9-钱文静-2015版中国药典无菌检查法

四、2015年版《中国药典》无菌检查法的重大修订
1、实验环境的重大修订 2、培养基体系的重大修订 3、一、二、三部药典附录的整合修订。
四、2015年版《中国药典》无菌检查法的重大修订
3、一、二、三部药典附录的整合修订
（1）原《中国药典》三部的规定 生物制品无菌检查法规定样品接种硫乙醇酸盐流体培养 基为双份，分别置30～35℃、 20～25℃两个温度培养。以致 在取样量、检验量、接种方式、培养温度、阳性对照试验等 方面存在与二部不一致的规定。 （2）国际上生物制品无菌检查法没有作出特殊的规定。
（二）中国药典无菌检查法的发展 2010年版主要变化： 1、对无菌检查人员提出专业要求和培训。 2、增加了可选用其它经验证的稀释液、冲洗液。 3、方法验证试验－菌：金、大、桔、生、白、黑。 ４、总冲洗量不超过1000ml。 强调检验的过程控制，保证检验结果的准确性。
二、无菌检查法的发展历史
（三） 、无菌检查法的发展宗旨
2010年版 1、硫乙醇酸盐流体培养基 ——金黄色葡萄球菌、铜绿 假单胞菌、枯草芽孢杆菌、 生孢梭菌 2、改良马丁培养基 ——白色念珠菌、黑曲霉 2015年版 1、硫乙醇酸盐流体培养基 ——生孢梭菌、金黄色葡萄球 菌、铜绿假单胞菌 2、胰酪大豆胨液体培养基 ——枯草芽孢杆菌、白色念珠 菌、黑曲霉
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（二）、无菌检查的特点和意义
抽样检查是无菌检查的特点 当污染率为0.1%时，抽样20支进行无菌检查，通 过无菌检查的可能性为98%. 即当污染率为0.1%时， 要有95%以上的可信度检出其无菌不合格，需至少检 验3000件。——检出的难度 抽样、破坏性检查的特点决定无菌检查只能采取 一次性检查结论，这让无菌检查非常困难！
1985版 1990版
基本相同
85版阳性对照菌金葡1：1000
（二）中国药典无菌检查法的发展
培养基灵敏度检查－藤黄、 生孢、白念。 阳性对照：金葡10－6 ；生孢10－6 ；白念10－5 实验环境为100级洁净度，验证
1995版
1998年增补本 2000年版
阳性对照：金葡、生孢、白念均10 ～100个菌 抑细菌和抑真菌试验
（1）修订依据及意义：无菌检查的洁净环境不得低于生产 关键区的洁净环境要求！（2010版GMP中附录一《无菌药品》 和附录三《生物制品》中均规定，非最终灭菌产品各工序关键 操作环境应为B级背景下的A级。）
(一) 、2015年版无菌检查法主要修订的内容 2、实验环境规定的修订
2010 年版GMP 对洁净度的规定及确认标准
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2015年版 1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌 、枯草芽孢杆菌新鲜培养物 ——至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪 大豆胨琼脂培养基上； 2、接种生孢梭菌的新鲜培养物 ——至硫乙醇酸盐流体培养基中； 3、接种白色念珠菌的新鲜培养物 ——至沙氏葡萄糖肉汤培养基或沙氏葡 萄糖琼脂培养基上； 4、接种黑曲霉的新鲜培养物 ——至沙氏葡萄糖琼脂培养基上.；
1 5 50 100
表面微生物 接触 5指手 （ 55m 套 m） cfu / cfu / 手套 碟 1 1 5 25 50 5 － －
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29000 不作规定 不作规定
2014-9-16
(一) 、2015年版无菌检查法主要修订的内容 2、实验环境规定的修订 （2）无菌隔离器的使用和验证
隔离系统按相关的要求进行验证
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四、2015年版《中国药典》无菌检查法的重大修订 3、一、二、三部药典附录的整合修订 （4） 整合修订原则： 以国际发展趋势为主导，遵照2015年版药典 编制大纲的要求进行，以二部为基础，整合稿保 留了生物制品无菌检查法的特点，在检验数量、 检验量、阳性对照、培养温度方面互相兼顾，作 原则性要求而不作具体细则规定。致力于逐步修 订完善。
（二）、无菌检查的特点和意义 由于抽样概率的限制，通过无菌检查发现产品 微生物污染的可能性极低，而当前坚持无菌检查的 意义在于： 产品上市前发现重大污染事件的最后一道关口； 通过无菌检查的执行情况可以窥视其无菌控制存 在的问题。
三、无菌检查法的有关概念和新理念
(三)、无菌检查的新理念 1.全过程控制
