人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂盒
一氧化氮(Nitric oxide ,NO)含量测定试剂盒说明书
货号：QS1804 规格：50管/24样一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。
它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2—，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
为了排除样品色素等的影响，每个样品需做对照管。
自备实验用品及仪器：天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体12mL×1瓶，4℃避光保存。
样品处理：1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。
3.体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
NO含量计算：标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 99861、组织样品：NO含量定义：25℃时，每克样品或每毫克蛋白15min生成1μmoL NO2—，相当于1μmoL NO。
Elabscience 一氧化氮（NO）比色法测试盒说明书
（本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！）Elabscience®一氧化氮（NO）比色法测试盒Nitric Oxide (NO) Colorimetric Assay Kit产品货号：E-BC-K035-S产品规格：50 assays(48 samples)/100 assays(96 samples)检测仪器：紫外-可见光分光光度计（550 nm）使用前请仔细阅读说明书。
如果有任何问题，请通过以下方式联系我们：销售部电话************，************技术部电话131****6790具体保质期请见试剂盒外包装标签。
请在保质期内使用试剂盒。
联系时请提供产品批号(见试剂盒标签)，以便我们更高效地为您服务。
用途本试剂盒适用于检测血清、血浆、及动植物组织样本中的NO含量。
检测原理NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-，与显色剂生成淡红色偶氮化合物（如下图），生成偶氮化合物的浓度与NO的浓度具有线性关系，通过比色可以间接计算NO的浓度。
试剂一和试剂二的作用，为除去样本有色物质的干扰。
本试剂盒检测组织样本时，需测定总蛋白浓度，推荐使用本公司BCA试剂盒(货号E-BC-K318-M)进行测定。
提供试剂和物品说明：试剂严格按上表中的保存条件保存，不同测试盒中的试剂不能混用。
对于体积较少的试剂，使用前请先离心，以免量取不到足够量的试剂。
所需自备物品仪器：紫外-可见光分光光度计（550nm）、涡旋混匀仪、磁力搅拌器、分析天平、微量移液器（1000 μL，200 μL，100 μL，10 μL）、离心机、烧杯（50 mL，25 mL）。
耗材：枪头（1000 μL，200 μL，10 μL）、EP管（5 mL，2 mL）、吸水纸、擦镜纸、磁力搅拌子。
试剂：双蒸水、生理盐水（0.9% NaCl）或PBS（0.01 M，pH 7.4）。
试剂准备①试剂盒中的试剂平衡至室温。
②试剂四工作液：将试剂四加入37.5 mL双蒸水溶解，混匀即可，2-8℃避光保存2个月。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
碧云天生物技术一氧化氮检测试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号一氧化氮检测试剂盒产品编号 产品名称包装 S0021S 一氧化氮检测试剂盒 500次 S0021M一氧化氮检测试剂盒2500次产品简介：碧云天生产的一氧化氮检测试剂盒采用了经典的Griess Reagent ，并对其测定的溶液体系进行了优化，使检测下限达到1µM ，在1-100µM 范围内有非常完美的线性关系。
检测速度极快，完成一条标准曲线或5-10个样品的测定只需3分钟。
样品范围广，可以检测细胞或组织及其培养液中的一氧化氮的含量，酚红和10%血清均对测定无明显干扰，也可以检测血清、血浆和尿液中一氧化氮的含量。
包装清单：产品编号 产品名称 包装 S0021S-1 1M NaNO 2 1ml S0021S-2 Griess Reagent I 25ml S0021S-3 Griess Reagent II25ml —说明书1份产品编号 产品名称 包装 S0021M-1 1M NaNO 2 1ml S0021M-2 Griess Reagent I 125ml S0021M-3Griess Reagent II125ml —说明书1份保存条件：-20ºC 避光保存，一年有效。
4ºC 避光保存，半年有效。
注意事项：本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
如保存不当导致溶液变色或沉淀，则说明该溶液已经失效，请购买新的试剂盒。
不建议使用RIPA 裂解液对细胞或者组织进行裂解，使用RIPA 裂解液可能在后续反应中产生沉淀，影响测试。
推荐使用碧云天的细胞与组织裂解液(一氧化氮检测用)(S3090)或Western 及IP 细胞裂解液(P0013)。
人一氧化氮NOELISA试剂盒使用方法
人一氧化氮(NO)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：48T6μmol/L -200μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮(NO)水平。
用纯化的人一氧化氮(NO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮(NO)，再与HRP 标记的一氧化氮(NO)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的一氧化氮(NO)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人一氧化氮(NO)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
碧云天生物技术 Human IL-1β ELISA Kit 说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-168-3301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号Human IL-1β ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PI305Human IL-1β ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Human IL-1β ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白细胞介素1β酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测人血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的IL-1β的ELISA 试剂盒。
本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。
多次重复检测结果表明，最小检出量为2.2pg/ml ，与人IL-1r α、IL-1sRII 、IL-1sRI 、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。
