主要溶液配制

主要溶液配制

LB培养基：

每升含酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，NaCl 10g，用10mol/LNaOH调pH

至7.5，15磅高压灭菌20min，4℃保存备用。在每100ml LB液体培养基中加

入1.5g琼脂即为固体LB培养基，15磅高压灭菌20min，4℃保存备用。

抽提/碱裂缓冲液:

碱裂解液 Ⅰ

50mmol/L 葡萄糖、25mmol/L Tris-cl ( pH 8.0)、10 mmol/L EDTA ( pH 8.0)

碱裂解液Ⅱ

0.2 mol/L NaOH、1%(m/V) SDS

碱裂解液 Ⅲ

5 mol/L 乙酸钾（60.0ml）、冰乙酸（11.5 ml）、H2O(28.5 ml）

细胞培养液: DMEM

PBS：

用800ml蒸馏水溶解8 g NaCl，0.2 g KCl, 1.44 g Na2HPO4和0.24 g KH2PO4。

用HCl调节pH值至7.4，加水至1升。高压蒸汽灭菌后使用。

TBS：

用800 ml蒸馏水溶解8 g NaCl，0.2 g KCl, 3 g Tis 碱，用HCl调节pH值至7.4，加水至1升。高压蒸汽灭菌后使用。

TBST：

在TBS中加入0.05%（V/V）Tween-20。

封闭液：

5%（m/V）BSA溶于TBS中。

透析缓冲液配制：

将50g蔗糖，10ml（1M pH8.0）Tris-Cl 溶液，2ml（2M）MgCl2溶液溶解

于水中，并定容于1L。

Buffer B：

8 mol/L 尿素，0.1 mol/L Sodium phosphate buffer，10 mmol/L Tris-cl, pH8.0 Ni离子亲和层析纯化用试剂：

Binding Buffer (pH 8.0)

50 mmol/L Sodium phosphate buffer、0.3 mol/L NaCl、10 mmol/L imidazole ( pH 8.0)

Washing Buffer ( pH 8.0)

50 mmol/L Sodium phosphate buffer、0.3 mol/L NaCl、20 mmol/L imidazole ( pH 8.0)

Elution Buffer ( pH 8.0)

50 mmol/L Sodium phosphate buffer、0.3 mol/L NaCl、250 mmol/L imidazole ( pH 8.0)

Tris缓冲液配制：

将8g NaCl、2.42gTris-碱，溶解并定容于1L双蒸水中，并调pH至7.6 30 % 丙烯酰胺贮存液

称取29 g丙烯酰胺，1g N-N’甲叉双丙烯酰胺，加双蒸水溶解定容至100 ml,装入棕色瓶中4℃保存。

1.5 mol/L Tris·Cl (pH 8.8)

18.15 g Tris溶于50 ml双蒸水，用浓盐酸调pH至8.8，定容至100 ml，4℃

保存。

1 mol/L Tris·Cl (pH 6.8)

12.1 g Tris溶于50 ml双蒸水，用浓盐酸调pH至6.8，定容至100 ml，4℃

保存。

TEMED (N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)

TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺的聚合。

10 %(w/v) 过硫酸铵(APS)

10 %(w/v) 十二烷基硫酸钠(SDS)

称取100 g SDS溶于900 ml的双蒸水中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解，用双蒸水定容至1L。

1×SDS上样缓冲液 (10 ml)

1 M Tris·Cl (pH 6.8) 0.5 ml

甘油 1 ml

溴酚蓝 0.005 g

SDS 0.1 g

DTT 0.08 g

用水定容至10 ml，分装4℃保存。

1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液

称取Tris 3.0 g，甘氨酸14.4 g，加入10 ml 10 % （m/v）电泳级SDS，加双蒸水溶解定容至1L。

考马斯亮蓝染色液(100 mL)

g

考马斯亮蓝R-250

0.25

甲醇45 ml

双蒸水45 ml

ml 冰乙酸10

脱色液(1 L)

ml

甲醇 500

冰乙酸100 ml

双蒸水 400 ml