悬浮粒子最大允许数/立方米 洁 净 度 级 别 A级 B级 C级 D级 静态 ≥0.5 μm 3520 3520 352000
3520000
微生物监测的动态标准(1) 浮游 菌 cfu/ m3 1 10 100 200
沉降 菌 （ 90m m） cfu /4h(2)
动态 ≥5.0 μm 20 29 2900 ≥0.5 μm 3520 352000 3520000 ≥5.0 μm 20 2900 29000
操作验证 隔离器完整性验证 灭菌验证 灭菌循环的验证 隔离器内部洁净度验证 仪器仪表的验证
其内部环境的洁净度须符 合无菌检查的要求。详见 “无菌检查用隔离系统验 证指导原则”
(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 3、培养基 ⑴培养基和培养温度的修订
2010年版
1.硫乙醇酸盐流体培养基 30～ 35 ℃； 20～25℃（三部） 2.改良马丁培养基 置 23 ～ 28 ℃培养。 3. 选择性培养基 4. 0.5%葡萄糖肉汤培养基 5. 营养肉汤培养基 6. 营养琼脂培养基 7. 改良马丁琼脂培养基
三、无菌检查法的有关概念和新理念 （一)、 无菌检查法的有关概念
1、无菌 是指某一物体或某一环境中不含有活的微生物。 用于检查药典要求无菌的药品、生物制
2、无菌检查法
品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 3、无菌操作 是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或
无菌器械等进行检验的过程中，能防止微生物污染与干扰的 一种常规操作方法。
收载封闭式过滤器
出厂－达30个/ 每种培养基 上市11支（瓶）、大容量5瓶、抗6支（瓶）
（二）中国药典无菌检查法的发展 2005年版
1、10000下局部100级，隔离系统 2、培养基适用性检查 3、方法验证试验 4、优先用封闭式薄膜过滤器 5、增加稀释液冲洗液品种。 9、延长培养时间为14天。 10、对表1 强调了“每种培养基最少检验数量”。 11、取消复试。
2015年版
1. 硫乙醇酸盐流体培养基 30～ 35 ℃；（20～25℃培养） 2. 胰酪大豆胨肉汤培养基（TSB） 置20 ～ 25℃培养。 3. 选择性培养基 4. 0.5%葡萄糖肉汤培养基 5. 胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）6. 沙氏葡萄糖肉汤培养基 7. 沙氏葡萄糖琼脂培养基
(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 3、培养基 ⑵ 培养基性能修订
一.药品微生物检验所面临的形势
1.医药产品的发展 2.注射用药品的挑战 3.药品微生物污染的反思 4.2015版中国药典的修订
Http://www.nifdc.org.cn
二、无菌检查法的发展历史
（一）、国外药典无菌检查法的发展 （一）、中国药典无菌检查法的发展 （三） 、无菌检查法的发展宗旨
来自百度文库
（一）国外药典无菌检查法的发展
1925年 1932年 1936年 1950年 1957年 1963年 1965年 1971年 1978年 1988年 1998年 2000年 2005年 英国首先使用直接接种法。 英国药典推荐使用直接接种法。 美国药典采用直接接种法。 美国药典推荐两种培养基用于需、厌气菌和真菌培养。 美国FDA和MILLIPORE公司推荐抗生素的无菌测试采用薄 膜过滤法。 英国药典收载薄膜过滤法。 美国药典对于非抑菌性药品引用薄膜过滤法。 欧洲药典第二版参照薄膜过滤法。 欧洲药典修订版推荐使用薄膜过滤法。 美国FDA规定不符合规定的样品不再复试。 英国药典规定无菌检查一次检出。 美国药典24版规定无菌检查一次检出。 ICH / PDG 的协调完成统一，保持一致。
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五、2015年版《中国药典》无菌检查法
(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 (二) 无菌检查方法适用性试验的要点 (三) 无菌检查操作指导
五、2015年版《中国药典》无菌检查法 (一) 、2015年版无菌检查法主要修订的内容
1、无菌检查法概念中增加了“生物制品” 2、实验环境规定的修订 3、培养基体系的修订 ４、方法验证（方法适用性试验）的修订 5、检查方法的整合修订
（二）中国药典无菌检查法的发展 1953年版 1963年版
直接接种 法 直接接种法 无阳性对照菌 三种培养基培养基 阳性对照－金葡
1977年版 培养基质量检查－金 葡、 白念。 阳性对照－金葡
