大肠菌群假阳性率验证操作流程

乳粉中大肠菌群测定能力验证的结果与分析

T logy科技分析与检测大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，包括大肠杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。

食品中检出大肠菌群，表明食品受到人和温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染。

大肠菌群在结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）培养基上呈现出直径为0.5 mm或者更大的紫红色菌落特征，并且菌落周围有红色的胆盐沉淀环。

该典型菌落在煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中37 ℃ 条件下培养能够产气[1]。

因此，实验室一般采用VRBA平板初筛，并通过BGLB肉汤验证方式检测食品中是否存大肠菌群。

能力验证是指利用实验室之间的比对，按照预先制定的准则来评价实验室的检测能力的活动。

通过参加能力验证活动，不仅可以对实验室进行质量控制、完善实验室的管理制度，而且可以评判实验室相关项目检测人员的检验技术水平是否维持在正常的水平，从而确保日常检验报告检测数据的准确性和可信性[2]。

2019年，本实验室参加了由国家食品药品监督管理总局组织，中国食品药品检定研究院提供样品的乳粉中大肠菌群的计数检验能力验证活动，通过分析和总结此次能力验证的实验结果，为日常的微生物检验工作提供技术支持。

1　材料与方法1.1　培养基及试剂结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）：批号1072991，厂家：广东环凯；煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤：批号1066081，厂家：广东环凯；氯化钠：批号20180504-2，厂家：广州广试。

大肠杆菌：菌株编号 ATCC25922，来源：广东环凯；弗氏柠檬酸杆菌：菌株编号ATCC43864，来源：广东环凯；所有培养基和试剂均在有效期内，并通过验收验证。

1.2　仪器散设备全自动蒸汽灭菌器（型号：GI54DS厂家：厦门致微）；电热恒温培养箱（型号：HKP-9172A，厂家：广东环凯）；生物安全柜（型号：BSC-1600IIA2，厂家：苏净安泰）；电热恒温干燥箱（型号：DHG-9123A，厂家：广东环凯）；电热恒温水浴锅（型号：DKZ-3B厂家：上海一恒）。

1-046大肠杆菌检查法标准操作程序

部门：题目：大肠杆菌检查法标准操作程序共 10 页第 1 页编号：S/SOP/QC1-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期：1 目的：规范大肠杆菌检查操作，保证检验结果准确。

2 范围：本程序适用于药品大肠杆菌的检查。

3 责任者：QC员、QC复核人员、QC主任。

4 程序：4.1试药与试液除特别注明外，试验中所用的试剂均为分析纯试剂，水为纯化水。

4.1.1 0.9%无菌氯化钠溶液取氯化钠[NaCl]9.0g，加水使溶解成1000ml，121℃灭菌20分钟。

4.1.2 无菌磷酸盐缓冲溶液(pH7.2)取磷酸氢二钠[Na2HPO4·12H2O]25.8g和磷酸二氢钠[NaH2PO4·H2O]4.4g，加水使溶解至1000ml，121℃灭菌20分钟。

4.1.3 α－萘酚乙醇试液取α－萘酚6.0g，加无水乙醇溶解使成100ml。

4.1.4 40％氢氧化钾试液取氢氧化钾40g，加水溶解使成100ml。

4.1.5 靛基质试液取对二甲氨基苯甲醛[C9H11NO]1g，加入95%乙醇[C2H5OH]95ml，充分振摇，使完全溶解后，取浓盐酸[HCl]20ml徐徐滴入，边加边振摇，以免骤热导致溶液色泽变深，置冰箱保存，备用。