IL-1即白细胞介素-1(简称白介1)，其家族由IL-1α(也称IL-1F1)、IL-1β(也称IL-1F2)、IL-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist, 简称IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10组成。
IL-1主要由巨噬细胞产生，此外几乎所有的有核细胞，如B 细胞、NK 细胞、体外培养的T 细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞均可产生IL-1。
正常情况下只有皮肤、汗液及尿液中含有一定量的IL-1，绝大多数细胞在受到外来抗原或细菌内毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。
IL-1β在免疫和炎症反应、骨重建(bone remodeling)、发烧、碳水化合物代谢等生理、病理过程中都有重要作用。
一氧化氮检测试剂盒(化学法)
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
Human kynurenine (KYN) ELISA Kit说明书
Human kynurenine(KYN)ELISA KitCatalog Number.CSB-E13659hFor the quantitative determination of endogenic human kynurenine(KYN) concentrations in serum,urine,tissue homogenates.This package insert must be read in its entirety before using this product.If You Have ProblemsTechnical Service Contact informationPhone:86-27-87582341Fax:86-27-87196150Email:****************Web:In order to obtain higher efficiency service,please ready to supply the lot number of the kit to us(found on the outside of the box).PRINCIPLE OF THE ASSAYThis assay employs the competitive inhibition enzyme immunoassay technique. The microtiter plate provided in this kit has been pre-coated with an antigen. Standards or samples are added to the appropriate microtiter plate wells with antibody specific for KYN and Horseradish Peroxidase(HRP)conjugated goat-anti-rabbit antibody.The competitive inhibition reaction is launched between with pre-coated KYN and KYN in samples.A substrate solution is added to the wells and the color develops in opposite to the amount of KYN in the sample.The color development is stopped and the intensity of the color is measured.DETECTION RANGE7.8pmol/ml-500pmol/ml.SENSITIVITYThe minimum detectable dose of human KYN is typically less than3.9pmol/ml. The sensitivity of this assay,or Lower Limit of Detection(LLD)was defined as the lowest human KYN concentration that could be differentiated from zero.SPECIFICITYThis assay has high sensitivity and excellent specificity for detection of human KYN.No significant cross-reactivity or interference between human KYN and analogues was observed.Note:Limited by current skills and knowledge,it is impossible for us to complete the cross-reactivity detection between human KYN and all the analogues, therefore,cross reaction may still exist.PRECISIONIntra-assay Precision(Precision within an assay):CV%<8%Three samples of known concentration were tested twenty times on one plate to assess.Inter-assay Precision(Precision between assays):CV%<10%Three samples of known concentration were tested in twenty assays to assess.LIMITATIONS OF THE PROCEDURE●FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTICPROCEDURES.●The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.●Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.●If samples generate values higher than the highest standard,dilute thesamples with Sample Diluent and repeat the assay.●Any variation in Sample Diluent,operator,pipetting technique,washingtechnique,incubation time or temperature,and kit age can cause variation in binding.