2总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100 可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、 吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色， 即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl
沸水浴，30min (不时搅拌) 冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸） 蒸馏水定容至100ml,混匀
合上盖，0键校零MODE键切换到A，参比 Nhomakorabea放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
管号
试剂
标准葡萄糖溶液 /ml
0
1
2
3
4
5
6
7
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
实验二 总糖和还原糖的测定(DNS)
实验二总糖和还原糖的测定──3,5－二硝基水杨酸比色法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用比色法测定还原糖的方法。
二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。
在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
三、试剂和器材1、试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取5.0g DNS溶于200ml 2mol/L NaOH溶液中（不适宜用高温促溶），接着加入到酒石酸甲钠的热溶液中（192g就是酸甲钠溶于500ml水中），再加入5g结晶酚和5g亚硫酸钠，摇匀溶解后，冷却定容至1000ml，暗处保存备用。
葡萄糖标准溶液：准确称取在105℃的温度下烘干至恒重的葡萄糖0.5g，加少量蒸馏水溶解后，以蒸馏水定容至1000ml。
6mol/L HCl：取250ml浓HCl（35%～38%）用蒸馏水稀释到500ml。
碘－碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。
6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中。
0.1% 酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml无水乙醇中。
1％淀粉2、材料淀粉。
3、器材WFJ UV－2000型分光光度计，水浴锅，电炉，10ml比色管。
四、操作方法1、葡萄糖标准曲线制作取6支10ml 比色管并编号，按下表顺序加入各种试剂。
（表1）混匀后置沸水浴上加热5min 进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水4.0mL ，摇匀（用10mL 比色管，加蒸馏水补齐至5mL 刻度线），在540nm 波长下，用0号管调零，分别读取各管的吸光度值A 540。
以葡萄糖含量（mg ）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2、淀粉水解及还原糖的提取取1％淀粉25mL ，放在100mL 烧杯中，加入6mol/L HCl 10mL ，然后加入蒸馏水15mL ，混匀，于沸水浴中保温30min ，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I 2-KI 溶液检查水解是否完全。
02 实验二 还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸,DNS)(考核15%)
四、实验试剂
1. 葡萄糖标准液（1.0 mg/mL）：100 mg葡萄糖，
用水定容至100 mL，4℃保存。
2. DNS：6.3 g DNS和262 mL 2.0 mol/L NaOH溶
液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液
中，加5.0 g结晶酚和5.0 g亚硫酸钠，搅拌，冷却后
用水定容至1000 mL，棕色瓶中存储。
水解完全。冷却至室温，加1滴酚酞指示剂，用6.0 mol/L
NaOH和至溶液呈微红色，转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定 容。混匀后过滤，取滤液10 mL加入100 mL容量瓶中，用蒸 馏水定容。混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总 糖测定。
4.样品测定
管号 试剂 待测溶液（mL） 0 1.0 1.0 空白 还原糖待测液 总糖待测液
蒸馏水（mL）
DNS（mL）
1.0
2.0
0
2.0
0
2.0
沸水加热5 min，取出却至室温。
蒸馏水（mL） 5.0 5.0 5.0
A540 nm
六、结果计算
按照下列公式计算红薯还原糖的百分含量。
(还原糖)=
C×பைடு நூலகம்V
m
× 稀释倍数× 100%
：还原糖的质量分数（%） C：还原糖的质量浓度（mg/mL）
实验二
还原糖和总糖的测定 （3,5-二硝基水杨酸法）
一、实验目的
掌握还原糖和总糖的测定原理，学
习用3,5-二硝基水杨酸（DNS）测定还原
糖的方法。
二、实验原理