4.1.6 甲基红试液取甲基红[C15H15N3O2]0.1g，加95%乙醇[C2H5OH]300ml与水适量，使溶解，再加水至500ml，即得。

4.1.7 V-P试液取α-萘酚[C10H7OH]6.0g，加无水乙醇[C2H5OH]使溶解成100ml。

另取氢氧化钾40.0g，加水使溶解成100ml。

分别将试药与各溶剂混合即得。

4.1.8 革兰染色液4.1.8.1 沙黄染液取沙黄0.25g，加95%的乙醇[C2H5OH]10ml，使完全溶解后，加水至100ml。

部门：题目：大肠杆菌检查法标准操作程序共 10 页第 2 页编号：S/SOP/QC1-046-0起草：部门审核：质量部审核：批准：实施日期：4.1.8.2 结晶紫染液取结晶紫[C25H30ClN3]1.0g，加95%的乙醇[C2H5OH]20ml，使溶解，加1%的草酸铵溶液80ml，混匀。

_食品中大肠菌群的测定

种一起按下列程序进行。

2 、分离培养
将产气的发酵管分别在伊红美兰琼脂（EMB琼脂）平板上划线分离。然后置 36±1℃温箱内，培养18～24小时后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色和证实试验。
可疑菌落特点：具有金属光泽的深紫黑色菌落；不带或略带金属光泽的菌落；
中心色较深的淡紫黑色菌落。
CFU/g（mL）。
国标4789.3的08版与03版主要不同
1、名称更改

以大肠菌群计数代替原来的大肠菌群测定。
2、增加了大肠菌群的平板计数法和纸片检测法。
3、大肠菌群的MPN法以乳糖为主改为以月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤为主的要培养基的MPN 法。 4、大肠菌群的MPN法中原“报告每100 ml （或g）大肠菌群的MPN值”改为“报告每1 ml （或1g）大肠菌群的MPN值”。
记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。
3、复发酵试验
用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐 ( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，
观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。
（4）用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸
头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1
支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制
成1:100 的样品匀液。
（5）根据对样品污染状况的估计，按上述操作，
经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以
（3）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，

大肠菌群测试片检测操作流程

大肠菌群测试片操作流程1.样品的前处理(建议使用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为样品)（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。

（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mL LB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。

用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。

2.样本稀释倍数用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。

（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。

3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。

将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液垂直加入到测试片中央，用手轻轻将上层盖下，使检测样品液覆盖整个检测圈（应尽量避免产生气泡），静置1min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。