●This assay is designed to eliminate interference by soluble receptors,binding proteins,and other factors present in biological samples.Until all factors have been tested in the Immunoassay,the possibility of interference cannot be excluded.MATERIALS PROVIDEDReagents QuantityAssay plate1(96wells) Standard(Freeze dried)2Antibody(100x concentrate)1x60μl Antibody Diluent1x10mlHRP-conjugate(100x concentrate)1x120μlHRP-conjugate Diluent1x20ml Sample Diluent2x20mlWash Buffer(25x concentrate)1x20mlTMB Substrate1x10mlStop Solution1x10ml Adhesive Strip(For96wells)4Instruction manual1STORAGEUnopened kit Store at2-8°C.Do not use the kit beyond the expiration date.Opened kitCoated assayplateMay be stored for up to1month at2-8°C.Try to keep it in a sealed aluminum foil bag,and avoid the damp.Standard May be stored for up to1month at2-8°C.Ifdon’t make recent use,better keep it store at-20°C.AntibodyHRP-conjugateAntibodyDiluentMay be stored for up to1month at2-8°C. HRP-conjugateDiluentSample DiluentWash BufferTMB SubstrateStop Solution*Provided this is within the expiration date of the kit.OTHER SUPPLIES REQUIRED●Microplate reader capable of measuring absorbance at450nm,with thecorrection wavelength set at540nm or570nm.●An incubator which can provide stable incubation conditions up to37°C±0.5°C.●Squirt bottle,manifold dispenser,or automated microplate washer.●Absorbent paper for blotting the microtiter plate.●100ml and500ml graduated cylinders.●Deionized or distilled water.●Pipettes and pipette tips.●Test tubes for dilution.PRECAUTIONSThe Stop Solution provided with this kit is an acid solution.Wear eye,hand,face, and clothing protection when using this material.SAMPLE COLLECTION AND STORAGE●Serum Use a serum separator tube(SST)and allow samples to clot fortwo hours at room temperature or overnight at4°C before centrifugation for15minutes at1000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20°C or-80°C.Avoid repeated freeze-thaw cycles.●Urine Use a sterile container to collect urine samples.Remove anyparticulates by centrifugation for15minutes at1000xg,2-8°C and assay immediately or aliquot and store samples at-20°C or-80°C.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Centrifuge again before assaying to remove any additional precipitates that may appear after storage.●Tissue Homogenates100mg tissue was rinsed with1X PBS,homogenized in1ml of1X PBS and stored overnight at-20°C.After two freeze-thaw cycles were performed to break the cell membranes,the homogenates were centrifuged for5minutes at5000x g,2-8°C.The supernate was removed and assayed immediately.Alternatively,aliquot and store samples at-20°C or-80°C.Centrifuge the sample again after thawing before the assay.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:1.CUSABIO is only responsible for the kit itself,but not for the samplesconsumed during the assay.The user should calculate the possible amount of the samples used in the whole test.Please reserve sufficient samples in advance.2.Samples to be used within5days may be stored at2-8°C,otherwisesamples must be stored at-20°C(≤1month)or-80°C(≤2month)to avoid loss of bioactivity and contamination.3.Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.4.If the samples are not indicated in the manual,a preliminary experiment todetermine the validity of the kit is necessary.5.Please predict the concentration before assaying.If values for these arenot within the range of the standard curve,users must determine the optimal sample dilutions for their particular experiments.6.Tissue or cell extraction samples prepared by chemical lysis buffer maycause unexpected ELISA results due to the impacts of certain chemicals.7.Owing to the possibility of mismatching between antigen from otherresource and antibody used in our kits(e.g.,antibody targets conformational epitope rather than linear epitope),some native or recombinant proteins from other