单糖和部分寡糖含有醛基或酮基，具 有还原性，属于还原糖；多糖和蔗糖属于 非还原性糖。
多糖能被酸水解为单糖，通过测定水
植物组织中总糖和还原糖含量的测定
3.3、糖含量测定方法
相对密度法 折光法 旋光法
物理法
直接滴定法 还原糖法
(改良的兰—爱农法）
高锰酸钾法
萨氏法
化学法
碘量法
3，5—二硝基水杨酸
酚—硫酸法 比色法蒽酮法半胱 Nhomakorabea酸—咔唑法
纸色谱 薄层色谱 色谱法 GC HPLC β—半乳糖脱氢酶测半乳糖、乳糖 酶法 葡萄糖氧化酶测葡萄糖 发酵法 ——测不可发酵糖 重量法——测果胶、纤维素、膳食纤维素
乘以0.9。
碘量法
(1) 原理 样品经处理后，取一定量样液于碘量瓶中，加入一定量过量的碘液和 过量的氢氧化钠溶液，样液中的醛糖在碱性条件下被碘氧化为醛糖酸钠， 由于反应液中碘和氢氧化钠都是过量的，两者作用生成次碘酸钠残留在 反应液中，当加入盐酸使反应液呈酸性时，析出碘，用硫代硫酸钠标准 溶液滴定析出的碘，则可计算出氧化醛糖消耗的碘量，从而计算出样液 中醛糖的含量。 醛糖 + I2 +3 NaOH = 醛糖酸钠 + 2 NaI +2H2O I2 + 2 NaOH = NaIO + NaI + H2O NaIO + NaI + 2 HCl = I2 + 2 NaCl + H2O (2)适用范围 本法用于醛糖和酮糖共存时单独测定醛糖。适用于各类食品，如硬糖、 异构糖、果汁等样品中葡萄糖的测定。
摇匀，沸水浴10mins，取出，用自来水（或冰浴）冷却，直到透明，目的是中止反应，室温放 10mins在620nm处测吸光值
4.2、植物组织中总糖与还原糖溶液 的获取
(1)还原糖：
1g土豆 取滤液5mL, 定容到100mL 混匀,过滤
3mL水
研成匀浆 冷却定到 100mL
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水杨酸法在波长540nm下，一定浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（张茜配置）（4）6mol/L NaOH（张茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
植物还原糖和总糖的测定实验报告
植物还原糖和总糖的测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定植物中还原糖和总糖的含量，了解植物中糖的组成和含量，并掌握测定糖的方法。
实验原理：还原糖是指具有还原性的糖类物质，例如葡萄糖、果糖等。
总糖是指所有糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
本实验测定还原糖和总糖的方法是利用硫酸铜和碱性硫脲试剂的反应。
还原糖能够将硫酸铜（CuSO4）还原成氧化亚铜（Cu2O），从而产生红色沉淀。
而非还原糖则不能起到还原作用，因此不会产生红色沉淀。
实验材料和仪器：材料：植物样品、蒸馏水、硫酸铜溶液、碱性硫脲试剂溶液、氯仿、无水乙醇。
仪器：试管、移液管、离心机、恒温水浴。
实验步骤：1. 将植物样品研磨成细粉。
2. 取适量植物样品加入试管中，并加入适量蒸馏水，使样品完全浸没。
3. 将试管放入恒温水浴中加热，使水浴温度保持在70℃左右，加热30分钟，使植物中的糖充分溶解。
4. 将试管取出，冷却至室温。
5. 取1 mL植物提取液加入新的试管中，加入1 mL硫酸铜溶液，混匀。
6. 加入2 mL碱性硫脲试剂溶液，混匀。
7. 加入10 mL氯仿，并用离心机离心5分钟，分离出氯仿层。
8. 将氯仿层转移至干净的试管中，加入2 mL无水乙醇，混匀。
9. 加热试管，使氯仿和乙醇挥发，得到含有还原糖的溶液。
10. 将溶液转移到比色皿中，使用分光光度计测定溶液的吸光度，记录吸光度值A1。
计算结果：1. 计算还原糖的含量：根据实验原理可知，还原糖的含量与吸光度呈线性关系。
根据已知浓度的标准溶液制作一系列不同浓度的还原糖标准曲线，通过测定待测溶液的吸光度，可以根据标准曲线确定还原糖的含量。
2. 计算总糖的含量：首先将植物提取液进行酶解，将非还原糖转化为还原糖，然后按照上述方法测定还原糖的含量。
最后，将还原糖的含量乘以一个修正系数，即可得到总糖的含量。
实验结果：根据实验步骤测定，得到待测溶液的吸光度值A1为X。
通过标准曲线，可以确定还原糖的含量为Y。
实验二总糖和还原糖的测定
六、改进实验建议
▪ 附：仪器和试剂
▪ 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。
▪ 3,5-二硝基水杨酸试剂：
▪ 甲液：溶解6.9g结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 并用水稀释至69ml，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。
▪ 乙液：称取255g酒石酸钾钠加到300ml 10%氢氧化钠溶 液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水杨酸溶液。
▪
将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。
在室温放置7-10天后使用。
▪ 6 mol•L-1 盐酸
▪ 10%氢氧化钠溶液
▪ 酚酞指示剂
▪ 碘～碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏 水中。
▪ （2）样品中总糖的水解提取：