食品微生物大肠菌群检测方法

食品微生物大肠菌群检测方法食品微生物大肠菌群检测是食品安全监管中的重要环节，大肠菌群是一类常见的致病微生物，其存在可能会对食品质量和消费者健康造成严重威胁。

因此，建立一套有效的检测方法对于保障食品安全至关重要。

本文将介绍几种常用的食品微生物大肠菌群检测方法，希望能为相关从业人员提供一些参考。

首先，传统的培养法是一种常见的大肠菌群检测方法。

该方法通过将食品样品在适宜的培养基上培养，利用大肠菌群特有的形态、生理生化特性进行鉴定和计数。

尽管该方法操作简单，成本较低，但是需要较长的培养周期，且存在假阳性结果的可能性。

因此，在实际应用中需要结合其他方法进行验证。

其次，分子生物学方法在食品微生物大肠菌群检测中也得到了广泛应用。

PCR技术是其中的代表，通过特异性引物扩增靶标基因，再通过凝胶电泳或实时荧光定量PCR技术进行检测和定量。

这种方法具有高度的特异性和灵敏度，能够快速准确地检测出样品中的大肠菌群，但是需要较为复杂的实验操作和昂贵的设备。

另外，近年来，免疫学方法也逐渐在食品微生物大肠菌群检测中得到了应用。

免疫学方法利用抗原与抗体的特异性结合进行检测，具有高度的特异性和灵敏度，且操作简便，适用于大批量样品的检测。

然而，该方法的缺点是需要制备特异性抗体，成本较高，且可能受到样品复杂性的影响。

最后，近年来，基于生物传感技术的大肠菌群检测方法也逐渐受到关注。

生物传感技术利用生物识别元件与传感器相结合，能够实现对微生物的高灵敏、高特异检测。

这种方法具有快速、准确、实时监测的特点，但是需要特定的生物传感器和信号检测设备，成本较高。

综上所述，食品微生物大肠菌群检测方法多种多样，各有优缺点，具体选择应根据实际需求和条件进行综合考虑。

在今后的食品安全监管中，希望能够不断完善和发展新的检测技术，以更好地保障食品安全，保障消费者的健康。

大肠菌群检测步骤

大肠菌群检测步骤嘿，朋友们！今天咱就来唠唠大肠菌群检测的那些事儿。

你想想看，大肠菌群就像是一群调皮的小精灵，在我们要检测的世界里跑来跑去。

那怎么把它们给抓住呢？首先啊，得准备好各种各样的家伙什儿。

就像战士上战场得有称手的兵器一样。

什么培养皿啦、培养基啦、吸管啦等等，一个都不能少。

然后呢，就是采样啦。

这就好比去抓小偷，得先找到他们可能出没的地方。

从各种食品、水样等里面采集样本，这可得细心点儿，别放过任何一个“小坏蛋”可能藏身的角落。

采完样，就该让这些小精灵在合适的环境里成长啦。

把样本放到培养基里，给它们创造一个舒适的“家”，让它们快快繁殖。

这时候就好像看着一群小孩子慢慢长大一样。

过一段时间，就去看看这些小精灵有没有现身。

如果培养基上出现了一些特征性的菌落，哈哈，那就说明有大肠菌群在里面呢！这就像是在茫茫人海中找到了我们要找的那个目标。

接下来，还得进一步确认这些是不是真的大肠菌群。

可不能冤枉了好菌，也不能放过坏菌呀！这就需要一些专门的检测方法啦，就像警察审讯犯人一样，得有证据才能定罪。

检测的过程中，可不能粗心大意呀！要是一不小心弄错了一步，那可就前功尽弃啦！这就跟走路一样，一步走错，可能就走到岔路上去了。

你说这大肠菌群检测是不是很有意思？就像是一场和小精灵们的捉迷藏游戏。

我们得有耐心，有技巧，才能把它们一个个都找出来。

大家想想，如果我们不认真检测大肠菌群，那这些小调皮们可能就会在我们的食品里捣乱，让我们吃了生病。

那多可怕呀！所以说，大肠菌群检测可真是太重要啦！我们每个人都得重视起来，就像保护自己的家人一样保护我们的饮食安全。

让我们一起把大肠菌群检测这件事做好，让这些小精灵们无处可逃，为我们的健康保驾护航！怎么样，是不是觉得自己也可以成为一名厉害的大肠菌群检测大师啦？。

大肠菌群及大肠杆菌检测方法

大肠菌群及大肠杆菌检测方法简介大肠菌群是指人和动物肠道中存在的一群细菌的总称，其中大肠杆菌是大肠菌群中的一种重要成员。

大肠杆菌是一种革兰阴性杆菌，属于肠道的常见菌群，对人体有益，并且在环境和食品中也常见。

然而，大肠杆菌也有一些致病的菌株，如致泻性大肠杆菌，会导致食物中毒和胃肠道感染。

大肠菌群检测方法大肠菌群的检测方法主要分为培养法和分子生物学方法两大类。

培养法：传统的大肠菌群检测方法是基于培养菌株的数量来进行评估。

这种方法通过将样品培养在选择性培养基上，利用大肠杆菌产生的特殊代谢产物来进行鉴定。

这一方法简单易行，成本较低，但存在一些局限性，如培养时间长，只能检测活菌，对于非培养性细菌较为困难。

分子生物学方法：分子生物学方法包括PCR和实时荧光定量PCR等技术，不依赖细菌的生长特性，能够快速准确地检测大肠菌群。

PCR是通过扩增大肠菌群的16SrRNA基因，然后通过电泳等方法进行检测和定量。

实时荧光定量PCR是一种更快速、灵敏和准确的检测方法，利用荧光探针技术可以实时监测扩增反应的过程，并定量测定大肠菌群的数量。

这种方法具有高度特异性和灵敏性，可以检测非活菌和少量菌。

大肠杆菌的检测方法主要分为传统培养法和分子生物学方法两种。