培养基质量检查－藤黄、 生孢、白念。 2支（瓶） 或以上 直接接种法 4管+2管+1管 薄膜过滤法 膜剪4片，2+1+1 1990版－金葡10－6
2015版《中国药典》 无菌检查法
钱文静 江苏省食品药品监督检验研究院 中食药监管信息网专家顾问团特约讲师 主办单位：中食药监管信息网 www.chsfda.com 2 014年9月19日 （南京）
主要内容
一、药品无菌检查所面临的形势 二、无菌检查法的发展历史 三、无菌检查法的有关概念和新理念 四、2015年版《中国药典》无菌检查法的重大修订 五、2015年版《中国药典》无菌检查法 六、医院制剂进行微生物控制的必要性
环境保证 培养基保证 灵敏度检查 无菌性检查
SOP操作 过程控制
有效的方法
方法验证
有效的结果 结果判断 可靠的结论
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三、无菌检查法的有关概念和新理念
(三)、无菌检查新理念 2、实验者由严格按照标准检验,向依据统一的 原则，选择适宜的方法检验转变。 3、新方法与新技术掌握和应用 4、偏差调查与趋势分析
2010年版 2015年版《中国药典》
1、硫乙醇酸盐流体培养基－需 1、硫乙醇酸盐流体培养基－ 气菌、厌气氧培养。 2、改良马丁培养基－真菌、 需气菌培养。 主要用于厌氧菌培养，也可用 于需气菌培养。 2、胰酪大豆胨肉汤培养基－真 菌和需气菌的培养。
(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 3、培养基 ⑶ 培养基灵敏度检查－ ①菌种加入培养基的修订
实验环境； 培养基； 方法验证； 检验数量、 检验量； 检验方法； 培养时间； 结果判断； 一次检出。 加强应用指导。 减少方法的局限性,保证 检验结果的可靠性；
不 断 发 展
发 展 宗 旨
提高方法的检出率； 加强检验的全过程控制；
三、无菌检查法的有关概念和新理念
（一)、 无菌检查法的有关概念 （二）、无菌检查的特点和意义 (三)、无菌检查的新理念
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(一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容 3、培养基 ⑶灵敏度检查－ ②菌液制备用培养基的修订
2010年版 1、接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞 菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物 ——至营养肉汤培养基中或营养琼脂培 养基上； 2、接种生孢梭菌的新鲜培养物 ——至硫乙醇酸盐流体培养基中； 3、接种白色念珠菌的新鲜培养物 ——至改良马丁培养基中或改良马丁琼 脂培养基； 4、接种黑曲霉的新鲜培养物至 ——改良马丁琼脂斜面培养基上 ；
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四、2015年版《中国药典》无菌检查法的重大修订 3、一、二、三部药典附录的整合修订 （3）原三部药典特殊性原由 ①历史调查
生长的情况。 曾有过单位在生物制品无菌检查中发现
过个别品种在20～25℃培养的硫乙醇酸盐流体培养基中有菌
② 从微生物适宜培养条件
嗜热型需氧菌适宜生长温度为45～58℃， 嗜温型需氧菌适宜生长温度为20～44℃， 嗜冷型需氧菌适宜生长温度为10～18℃。
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三、无菌检查法的有关概念和新理念
（一)、 无菌检查法的有关概念
5、无菌技术 是指在微生物试验工作中，控制或防止 各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关措施， 其中包括无菌环境设施、无菌试验器材及无菌操作。 6、无菌检查法的局限性 若供试品符合无菌检查法的
规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。也 就是无菌试验并不能用于保证整批产品的无菌性，但是它可 用于确定批产品不符合无菌要求。
五、2015年版《中国药典》无菌检查法 (一) 2015年版无菌检查法主要修订的内容
1、无菌检查法概念中增加了“生物制品”
(一) 、2015年版无菌检查法主要修订的内容
2、实验环境规定的修订
2010年版 无菌检查： 应在洁净度10000级背景下 的局部100级单向流空气区域 内或隔离系统进行 2015年版 无菌检查： 应在洁净度B级背景下的局部A 级单向流空气区域内或隔离系 统中进行。