血糖测定

葡萄糖试剂盒测定法： ⑵ 葡萄糖试剂盒测定法：
血糖浓度是相对恒定的， 血糖浓度是相对恒定的 ， 这是由于体内存在着各 种调节血糖浓度的生理机制。 种调节血糖浓度的生理机制。 饱食和大量食糖后大量葡萄糖进入血液， 饱食和大量食糖后大量葡萄糖进入血液 ， 使之血 糖浓度增高， 糖原的合成速度随之增大， 糖浓度增高 ， 糖原的合成速度随之增大 ， 但血糖 浓度不久即恢复到正常。 浓度不久即恢复到正常。 长时间运动中血糖也有下降现象， 长时间运动中血糖也有下降现象 ， 下降程度因人 而异。 如马拉松赛跑时， 而异 。 如马拉松赛跑时 ， 中途退场者多因血糖下 降而被迫终止比赛， 能坚持跑到底， 成绩优异者， 降而被迫终止比赛 ， 能坚持跑到底 ， 成绩优异者 ， 血糖不下降或下降很少， 血糖不下降或下降很少 ， 所以血糖是评定运动耐 力素质，监控耐力训练的生化指标之一。 力素质，监控耐力训练的生化指标之一。
沸水浴5 min，趁热加酸性硫酸高铁铵溶液 沸水浴5 min，
计算： 计算
指葡萄糖相对分子质量； ： 等于 等于10dl 注：180.2指葡萄糖相对分子质量；10：1L等于 指葡萄糖相对分子质量 正常值： 正常值： 80~120mg%，平均 ，平均106mg%。 。
试剂盒测定法： ⑵ 试剂盒测定法： 如：采用浙江东瓯生物工程有限公司生产的葡萄糖 测定试剂盒，按其操作步骤略加改进。 测定试剂盒，按其操作步骤略加改进。 基本参数： ① 基本参数： 方法：终点法；波长：500nm；比色光径：0.5cm或 方法：终点法；波长：500nm；比色光径：0.5cm或 1cm；反应温度：37℃；反应时间：10min；标本/ 1cm；反应温度：37℃；反应时间：10min；标本/ 试剂：1:150。 试剂：1:150。
计算： ③ 计算：
⑶ 标准曲线制法 标准曲线就是一系列不同浓度（ 含量） 标准曲线就是一系列不同浓度 （ 含量 ） 标准溶 液的光密度值对其相应的浓度（ 含量） 作图， 液的光密度值对其相应的浓度 （ 含量 ） 作图 ， 所得的坐标曲线。 所得的坐标曲线。 标准曲线使测定工作简便， 标准曲线使测定工作简便 ， 当需要测定大批样 品或多次测定时， 制作标准曲线， 品或多次测定时 ， 制作标准曲线 ， 可免去标准 管和对每份样品的计算， 管和对每份样品的计算 ， 只需作测得的各样品 光密度数值， 光密度数值 ， 查标准曲线便可迅速得出该样品 的浓度（或含量） 的浓度（或含量）。
⑵ 试剂 ① 0.03 mol/L H2SO4 ② 1%钨酸钠 碱性铁溶液： 铁氰化钾0 无水碳酸钠2 ③ 碱性铁溶液 ： 铁氰化钾 0.8g ， 无水碳酸钠 2.0g ， 蒸馏水溶解并至200ml，贮于棕色瓶中。 200ml 加 蒸馏水溶解并至200ml，贮于棕色瓶中。 酸性硫酸高铁铵溶液： 称取硫酸高铁铵2 ④ 酸性硫酸高铁铵溶液 ： 称取硫酸高铁铵 2.0g ， 溶于50ml蒸馏水中 加入85 磷酸20ml， 50ml蒸馏水中， 85% 20ml 溶于50ml蒸馏水中，加入85%磷酸20ml，然后用纯 净蒸馏水定容到100ml。 100ml 净蒸馏水定容到100ml。
按表3 10操作 操作： ② 按表3-10操作：
表3-10 试剂盒操作表
加入物 （l） l 血清 标准液 试剂 空白管 — — 1500 标准管 — 10 1500 测定管 10 — 1500