传统培养法：大肠杆菌的传统培养方法是将样品在选择性培养基上进行培养，利用大肠杆菌产生的代谢产物进行鉴定，并通过菌落数进行定量。

这种方法操作简单，成本较低，但存在一些问题，如需要较长时间培养（通常需要24-48小时），偶尔出现培养落阳性假阳性结果。

此外，该方法只能检测到特定培养条件下的大肠杆菌，并不能检测到非培养性或者少量存在的大肠杆菌。

分子生物学方法：分子生物学方法是通过扩增大肠杆菌特异基因或基因片段来进行检测。

常见的方法有PCR和实时荧光定量PCR。

PCR方法通过扩增大肠杆菌特异基因（如uidA基因）来进行检测，并通过电泳等方法进行鉴定。

实时荧光定量PCR是一种更快速灵敏准确的方法，可以实时监测扩增反应的过程，并定量测定大肠杆菌的数量。

食品中大肠菌群的测定

On the evening of July 24, 2021
3、大肠杆菌的生物学特性
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基本形态
此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.50.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。
On the evening of July 24, 2021
2、初发酵试验
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Ø 每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。
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2、平板计数
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Ø （4）、证实试验
从VRBA 平板上挑取10 个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于BGLB 肉汤管内， 36℃±1℃ 培养24h-48h ，观察产气情况。凡 BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
ü（1）固体和半固体样品
u 称取25g 样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min-10000r/min 均质1 min-2 min ，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。

大肠菌检验方法(发酵法)验证方案

食（饮）具大肠菌群检验方法—发酵法验证方案1．验证目的和原理1.1 验证目的为确认本实验室所采用的方法适合于食（饮）具大肠菌群检验，特制定本方案验证GB 14934-94食（饮）具消毒卫生标准食（饮）具大肠菌群检验方法，发酵法能否准确检验出食（饮）具中的大肠菌群。

1.2 原理：通过试验来评价整个检验方法的准确性、有效性。

2．验证方法步骤2.1验证前的准备：进行食具大肠菌群发酵法验证前，所有的仪器和试剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。

2.2验证试验的操作计划：做空白对照，以及阳性对照。

3．试验实施3.1试验前的准备3.1.1主要仪器设备：除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。

，冰箱：2 ℃～5 ℃，天平：感量 0.1 g，振荡器，无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头，无菌锥形瓶：容量 500 mL。

，无菌培养皿：直径 90 mm， pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸，无菌滤纸。

3.1.2操作环境：环境洁净度不应低于10000级无菌室。

3.1.3试验样品：两套经消毒灭菌后的餐具，包含碗，盘，口杯，匙，筷子。

3.1.4试剂： 0.9%无菌生理盐水3.1.5验证用微生物名称及其编号实验菌株的来源：中国工业微生物菌种保藏管理中心3.1.7培养基名称生产商培养基批号配制日期有效期LST 上海市疾控2014.8.14煌绿乳糖肉汤上海市疾控2014.8.153.2验证试验操作3.2.1样品制备将大肠埃希菌菌苔用9mL生理盐水稀释至10-3，用无菌棉签蘸取稀释后的菌液，涂抹在餐具表面待用。

3.2.2验证方法按照编制的作业指导书进行采样，检验。

检验程序见图1图13.3试验结果测试日期：复核日期：4．验证结果评价分析（1）验证试验是否有遗漏？（2）验证实施过程中对验证方案有无修改？修改原因、依据以及是否经过批准？（3）验证记录是否完整？（4）验证试验结果是否符合标准要求？起草人：起草日期：年月日验证实施日期：年月日测试人：复核人：测试日复核日期：枯藤老树昏鸦，小桥流水人家，古道西风瘦马。

肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片

大肠菌群测试片准确度验证操作流程____3M大肠菌群测试片1.样品的前处理：（建议用蔬菜瓜果、河水及大肠菌群标准菌作为检测样品）（1）蔬菜瓜果：称取25g样品切成1cm左右的碎片，置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min~10000r/min均质1min~2min制成1:10的样品匀液。

（2）河水：以无菌吸管吸取25mL河水置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。

（3）大肠菌群标准菌：挑取平板上大肠菌群标准菌的单菌落，于盛有5mLLB 液体培养基的试管中，37℃培养过夜，以此作为菌原液。

用1mL无菌吸管或微量移液器吸1mL菌原液于盛有9mL的稀释液的无菌试管中，制成1:10的样品匀液。

2.样本稀释倍数：用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL的稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸管尖端不要触及稀释液面），振荡试管或换用一只无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。

按此操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释液必要时用1mol/L氢氧化钠（NaOH）或1mol/L盐酸（HCl）调节pH至7.0~7.2。

（1）蔬菜样品的稀释倍数：取100、10-1两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（2）河水样品的稀释倍数：取10-1、10-2两个稀释度进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（3）大肠菌群标准菌原液的稀释倍数：取10-7、10-8两个进行接种验证(可根据实际情况记性调整)。

（4）自来水的稀释倍数：直接取自来水接种进行验证。

3.接种一般食品选1～2个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。

将大肠菌群测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品垂直滴加到纸片中央，轻轻晃荡纸片，使检测样品液覆盖整个检测圈，然后再将上层膜缓慢盖下（应尽量避免产生气泡），静置1 min使培养基凝固，最后用手轻轻将上层盖下。

大肠菌群测定的操作细则

大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。

该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。

食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。

1 设备和材料1.1 温箱：36±1℃。

1.2 冰箱:0～4℃。

1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。

1.4 天平。

1.5 显微镜。

1.6 均质器或乳钵。

1.7 平皿:直径为90mm。

1.8 试管。

1.9 吸管。

1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。

1.11 玻璃珠:直径约5mm。

1.12 载玻片。

1.13 酒精灯。

1.14 试管架。

2 培养基和试剂2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。

2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。

2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。

2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。

2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。

2.6 生理盐水。

2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。

3 操作步骤3.1 检样稀释3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。

固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。

3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。

3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL 灭菌吸管。

3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。

实验大肠菌群的检验

预测模型构建
比较不同样品之间大肠菌群数量的差异，如独立样本t检验、配对t检验等。
分析大肠菌群数量与其他因素（如环境因素、水质指标等）之间的相关性。
利用已知数据建立预测模型，预测未知样品的大肠菌群数量。
05
实验结论和讨论
大肠菌群数量与污染程度正相关
温度对大肠菌群生长有较大影响
时间的延长有助于提高检出率
大肠菌群广泛分布于粪便、水源、食品等环境中，因此成为水质和环境监测的重要指标。
本实验主要采用多管发酵法和滤膜法进行大肠菌群检测。
大肠菌群是指一群革兰氏阴性杆菌，主要包括肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙门菌等。
将待测水样接种到含有选择性培养基的发酵管中，培养后观察是否产气，以判定是否存在大肠菌群。通过比较不同稀释度的水样，可以得到水样中大肠菌群的近似数量。
根据检验结果，对大肠菌群的数量和分布进行分析，以便于评估食品的质量和安全性。
根据相关标准和规定，对检验结果进行判定，判断食品是否符合卫生标准和要求。
03
结果判定
02
01
04
实验数据分析和处理
原始数据的记录
在实验过程中，需要实时记录每个样品中大肠菌群的数量、颜色、大小等特征。
重复实验数据的记录
为了保证实验结果的可靠性，需要对每个样品进行多次实验，每次实验的数据都需要详细记录。
结果讨论
样品采集和处理方式的不同对大肠菌群检验结果产生一定影响。例如，采集的样品不均一、样品处理不当等可能会导致结果的不准确。
影响因素分析
实验条件如温度、湿度、pH值等的变化也会对大肠菌群的生长和检出率产生影响。因此，实验过程中需要严格控制这些条件，以保证结果的准确性。
不同的检测方法在检出率和准确性方面存在差异，因此选择适合的检测方法对大肠菌群检验结果也有影响。