▪ 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 水，在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上 述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混 匀备用。
=
积（ml）×稀释倍数
测定用提取液体积（ml）× 样品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数
总糖（mg•g-1）=源自测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
五、讨论分析
▪ 1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 包括哪些？
▪ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定
还原糖的测定方法还原糖和总糖的测定还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关1系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1( 实验材料小麦面粉;精密pH 试纸。
2( 主要仪器(1)具塞玻璃刻度试管:20mL×11(2)大离心管:50mL×2(3)烧杯:100mL×1(4)三角瓶:100mL×1(5)容量瓶:100mL×3(6)刻度吸管:1mL×1;2mL×2;10mL×1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)离心机(10)扭力天平(11)分光光度计3( 试剂(1)1mg/mL 葡萄糖标准液2准确称取80?烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4?冰箱中保存备用。
(2)3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g 结晶酚和5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
食品中总糖、还原糖的测定
食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定1安全性评估谨防试剂灼伤：加入碱性酒石酸铜甲乙液、20%氢氧化钠和2%盐酸试剂时，需佩戴一次性乳胶手套。
谨防玻璃割伤：使用前检查玻璃仪器外观完好无损，使用时注意轻拿轻放，清洗时，需佩戴防割手套。
谨防高温烫伤：滴定时，调节滴定管滴定速度的手需佩戴涂脂手套/一次性乳胶手套，且不裸露手腕皮肤，双手不碰及电陶炉表面。
2 目的规范食品中转化糖（总糖）、还原糖的检测流程，确保检测结果的准确性。
3 范围适用于各类食品中转化糖（总糖）、还原糖的测定。
4 依据参照GB 5009.7 - 2016食品安全国家标准食品中还原糖的测定、GB 5009.8 - 2016食品安全国家标准食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定。
5 检测原理还原糖（直接滴定法）：试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以亚甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用葡萄糖标准溶液标定），根据样品液消耗体积计算还原糖含量。
转化糖（总糖）（酸水解-莱茵-埃农氏法）：试样经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定，根据样品液消耗体积计算转化糖（总糖）含量。
注：①为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色络合物，而不再析出红色沉淀，其反应如下：Cu2O↓+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH②碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
6 试剂和仪器：实验室三级用水6.1 试剂2 %盐酸溶液，20 %氢氧化钠溶液，碱性酒石酸铜溶液：碱性酒石酸铜甲液（以下简称A 液）（硫酸铜+亚甲基蓝）+碱性酒石酸铜乙液（以下简称B液）（酒石酸钾钠+氢氧化钠+亚铁氰化钾），乙酸锌溶液（219 g/L），亚铁氰化钾溶液（106 g/L），葡萄糖标准溶液。
实验二 总糖和还原糖的测定
实验内容
1. 葡萄糖标准曲线的制备； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 (ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1、比色时为什么要设计空白管？ 2、糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？ 3、总糖和还原糖的提取有何不同？
2、样品中还原糖的提取
准确称取1g藕粉，放在100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入40 ml蒸馏水，混 匀，于50℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌， 使还原糖浸出。全部收集在50 ml的容量瓶中定 容，过滤出5ml，即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