混匀置37℃ 水浴箱中保温10min， 500nm波长 ， 以空白管 波长， 混匀置 ℃ 水浴箱中保温 ， 波长 调零，用小号比色皿装盛溶液，测定各管吸光度。 调零，用小号比色皿装盛溶液，测定各管吸光度。
Biblioteka Baidu
4 实验方法与步骤
福林—马尔露斯（Folin-Malmors） ⑴ 福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法 ① 取样 两位同学一组，分别取指尖血20ul，室温静置， 20ul 两位同学一组 ， 分别取指尖血 20ul ，室温静置， 制备 血清；采血后分别食用蔗糖100 及面包100 100g 100g 30min min后 血清；采血后分别食用蔗糖100g及面包100g，30min后 同上采血，制备血清。 同上采血，制备血清。 ② 血液中葡萄糖的测定 在离心管中加入0 ml（ 03mol/L 硫酸， mol/L） 在离心管中加入 0.5ml （ 0.03mol/L ） 硫酸 ， 取指尖血 02ml加入硫酸液中，混匀后加1 钨酸钠溶液0 48ml ml加入硫酸液中 ml， 0.02ml 加入硫酸液中 ， 混匀后加 1% 钨酸钠溶液 0.48ml ， 静置10min，离心5min（3000r/min 10min r/min） 取上清液0 静置10min，离心5min（3000r/min），取上清液0.5ml 入测定管，按表3-9操作测定。 入测定管，按表3 操作测定。
按表3 11操作，并绘标准曲线。 按表3-11操作，并绘标准曲线。 操作
表3-11单位：（ml） 11单位：（ml） 单位：（ml 管号 标准液II 标准液II 蒸馏水 碱性铁溶液 硫酸高铁铵溶液 蒸馏水 0 0 0.5 1 1 4.5 1 0.1 0.4 1 1 4.5 50 2 0.2 0.3 1 3 0.3 0.2 1 4 0.4 0.1 1 1 4.5 200 5 0.5 0 1 1 4.5 250
正常值： 3.8970mg/dl） 正常值： 3.89-6.11mmol/L （70-110 mg/dl） 单位换算：mg/dl× 单位换算：mg/dl× 0.0555 = mmol/L
3 实验器材与试剂
⑴ 器材
采血针、吸血管、超声清洗机、离心管、 采血针、吸血管、超声清洗机、离心管、台式 离心机、试管架、水浴箱、可见光分光光度计、 离心机、试管架、水浴箱、可见光分光光度计、 移液管
6 思考题
比较不同品种糖饮食前后血糖的变化， ⑴比较不同品种糖饮食前后血糖的变化，并 作出相应解释。 作出相应解释。 用本实验方法测定血糖， ⑵用本实验方法测定血糖，应注意哪些因素 方能获得准确的结果？ 方能获得准确的结果？
5 注意事项
标准曲线要通过原点，因为空白管OD= OD=0 ⑴ 标准曲线要通过原点，因为空白管OD=0； 标准曲线的斜率要适中， 与横、 纵轴成45 45° ⑵ 标准曲线的斜率要适中 ， 与横 、 纵轴成 45° 角 为宜，这样误差小； 为宜，这样误差小； 要保持测定做标准曲线实验条件的一致性（ ⑶ 要保持测定做标准曲线实验条件的一致性 （ 分 光光度计也要一样） 光光度计也要一样）； 加硫酸高铁铵溶液后静置1min的目的 的目的， ⑷ 加硫酸高铁铵溶液后静置 1min 的目的 ， 是利用 余热进行反应。 余热进行反应 。 若在室温较低的情况下作标准曲 线，应静置10min才加4.5ml水，这样1管显色才充 应静置10min才加4 ml水 这样1 10min才加 分。