manufacturers may not be recognized by our products.8.Influenced by the factors including cell viability,cell number and alsosampling time,samples from cell culture supernatant may not be detected by the kit.9.Fresh samples without long time storage are recommended for the test.Otherwise,protein degradation and denaturalization may occur in those samples and finally lead to wrong results.REAGENT PREPARATIONNote:●Kindly use graduated containers to prepare the reagent.Please don'tprepare the reagent directly in the Diluent vials provided in the kit.●Bring all reagents to room temperature(18-25°C)before use for30min.●Prepare fresh standard for each e within4hours and discardafter use.●Making serial dilution in the wells directly is not permitted.●Please carefully reconstitute Standards according to the instruction,andavoid foaming and mix gently until the crystals have completely dissolved.To minimize imprecision caused by pipetting,use small volumes and ensure that pipettors are calibrated.It is recommended to suck more than 10μl for once pipetting.●Distilled water is recommended to be used to make the preparation forreagents.Contaminated water or container for reagent preparation will influence the detection result.1.Antibody(1x)-Centrifuge the vial before opening.Antibody requires a100-fold dilution.A suggested100-fold dilution is10μl of Antibody+990μl of Antibody Diluent.2.HRP-conjugate(1x)-Centrifuge the vial before opening.HRP-conjugate requires a100-fold dilution.A suggested100-fold dilution is10μl of HRP-conjugate+990μl of HRP-conjugate Diluent.3.Wash Buffer(1x)-If crystals have formed in the concentrate,warm up toroom temperature and mix gently until the crystals have completely dissolved.Dilute20ml of Wash Buffer Concentrate(25x)into deionized or distilled water to prepare500ml of Wash Buffer(1x).4.StandardCentrifuge the standard vial at6000-10000rpm for30s before opening.Reconstitute the Standard with 1.0ml of Sample Diluent.Do not substitute other diluents.This reconstitution produces a stock solution of 500pmol/ml.Mix the standard to ensure complete reconstitution and allow the standard to sit for a minimum of15minutes with gentle agitation prior to making dilutions.Pipette150μl of Sample Diluent into each tube(S0-S6).Use the stock solution to produce a2-fold dilution series(below).Mix each tube thoroughly before the next transfer.The undiluted Standard serves as the high standard(500pmol/ml).Sample Diluent serves as the zero standard (0pmol/ml).Tube S7S6S5S4S3S2S1S0pmol/ml50025012562.531.215.67.80ASSAY PROCEDUREBring all reagents and samples to room temperature before use.Centrifuge the sample again after thawing before the assay.It is recommended that all samples and standards be assayed in duplicate.1.Prepare all reagents,working standards,and samples as directed in theprevious sections.2.Refer to the Assay Layout Sheet to determine the number of wells to beused and put any remaining wells and the desiccant back into the pouch and seal the ziploc,store unused wells at4°C.3.Set a Blank well without any solution.4.Add50μl of standard and sample per well.Add50μl Antibody(1x)toeach well immediately(not to Blank well).Mix well with the pipette or shake the plate gently for60seconds.A plate layout is provided to record standards and samples assayed.5.Cover with the adhesive strip provided.Incubate for40minutes at37°C.6.Aspirate each well and wash,repeating the process two times for a total ofthree washes.Wash by filling each well with Wash