水体中大肠菌群的检测步骤

水体中大肠菌群的检测步骤试验原理所谓大肠菌群，是指在37℃培育24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革蓝氏阴性无芽孢杆菌的总称。

主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。

水的大肠菌群数是指100 mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。

在正常状况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽孢杆菌等多种细菌。

这些细菌都可以随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。

目前，国际上已公认大肠菌群是粪便污染的指标。

因而对饮用水必需进行大肠菌群的检查。

水中大肠菌群的检测方法，常用多管发酵法和滤膜法。

多管发酵法可适用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要的时间较长。

滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简洁、快速，但不适用于杂质较多、易于堵塞滤孔的水样。

材料与器皿()培育基1、一般乳糖蛋白胨培育液蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化钠 5g，1.6%溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸馏水 1000mL，pH 7.2~7.4。

将蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混匀，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管10mL，115℃灭菌20min。

2、三倍浓缩乳糖蛋白胨培育液按上述一般乳糖蛋白胨培育液浓缩三倍配制，分装于有杜汉氏小管的试管中，每管5mL。

3、品红亚硫酸钠培育基(供平板分别用)蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，琼脂 15-20g，蒸馏水1000mL，无水亚硫酸钠 5g，5%的碱性品红乙醇溶液 20mL，pH7.2~7.4。

4、伊红美蓝培育基(EMB培育基)(供发酵法平板分别用，3和4可任选一种)蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，2%伊红(曙红)水溶液 20mL，5%美蓝(亚甲蓝)水溶液13mL，pH7.2~7.4。

大肠菌群检验程序

大肠菌群检验程序
大肠菌群检验程序如下：
1. 取25克样品与225毫升稀释液混合均质。

2. 进行10倍系列稀释。

3. 选择3个适宜的连续稀释度样品匀液，接种月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤发酵管，36摄氏度培养48小时。

4. 取产气的LST肉汤发酵管，接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤发酵管，36摄氏度培养48小时。

