激素对血糖的调节

激素对血糖的调节

【实验目的】

学习对家兔采血和注射方法，了解血糖浓度测定方法，验证激素对血糖浓度的调节。

【实验原理】

胰岛素是降血糖的激素，胰高血糖素、肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长激、甲状腺素是体内生血糖的激素。

本实验将家兔作为实验对象，对其进行空腹采血后分别注射各激素，作用一段时间后再分别采血，同时观察注射激素前后的家兔血糖浓度的变化，以验证激素的调节作用。

萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶（POD）和色素原性氧受体存在下，将过氧化氢分解为水和氧，同时使色素原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，其色泽深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。其反应式如下：

葡萄糖 + O

2（GOD）—→葡萄糖酸 + H

2

O

2

【实验对象】

家兔（饥饿24小时）

【实验试剂】

胰岛素注射液（40单位/ml）、胰高血糖素注射液、肾上腺素注射液（1︰1000）、去甲肾上腺素注射液、肾上腺皮质激素注射液、生长激注射液、甲状腺素注射液、生理盐水、肝素抗凝剂（配成2500单位/ml）、凡士林、二甲苯、葡萄糖标准应用液（5.55mmol/L）、0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 、酶试剂、酚溶液、酶酚混合试剂、 12mmol/L苯甲酸溶液、100mmol/L葡萄糖标准贮存液。

【实验器材】

适量规格注射器、台式磅秤、兔手术台、刀片、干棉球、纱布、试管、试管架、沸水浴

【实验操作】

1.动物准备及空腹采血

取试管8支，编号1-8，分别加入肝素抗凝剂0.0l ml。取空腹16小时以上的正常家兔四只，分别编号a、b、c、d，称体重（一般是2-3kg）并记录。

用耳静脉采血法：先拔去兔耳缘静脉处的毛，再用二甲苯擦拭兔耳部静脉，使其充血，在其周围抹上凡士林(防止污染、润滑），用刀片轻轻挑破边缘耳静脉，放血入含抗凝剂的试管1～4，约需2-3ml，边滴边摇，以防凝固。取血完毕，用干棉球压迫血管止血

采血方法同上。

3.测定注射前后的血糖

取8支干燥试管，编号。将收集的8管血液用离心机离心10分钟(每分钟2500转)，取上层血浆，分别制成1-8共8管标本。用葡萄糖氧化酶法测血糖，混匀，置37℃水浴中，保温15min，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L 。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml，以免家兔发生胰岛素性休克而死亡。

血液葡萄糖mmol/L= 测定管吸光度／标准管吸光度×5.55

【试验流程图】

【预期实验结果】

胰岛素使血糖浓度降低，胰高血糖素、肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长激、甲状腺素使血糖浓度升高。（查谁占主导地位）【分析】

【参考文献】

人民卫生出版社《生物化学》第七版

人民卫生出版社《生理学》第七版