谱细胞、木瓜酶、乙 醚等
实验方法
1、准备：离心分离血浆和RBC，用 生理盐水洗涤RBC3次，取少量RBC 分别配成1%和5%浓度的RBC悬液。 血清和洗好的压积RBC备用。
50μl
25μl
3
50μl
25μl
37℃孵育15min，以1030rpm离心10min。观 察结果。
ABO-HDN游离试验结果判断
Ac Bc Oc +- - ++++/- +/- + -- -
意义 存在游离的抗A抗体 存在游离的抗B抗体 存在游离的抗A、抗B抗体或抗A,B抗体 存在游离的ABO血型系统以外抗体 没有游离抗体
2、新生儿ABO及Rh血型鉴定:试管法。
（1）取试管4支，分别注明抗A、抗B、抗 A,B和抗D;
（2）分别加入抗体试剂，1滴;
（3）每支试管加入患儿5%红细胞悬液1滴;
（4）3400rpm离心15s，轻轻摇动试管观 察结果。
3、直接抗球蛋白试验: 阳性对照：IgG抗D致敏的O型红细胞悬液 阴性对照：正常人O型红细胞悬液
• 只有当血清中检出相应抗体，同时新生儿 RBC上又存在对应抗原时才认为游离试验 阳性。
• Rh-HDN游离试验结果判断：任何一孔出 现凝集则血清中存在不规则抗体，需进一 步做抗体鉴定。三孔均不出现凝集则血清 中不存在不规则抗体。
释放试验
原理 利用特殊的方法将致敏在新 生儿红细胞上的抗体放散下来， 然后再检测放散液中的抗体。
游离试验（抗球蛋白卡式法）
ABO-HDN游离试验（细胞浓度1%）
A型RBC B型RBC O型RBC 婴儿血浆
Ac孔 50μl
25μl
Bc孔
50μl
25μl
Oc孔
50μl
25μl
游离试验（抗球蛋白卡式法）
Rh-HDN游离试验（细胞浓度1%）
1号细胞 2号细胞 3号细胞 婴儿血浆
1
50μl
25μl
2
2．辅助检查结果对病情的提示
（1）血红蛋白浓度降低、网织红细胞增加、 间接胆红素升高，提示存在溶血性贫血。
（2）间接胆红素高于342.0μmol/L，提 示患儿处于胆红素脑病。
3．需进行的进一步检查 患儿血型、直抗实 验、血清游离抗体实验、红细胞抗体释放 实验。
新生儿溶血病的定义
• HDN是指因母、婴血型不合而引起的胎儿 或新生儿同种免疫性溶血，出现黄疸、贫 血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿 死亡等溶血病的症状和合并症。
新生儿溶血病检测的结果判断
直抗试验 游离试验 释放试验
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+
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+
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+
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+
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+
+
结论 不能证实为由血型抗体引
起的新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 可疑为新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病 证实为ABO新生儿溶血病
HDN的分类
• ABO-HDN • Rh-HDN • 其他血型系统-HDN
ABO-HDN和Rh-HDN的区别
ABO-HDN
Rh-HDN
病因
ABO血型不和
Rh血型不和
母亲血型 O型多见
Rh阴性
婴儿血型 A、B、AB型
Rh阳性
发病率
3～5%
较低
免疫刺激 不需
孕产史、输血史
首发胎数 第一胎
第二胎（外祖母学说除外）
直抗
-～Fra Baidu bibliotek+
1+以上
放散液制备 冷冻、热放散
乙醚放散
换血治疗 O型RBC
Rh血型同母亲
AB型血浆 ABO血型同婴儿型或O型血
新生儿溶血病检测方法及原理
• 新生儿ABO及Rh血型鉴定
• “三项试验” ： 直抗试验 游离试验 释放试验
实验器材
• Baso血型专用离心机、达亚美恒温孵育器 （ID-Incubator 37 SⅠ）、达亚美卡式离 心机(ID-Centrifuge 12 SⅡ)、水浴箱和 微量移液器等
新生儿溶血病
（Hemolytic disease of newborn， HDN ）
病例资料
患儿，女，3天 【主诉】 皮肤黄染3天，伴嗜睡，少动。 【现病史】 患儿系G1P1，孕36周，自然分娩，
生后24h内出现皮肤黄染，且进行性加重，伴 嗜睡，精神萎靡，少吃，少动。院外退黄治疗 效果不佳，为进一步治疗，遂来我院，门诊以 “新生儿黄疸”收入我科。
37℃孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。
释放试验结果判断
酶处理Ac + +
+/-
-
ABO-HDN放散试验结果判断
酶处理Bc 酶处理Oc 意
义
-
- 释放出IgG抗A抗体
+
- 释放出IgG抗B抗体
+
- 释放出IgG抗A、抗B
抗体或抗A,B抗体
+/-
+ 释放出ABO血型系统
以外抗体（加做谱细胞）