准确称取0.5g藕粉，放在大试管中，加入6 M HCl 5ml，蒸馏水8ml，在沸水浴中加热15min，取出 1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是 否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕， 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6M NaOH 溶液中和至溶液呈微红色，定容到50ml，取5ml 再次定容至50ml，过滤，取滤液用于总糖测定。
4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目 试管号
样品溶液（ml）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验2 还原糖及总糖的测定
基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。
实验二、总糖和还原糖的测定
实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法。
费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。
还原糖和总糖的实验报告
还原糖和总糖的实验报告实验目的本实验旨在使用化学方法测定还原糖和总糖的含量，并通过实验结果对食品样品进行分析。
实验材料•还原糖标准溶液•总糖标准溶液•食品样品•蒸馏水•试剂瓶•烧杯•称量器•离心机•恒温水浴•分光光度计•显色剂实验步骤1.准备工作–将实验室器材清洗干净。
–准备还原糖和总糖的标准溶液。
–根据实验需要，调整分光光度计的波长和基线。
2.样品制备–将食品样品加入烧杯中，使用称量器测量准确的样品质量。
–加入适量的蒸馏水，使样品溶解均匀。
3.酶解还原糖–取一定量的样品溶液，放入恒温水浴中加热。
–加入适量的酶解液，保持一定的温度和时间，使还原糖完全酶解。
4.离心分离–将酶解液离心一段时间，使得悬浮的物质沉淀在底部。
–将上清的液体转移到试剂瓶中。
5.光度计测定–在分光光度计中设置合适的波长。
–取一定量的样品溶液和标准溶液，放入分光光度计中分别测定吸光度值。
6.统计数据–根据测得的吸光度值，使用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。
–记录每个样品的测量值和计算结果。
7.数据分析–对比不同食品样品中的还原糖和总糖含量。
–推断食品样品的甜度和糖分含量。
实验注意事项1.实验过程中要注意实验器材的洁净，避免污染样品。
2.在酶解过程中，要控制好温度和时间，确保还原糖能够完全酶解。
3.分光光度计的使用要按照正确的方法进行操作，确保测量结果准确可靠。
4.实验数据的记录要详细，以便后续的数据分析和结果推断。
实验结果通过实验测定和计算，我们得到了不同食品样品中的还原糖和总糖的含量。
根据这些数据，我们可以比较不同样品之间的甜度和糖分含量，进一步分析食品的品质和营养成分。
实验结果将有助于我们了解食品的糖分成分，为食品安全和营养评估提供数据支持。
总结通过本次实验，我们掌握了使用化学方法测定还原糖和总糖含量的实验步骤和技巧。
实验结果为我们分析食品样品的甜度和糖分含量提供了数据支持。
在今后的食品分析和研究中，我们可以运用这些方法来评估食品的品质和营养成分，并为食品安全和营养评估提供科学依据。
南京大学生化实验一：总糖和还原糖含量的测定
总糖和还原糖含量的测定实验报告实验目的:植物体的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体的分布，不仅反映植物体碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
实验原理：1.还原糖还原糖是具有还原性的糖类的统称。
分子中含有游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、麦芽糖等。
2.美拉德反应美拉德反应广泛分布于食品工业中的非酶褐变反应：还原糖与氨基酸/蛋白质在加热时发生的一系列复杂反应，生成棕/黑色的大分子物质，同时还产生具有不同气味的中间体分子，包括还原酮、醛和杂环化合物，为食物提供诱人可口的风味和诱人的色泽。
3.还原糖的测定方法：3,5-二硝基水酸法在波长540nm下，一定浓度围，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，可利用标准曲线法测定样品中的还原糖含量。
利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量来对总糖进行测定。
mbert-Beer定律A=lg(I 0/I)=lg（1/T）=KClA：吸光度I0：入射光强度I：透射光强度T：透光度（透射比）K：比例常数l：溶液厚度实验仪器，试剂与材料：1.实验仪器：UV2600紫外可见分光光度计2.实验试剂：（1）1.0mg/ml标准葡萄糖（2）3,5-二硝基水酸（DNS试剂）（3）6mol/L HCl（茜配置）（4）6mol/L NaOH（茜配置）（5）碘-碘化钾溶液3.实验材料：市售面粉。
实验步骤：1.还原糖的提取准确称取0.20g面粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆。
，转入三角烧瓶中，用约30ml蒸馏水冲洗研钵2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二总糖和还原糖的测定(精)
五、计算
X= 0.5 V空 － V标 X（V空－V未知）
六、注意事项
1.