实验九
血糖的测定与应用
1 实验目的
掌握血糖的测定方法、原理及应用； ⑴ 掌握血糖的测定方法、原理及应用； ⑵ 了解血糖的正常值及糖饮食对血糖浓度 的调节作用。 的调节作用。
2 实验原理
福林—马尔露斯（Folin-Malmors）超微量法： ⑴ 福林 — 马尔露斯 （ Folin-Malmors ） 超微量法 ： 在热碱溶液中的葡萄糖可将高铁氰化钾还原为低 铁氰化钾，后者再与硫酸高铁盐作用生成亚铁氰 铁氰化钾， 化铁（普鲁士蓝） 化铁 （ 普鲁士蓝 ） ， 与同样处理的葡萄糖标准液 进行比色，即可求出血糖含量。 进行比色，即可求出血糖含量。 其反应如下： 其反应如下：
⑤ 葡萄糖标准液
贮存液（ 10mg/ml mg/ml） 称取纯无水葡萄糖1 00g 25% 贮存液 （ 10mg/ml ） ： 称取纯无水葡萄糖 1.00g 用 0.25% 苯 甲酸溶液溶解，倾入100ml容量瓶 最后用0 25% 100ml容量瓶， 甲酸溶液溶解 ，倾入100ml容量瓶， 最后用0.25% 苯甲酸溶 液稀释至刻度，摇匀，放冰箱保存。 液稀释至刻度，摇匀，放冰箱保存。 标准糖应用液I 02mg/ml mg/ml） 准确吸取贮存液0 ml， 标准糖应用液I（0.02mg/ml）：准确吸取贮存液0.2ml，置 100ml容量瓶中，加入0 25%苯甲酸液至刻度（ ml容量瓶中 于 100ml容量瓶中， 加入0.25%苯甲酸液至刻度（ 用于标准 管测定） 管测定）。 05mg/ml 标 准 糖 应 用 液 II （ 0.05mg/ml ） ： 准 确 吸 取 上 述 贮 存 液 ml，置于100ml容量瓶中 100ml容量瓶中， 25% 0.5ml，置于100ml容量瓶中，用0.25%苯甲酸液稀释至刻度 作标准曲线用） （作标准曲线用）。 25% 苯甲酸溶液： 称取苯甲酸2 0.25% 苯甲酸溶液 ： 称取苯甲酸 2.5g ， 加入煮沸的蒸馏水 1000ml ml中 使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。 1000ml中，使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。
沸水浴5min， 沸水浴5min，取出趁热加酸性硫酸高铁铵溶液 5min 1 1 静置1min 1min后加水 静置1min后加水 4.5 100 4.5 150 混匀后比色 相当于血糖(mg%) 相当于血糖(mg%) 0 λ=670nm） OD（λ=670nm）
用光密度作纵坐标，葡萄糖浓度（mg% 用光密度作纵坐标 ， 葡萄糖浓度 （ mg% ） 作横坐 标 ， 将不同浓度的各标准管读数分别点在坐标纸上 （内侧），通过各点作一平滑曲线，在曲线上可查得 内侧） 通过各点作一平滑曲线， 测定管的血糖含量，如图3 测定管的血糖含量，如图3-4。
表3 - 9
管 号 葡萄糖标准应用液I 葡萄糖标准应用液I 0.02mg/ml） （0.02mg/ml） 蒸馏水 碱性铁溶液 酸性硫酸高铁铵溶液 蒸馏水 OD（λ=670nm 以空白管 OD（ 调零） 调零） 相当血糖mg% 相当血糖mg%
单位：（ml） 单位：（ml） ：（ml
空白管 — 0.5 1 1 4.5 标准管 0.5 — 1 1 4.5 混匀后比色 测定管 — — — 1 4.5