5. 根据发酵管的产气情况，判定大肠菌群阴阳性。

6. 查阅MPN表并报告结果。

大肠菌群检验可分为样品的稀释和初发酵试验、复发酵试验两个步骤。

在进行检验时，需要严格按照相关规定和标准进行操作，确保实验结果的准确性和可靠性。

大肠菌群测定操作步骤

大肠菌群测定操作步骤咱今天就来说说这大肠菌群测定的操作步骤哈！这可真是个有意思的事儿呢。

首先呢，你得准备好各种各样的玩意儿，就像战士上战场得带好武器一样。

什么培养基啦、无菌吸管啦、培养皿啦，都得准备得妥妥当当的。

然后呢，就是取样啦！这就好比去果园里摘果子，你得挑那些看着就不错的来。

样品可得有代表性，不能随便瞎搞。

接下来，把取好的样放到合适的容器里，加上一些试剂，就像是给它来个特别的“洗礼”。

这一步可不能马虎，得认真对待。

之后呢，就把处理好的样品接种到培养基上。

这就像是给种子找个合适的土壤，让它能好好地生长发芽。

接种的时候可得小心点，别弄得到处都是。

再然后，把培养皿放到合适的温度下培养。

这就像是给小宝贝们找了个温暖的小窝，让它们能舒舒服服地长大。

在培养的过程中，你可得时刻关注着，就像妈妈关注着孩子的成长一样。

看看有没有什么变化，有没有那些让人惊喜的小现象出现。

过了一段时间后，你就能看到培养基上的情况啦！如果有大肠菌群，那它们就会显现出来，就像是舞台上的主角一样闪亮登场。

哎呀，你说这是不是很神奇呀！就通过这么一系列的操作，就能把那些看不见摸不着的大肠菌群给找出来。

这就好像是一场侦探游戏，我们就是那个聪明的侦探，通过各种线索和方法，找出隐藏在其中的“凶手”。

而且这可不是随便玩玩的，这关系到食品安全呢！要是没做好，那可不得了。

所以啊，每一步都得认真仔细，不能有一点差错。

就像建房子一样，一砖一瓦都得放好，不然房子可就不结实啦！咱做这个大肠菌群测定，不就是为了让大家吃得放心、喝得安心嘛！这是多么重要的事情呀。

大家可别小瞧了这些操作步骤，每一个细节都可能影响到最后的结果呢。

总之呢，大肠菌群测定的操作步骤虽然看起来有点麻烦，但只要我们用心去做，肯定能做好的。

就像那句话说的：“世上无难事，只怕有心人。

”咱可都是有心人，肯定能把这事儿干得漂漂亮亮的！你们说是不是呀！。

大肠检验步骤很详细

大肠菌群检验步骤进入无菌室步骤1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。

5—1小时。

2．关灯后0•5小时后放可进入。

3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套实验步骤1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。

（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。

3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。

琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。

盐水空白，吸1ml 生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。

）10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。

（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。

所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。

14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。

（方法见标准）15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。

大肠菌群测试片检测效果验证

大肠菌群测试片检测效果验证一、试验目的1. 测定大肠菌群测试片的准确度；2. 测定大肠菌群测试片的批间差异；3. 测定大肠菌群测试片的假阳性率。

二、试验材料1. 材料蔬菜、鸡肉、大肠埃希氏菌ATCC 259222. 培养基及试剂VRBA 培养基、BHI 肉汤、8.5%生理盐水、1M HCL 和NaOH 等。

3. 耗材3M 大肠菌群测试片、大肠菌群测试片、平板、移液管等。

三、试验流程1、将各样本按照如下稀释度进行梯度稀释：①蔬菜测定：以8.5%生理盐水将蔬菜样本稀释至10-1和10-2。

三种测定方法计数（国标、3M、）。

②大肠埃希氏杆菌（提前培养24h）：以8.5%生理盐水将菌体稀释至10-7和10-8。

三种测定方法计数（国标、3M、）。

③鸡肉样本的测定：以8.5%生理盐水将蔬菜样本稀释至10-2和10-3。

三种测定方法计数（国标、3M、）。

2、样本不同浓度添加的自验证④以②中稀释浓度10-5做阳性菌液标准品，添加0.5ml菌液标准品于4.5ml的10-1的蔬菜样本稀释液中。

再将所得样本添加稀释至10-1、10-2和10-3（相当于菌液稀释浓度为10-7、10-8和10-9），三种测定方法计数（国标、3M、）。

⑤大肠埃希氏杆菌（提前培养24h）：以8.5%生理盐水将菌体稀释至10-7和10-8。

三种测定方法计数（国标、3M、）。

以稀释浓度10-5做阳性菌液标准品，添加0.25ml于4.75ml生理盐水中，在继续稀释至浓度为0.5×10-7和0.5×10-8。

三种测定方法计数（国标、3M、）。

3、调节样液pH 至7.0~7.2，取1ml 样液接种到VRBA 培养基和测试片，按照如下温度和培养时间培养：①国标法：36℃，18~24h；②3M 测试片：36℃，18~24h；③测试片：36℃，18~24h。

4、结果判读按照测试片说明书和国标方法进行计数，记录计数结果。

四、试验结果1、大肠菌群测试片准确度的测定五、验证效果评价1、大肠菌群测试片检测标准菌，准确度均>80%，产品计数验证合格。