Buffer(200μl)using a squirt bottle,multi-channel pipette,manifold dispenser,or autowasher, and let it stand for2minutes,complete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.7.Add100μl HRP-conjugate(1x)to each well immediately(not to Blankwell).Cover with the adhesive strip provided.Incubate for30minutes at 37°C.8.Repeat the aspiration/wash process for five times as in step6.9.Add90μl of TMB Substrate to each well.Incubate for20minutes at37°C.Protect from light.10.Add50μl of Stop Solution to each well,gently tap the plate to ensurethorough mixing.11.Determine the optical density of each well within5minutes,using amicroplate reader set to450nm.If wavelength correction is available,set to540nm or570nm.Subtract readings at540nm or570nm from the readings at450nm.This subtraction will correct for optical imperfections in the plate.Readings made directly at450nm without correction may be higher and less accurate.Note:1.The final experimental results will be closely related to validity of theproducts,operation skills of the end users and the experimental environments.2.Samples or reagents addition:Please use the freshly prepared Standard.Please carefully add samples to wells and mix gently to avoid foaming.Do not touch the well wall as possible.For each step in the procedure,total dispensing time for addition of reagents or samples to the assay plate should not exceed10minutes.This will ensure equal elapsed time for each pipetting step,without interruption.Duplication of all standards and specimens,although not required,is recommended.To avoid cross-contamination,change pipette tips between additions of each standard level,between sample additions,and between reagent additions.Also,use separate reservoirs for each reagent.3.Incubation:To ensure accurate results,proper adhesion of plate sealersduring incubation steps is necessary.Do not allow wells to sit uncovered for extended periods between incubation steps.Once reagents have been added to the well strips,DO NOT let the strips DRY at any time during the assay.Incubation time and temperature must be observed.4.Washing:The wash procedure is plete removal of liquid at eachstep is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting and remove any drop of water and fingerprint on the bottom of the plate.Insufficient washing will result in poor precision and falsely elevated absorbance reading.When using an automated plate washer,adding a30second soak period following the addition of wash buffer,and/or rotating the plate180degrees between wash steps may improve assay precision.5.Controlling of reaction time:Observe the change of color after adding TMBSubstrate(e.g.observation once every10minutes),TMB Substrate should change from colorless or light blue to gradations of blue.If the color is too deep,add Stop Solution in advance to avoid excessively strong reaction which will result in inaccurate absorbance reading.6.TMB Substrate is easily contaminated.TMB Substrate should remaincolorless or light blue until added to the plate.Please protect it from light. 