氯霉素说明书(简化版)

RIDASCREEN® Chloramphenicol

酶联免疫法定量检测氯霉素

摘要

RIDASCREEN®Chloramphenicol（编号：R1505）竞争酶标免疫分析法定量检测尿液、血清的氯霉素。试剂盒中包含有酶联免疫试验所需的所有试剂，包括标准溶液。试剂盒足够进行96次检测（包括标准）。定量检测需要微孔板酶标仪。

检测限：尿液、血清………………………………………………..………75ppt

回收率：尿液、血清 (80)

特异性：RIDASCREEN®Chloramphenicol检测的特异性，是通过分析相应抗生素的交叉

反应性而得到的。

Chloramphenicol..................................................................100 %

Chloramphenicol base ......................................................... 75 %

Thiamphenicol.................................................................. < 0.1 %

1. 用途

RIDASCREEN®Chloramphenicol竞争酶标免疫分析法定量检测牛奶，奶粉，蜂蜜，虾，肉，鱼粉和鸡蛋中的氯霉素。

2. 概要

氯霉素是一种广谱抗生素，具有很好的抗菌效果，常用于畜牧业生产中，然而，氯霉素会造成人的再生障碍性贫血，而且诱发浓度还没有确定，所以目前已经禁止在动物及食品中使用氯霉素。

3. 测定原理

测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对氯霉素的抗体，加入氯霉素标准或样品溶液和氯霉素酶标记物，游离的氯霉素与氯霉素酶标记物竞争氯霉素抗体（竞争性酶联免疫法）。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质/发色剂加入到孔中。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm测量，吸光强度与样品中的浓度成反比。

4.提供的试剂

每一个盒中的试剂足够进行96个试验（包括标准测定），盒中的材料如下

1×96孔板（12条×8孔，可以拆分为单孔）包被有捕获抗体。

6×标准溶液，1. 3ml/瓶

0 ppt (0标准), 25 ppt, 50 ppt, 100 ppt, 250 ppt, 750 ppt

氯霉素水溶液，直接应用液

1×酶标记物（0.7ml）…………………………………………红色帽过氧化物标记的氯霉素，浓缩液1×基质/发色剂（10ml）…….…………………………….…棕色帽红色溶液

1×反应终止液（14ml）……...……………….…………….....黄色帽包含有1N硫酸

1×缓冲液（100ml）用于酶标记物和样品的稀释

1×洗涤缓冲液（盐）10mM的磷酸盐缓冲液（pH 7.4），含有0.05%的Tween 20 5.操作者应该注意之事项

标准液含有含有氯霉素，使用时要特别小心。

反应终止液含有1N硫酸。

6.储存条件

保存试剂盒于2 - 8°C (35 – 46°F)，不要冷冻。

将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，并保存至2 - 8°C (35 – 46°F)。

基质/发色剂对光敏感，因此要避光保存。

不要使用超过有效期的试剂盒（见试剂盒标签）

不要交叉使用不同批号的试剂盒。

7.试剂变质的迹象

若红色的基质/发色试剂出现蓝色，表明发色剂变质，应当弃之。

0标准的吸光度值小于0.6个单位(A450nm<0.6)时，表示试剂可能变质。

8.样品处理

样品应当保存在阴凉避光处

9.1 尿液、血清（直接进行检测）

—取50ul尿样/血清+100样品稀释缓冲液混合后，取50ul进行分析

稀释倍数 (3)

检测限…………………………………………… 75 ng/kg (ppt)

定量检测限…………………………………….. ..75 ng/kg (ppt)

9.检测步骤

10.1 试验前准备

使用之前将所有试剂回升至室温(20 - 25°C, 68 - 77°F)。

洗涤缓冲液为PBS-tween缓冲液。将试剂盒中的洗涤缓冲液盐（见4.）完全用1L的蒸馏水溶解，配制好的洗涤缓冲液在2 - 8 °C (36 - 46 °F)下大约可保存4-6周。

另外可供选择的办法：可将袋中的缓冲液盐用100ml的蒸馏水混合，得到10倍浓缩液。此溶液在室温(20 - 25 °C / 68 - 77 °F)下可保存8-12周。

洗涤缓冲液在使用之前，用1份的浓缩液加入9份的蒸馏水

氯霉素酶标记物（红盖帽）为浓缩液，由于稀释的酶标记物稳定性不好，所以只稀释实际需用量的酶标记物。在吸取浓缩液之前，要仔细地轻轻振摇。用缓冲液以1: 11（1+10）的比例稀释酶标记物浓缩液（200µl 浓缩液+2ml缓冲液，足够4个微孔板条用）。

10.2测定程序

根据试剂盒推荐的洗板步骤进行操作，试验过程中不要让板孔干燥。

1. 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架，并记录标准及样品的位置。

2. 加入50μl的标准或处理好的样品到各自的微孔中，每个标准和样品应当做平行。

3. 加入50μl稀释的酶标记物到微孔底部，用手将轻轻摇动微孔板混合，在室温（20 - 25°C, 68 - 77°F）下孵育1小时。

4. 倒出孔中的液体，将微孔架倒置在吸水纸上拍打（每排拍打三次）以完全除去孔中的液体，用洗瓶或多通道移液器向孔中充满250μl洗涤缓冲液（见10.1），再次倒出孔中的液体，完全除去孔中的液体，再重复操作洗涤步骤两次以上。

5. 加入100μl基质/发色试剂到微孔中，用手将轻轻摇动微孔板混合，在室温（20 - 25°C, 68 - 77°F）下暗处孵育15分钟。

6. 加入100μl反应终止液到微孔中，用手将轻轻摇动微孔板混合，在450nm处测量吸光度值以空气为空白，必须在加入终止液后30分钟内读取光度值。