各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸
水中，再同时从沸水浴中取出。
2.
在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会
影响滴定结果的准确性。
3.
滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切 勿将它与终点混淆。
七、 思考题
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间 接滴定？两种滴定方法各有何优点？
沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟
2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的 试管中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H Cu2O + I2 + H + I2 + 2 S2O3 2-
+
3 I 2 + 3 H 2O Cu
2+Βιβλιοθήκη + I ¯ + H2 O
S4O6 2-+ 2 I¯
因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的 标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量。
三、试剂与器材
1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、
0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1％淀粉指示剂
2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅
四、操作步骤
1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6
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4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目
空白
管号 样品溶液（ml）
0
1
1
1
3,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 2
2
A540
还原糖
2
3
1
1
2
2
总糖
4
5
6
1
1
1
2
2
2
2、加完试剂后，于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流 动水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml，摇匀，在540 nm波长 处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量。
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1. 比色时为什么要设计空白管？ 2.总糖和还原糖的提取有何不同？ 3. 若以葡萄糖标准曲线，测定1mg/ml麦芽
1
蒸馏水 (ml) 1
0.8 0.6 0.4 0.2
0
葡萄糖含量 (mg/ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8
1
A540
2、在上述试管中分别加入DNS试剂2 ml，于沸水浴中加热 2 min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水 9 ml，摇匀，在540 nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含 量（mg/ml）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
3、样品总糖的水解及提取
l 准确称取0.5 g藕粉，放在大试管中，加入6 M HCl 10 ml，蒸馏水15 ml，在沸水浴中加热15 min，取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液 检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝 色。水解毕，冷却至室温后，转入烧杯中，加入1 滴酚酞指示剂，以6 M NaOH溶液中和至溶液呈 微红色，定容到50 ml，取5 ml再次定容至50 ml ，然； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 （ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8
均多糖：淀粉、纤维素等 杂多糖：透明质酸等
实验原理
• 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与 还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱 性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收， 在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系， 利用比色法可测定样品中的含糖量。
糖（按还原糖测定），所测的浓度会有何 不同？ 4. 如何测定可乐溶液中还原糖的浓度？
• 用两个比色皿测定。 • 一个放空白对照；另一个测定样品。 • 样品测定浓度从低到高。
2、样品中还原糖的提取
l 准确称取1g藕粉，放在100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入约40 ml蒸馏水， 混匀，于50℃恒温水浴中保温20 min，不时搅 拌，使还原糖浸出。将提取液转入50 ml的容量 瓶中，用蒸馏水定容至刻度。混匀，过滤。收 集滤液，用于还原糖测定。
实验二 总糖和还原糖的测定
──3,5－二硝基水杨酸法
目的要求
• 掌握还原糖和总糖的测定原理 • 学习用比色法测定还原糖的方法
双糖
蔗糖（sucrose）
D-葡萄糖 部分
D-果糖 部分
麦芽糖 （maltose
）
D-葡萄糖部分
D-葡萄糖部分
乳糖 （lactose
）
D-葡萄糖部分
D-半乳糖部分
多糖
非还原糖，难溶于水，不溶于有机溶剂，在 酸性条件下水解可生成寡糖或单糖