7.Stop Solution should be added to the plate in the same order as the TMBSubstrate.The color developed in the wells will turn from blue to yellow upon addition of the Stop Solution.Wells that are green in color indicate that the Stop Solution has not mixed thoroughly with the TMB Substrate.ASSAY PROCEDURE SUMMARY*Please determine whether the sample needs to be diluted or the optimal dilution factor based on preliminary experiment result.CALCULATION OF RESULTSUsing the professional soft"Curve Expert"to make a standard curve is recommended,which can be downloaded from our web.Average the duplicate readings for each standard and sample and subtract the average optical density of Blank.Create a standard curve by reducing the data using computer software capable of generating a four parameter logistic(4-PL)curve-fit.As an alternative, construct a standard curve by plotting the mean absorbance for each standard on the x-axis against the concentration on the y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph.The data may be linearized by plotting the log of the KYN concentrations versus the log of the O.D.and the best fit line can be determined by regression analysis.This procedure will produce an adequate but less precise fit of the data.If samples have been diluted,the concentration read from the standard curve must be multiplied by the dilution factor.人犬尿氨酸（KYN）酶联免疫试剂盒使用说明书【产品编号】CSB-E13659h【预期应用】ELISA法定量测定人血清、尿液、组织裂解液中KYN含量。
碧云天-总一氧化氮检测试剂盒说明书
总一氧化氮检测试剂盒产品简介：总一氧化氮检测试剂盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸盐还原酶(Nitrate reductase)还原硝酸盐(nitrate)为亚硝酸盐(nitrite)，然后通过经典的Griess reagent检测亚硝酸盐，从而测定出总一氧化氮。
一氧化氮本身极不稳定，在细胞内很快代谢为硝酸盐(Nitrate)和亚硝酸盐(Nitrite)，通过上述方法检测出硝酸盐和亚硝酸盐的总量，就可以推算出总的一氧化氮的量。
本试剂盒采用了NADPH依赖性硝酸盐还原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。
高浓度的NADPH会干扰后续的检测，消除NADPH的一种常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。
本试剂盒采用了LDH清除NADPH的方法，使检测结果更加准确。
对亚硝酸盐的检测下限达到2微摩尔/升，在2-80微摩尔/升的范围内有很好的线性关系。
浓度过高的样品可以适当稀释后再进行检测。
样品范围广，可以检测细胞裂解液、组织裂解液、细胞或组织的培养液、血清、血浆或尿液等中一氧化氮的含量。
酚红和10%血清对测定无明显干扰。
样品需要量少。
根据样品中一氧化氮的浓度不同，仅需0-60微升样品。
检测速度快，仅需约80分钟即可完成检测。
本试剂盒采用了间接的一氧化氮检测方法，如需检测细胞内实际的一氧化氮水平，可以采用碧云天生产的DAF-FM DA (NO荧光探针)(S0019)。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。
NADPH配制成溶液后必须分装并-70℃保存。
注意事项：RPMI 1640等含有较高浓度硝酸盐的培养液容易对本试剂盒的检测产生干扰，请尽量避免。
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案
图片简介:本技术阐述了一种一氧化氮检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，R1试剂包括盐酸多巴胺、乙酸和乙酸钠，pH为4.50～5.30；R2试剂包括3甲基2苯并噻唑啉酮腙盐酸盐、叠氮化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、稳定剂和叠氮化钠，pH为7.2～7.5；R1试剂和R2试剂均为液体试剂。
本技术提供的一氧化氮检测试剂盒的R2试剂的采用双缓冲液体系，减弱空气对R2试剂pH值减低作用，从而减少对主导反应的影响，并同时其还能激活主导反应。
技术要求1.一种一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，包括独立包装的R1试剂和R2试剂：所述R1试剂包括以下浓度的组分：盐酸多巴胺50-300mmol/L，ProClin300 1-5ml/L，乙酸50-150mmol/L，乙酸钠40-100mmol/L；所述R2试剂包括以下浓度组分：3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙盐酸盐40-200moml/L，PIPES 200-500mmol/L，磷酸二氢钠168-336mmol/L，磷酸氢二钠32-64mmol/L，稳定剂1-5ml/L，叠氮化钠1-5g/L，其中所述R1试剂的pH为4.50～5.30，所述R2试剂的pH为7.2～7.5。
2.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括以下浓度组分：磷酸氢二钠80-300mmol/L。
3.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括硫酸0.02～0.5mol/L。
4.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂还包括0.5-20g/L的表面活性剂，所述表面活性剂选自Tritox-100、Emulgen A90、Emulgen A60、GENAPOLX-080，吐温-20和吐温-80中的一种。
5.如权利要求1所述的一氧化氮检测试剂盒，其特征在于，所述稳定剂选自ProClin300、乙二醇、脱氧胆酸钠、胆酸钠、硫磺脱氧胆酸钠、谷氨酸钠、三乙醇胺、聚乙二醇400、木糖醇、甘露醇和山梨醇中的一种。
一氧化氮(NO)含量检测试剂盒.96S
一氧化氮（NO）含量检测试剂盒说明书(货号：NM-W-0132 微量法100T/96S)一、产品简介：一氧化氮（Nitric Oxide，NO）是一种气态分子自由基，在生物体内作为重要的信使分子和效应分子，参与调节血管形成、神经传递、免疫调控及肿瘤生长等多种生理及病理过程。
此外，NO是植物的主要生物活性分子，在植物的生长发育和对胁迫的反应过程中参与了多种生理活动，如种子萌发、叶扩展、根生长、花器官发生、气孔运动的调节以及植物的抗逆反应等。
NO在体内或水溶液中极易氧化生成NO2-。
在酸性条件下，NO2-与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在550nm处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算NO含量。
酶标仪、96孔板、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、超声细胞破碎仪、研钵/匀浆器、天平、可调式移液器、冰和蒸馏水。
四、操作步骤：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！1、预实验样本制备℃ 组织样本：称取0.2g样本，加入1mL提取液进行冰浴匀浆后，10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为2~5：10的比例进行提取。
℃ 细菌/细胞样本：建议1000万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔7s，总时间5min），10000g，4℃离心15min，取上清置于冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为1000~2000：1的比例进行提取。
℃ 血清（浆）等液体样本：直接测定。
若液体有浑浊则离心取上清测定。
2、标准溶液的配制：把10μmol/mL标准品母液用蒸馏水稀释成1.25μmol/mL的标准溶3、预实验上机操作：℃ 酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm。
4、正式实验：℃ 若预实验∆A 测定小于0.005，可以增加样本量后再进行测定；如果∆A测定大于1.5，建议将样本上清用稀释液适当稀释后再进行测定，并将改变后的W和D代入公式计算；℃ 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；℃ 正式实验按照预实验操作步骤进行（标准管和空白管预实验已做，正式实验可选做）。
一氧化氮检测试剂盒化学法
一氧化氮检测试剂盒（化学法）说明书修订日期：2016.06.22 Cat number：KGT008Store at4℃for for6months,避光For Research Use Only（科研专用）一、实验原理一氧化氮NO(即血管内皮舒张因子)，在生物体内作为一种反应性极强的自由基，兼有第二信使和神经递质作用，同时又是一种效应分子，在体内具有广泛的生理作用，如松弛血管平滑肌，抑制血小板聚集，调节血流，介导细胞毒效应和免疫调节，参与学习和记忆、动脉粥样硬化等作用。
NO本身半衰期极短，血液中的NO主要由血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、巨噬细胞等产生以硝酸盐的形式存在，通过其浓度可以间接测知NO浓度。
NO遇氧及水生成硝酸盐及亚硝酸盐，后二者遇硝酸盐显色剂可生成淡红色偶氮化合物，通过比色可间接测知NO浓度。
二、试剂盒组份组份KGT008（100assays）保存条件Buffer A100mL4℃Buffer B50mL室温或4℃试剂C粉剂一支4℃避光试剂D粉剂一支4℃避光Buffer E12mL室温亚硝酸钠标准液（2mmol/L）1mL4℃注意事项1．试剂C工作液配制：用时加入双蒸水至30mL，4℃避光保存。
（难溶，可以60℃隔水加热至溶解）2．试剂D工作液配制：用时加入双蒸水至12mL，4℃避光保存。
3．显色剂配制：试剂C工作液︰试剂D工作液︰Buffer E＝2.5︰1︰1的体积比配制（现配现用），配好的显色剂放冰箱保存，如颜色变得很深则不可再用。
4.亚硝酸钠标准液（20umol/L）配制：将亚硝酸钠标准液（2mmol/L）用双蒸水100倍稀释待用，现用现配。
三、操作步骤1．操作方法：于一次性塑料试管中按下表加入试剂试剂空白管标准管测定管双蒸水（mL）a﹡20μmoL/L亚硝酸钠标准液（mL）a﹡样本（mL）a﹡Buffer A（mL）0.80.80.8Buffer B（mL）0.40.40.4混匀后室温放置10分钟，3500～4000转/分，离心10分钟，取澄清的上清液上清液（mL）0.80.80.8显色剂（mL）0.40.40.4混匀,15分钟后,550nm比色，0.5cm光径比色杯，水调零，测各管OD值注意事项a﹡为取样量=标准品量=蒸馏水量)/()/20()mol/gprot (L gprot L mol OD OD OD OD NO 待测样本蛋白浓度标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量÷⨯-=μμ样品测试前稀释倍数标准管浓度值管－空白管标准管值空白管管测定管含量⨯⨯-=)/20()mol/L (L mol OD OD OD OD NO μμ四、计算1．计算公式血清：组织：2．计算举例(1)兔血清测定管OD 值为0.018，空白管OD 值为0.004，标准管OD 值为0.024。
ELISA 检测试剂盒 说明书
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human Human））17-17-羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（羟皮质类固醇（17-OHCS 17-OHCS 17-OHCS））ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
植物一氧化氮(NO)说明书(1)
2张
6 显色剂 B 液
6ml×1/瓶
12 密封袋
1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
大于标准品孔第一孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6．底物请避光保存。 7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9．本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 1．试剂盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6 个月
用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值
植物一氧化氮(NO)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 15µmol/L -400µmol/L
96T
使用目的：
本试剂盒用于测定植物组织，细胞及相关样本中一氧化氮(NO)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物一氧化氮(NO)水平。用纯化的植物一氧化
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案
一氧化氮检测试剂盒及检测方法与设计方案一氧化氮（NO）是一种重要的生物活性分子，在许多生理和病理过程中发挥重要作用。
因此，开发一种简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案具有重要的意义。
以下将详细介绍一氧化氮检测试剂盒及相应的设计方案。
首先，对于试剂的选择，应选取具有高度灵敏性和特异性的试剂。
一氧化氮的浓度通常很低，因此需要使用高灵敏度的化学试剂来检测其浓度。
一种常用的试剂是Griess试剂，该试剂与一氧化氮反应生成可检测的化合物。
此外，还有一些基于荧光和发光技术的试剂可用于一氧化氮的检测。
其次，在实验步骤方面，应设计简单可行的实验步骤来进行一氧化氮的检测。
一种常用的实验步骤是将待测样品和试剂混合，并在一定的温度和时间条件下反应，然后通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度或荧光强度。
实验步骤应尽可能简单明了，以提高实验的可重复性和稳定性。
在检测原理方面，应该基于一氧化氮的化学性质和检测方法的原理来设计。
一氧化氮是一种高活性的气体，其荧光、发光、吸光度或电化学性质可用于检测。
例如，荧光性染料可以与一氧化氮反应生成荧光产物，通过测定荧光的强度来分析一氧化氮的浓度。
另一种常用的方法是通过光谱测定试剂与一氧化氮反应产生的化合物的吸光度。
此外，还可以使用电化学方法来检测一氧化氮的浓度。
最后，在数据分析方面，应使用合适的统计方法来处理实验数据，计算并分析一氧化氮的浓度。
如果设计了标准曲线，可以根据标准曲线来计算样品中一氧化氮的浓度。
此外，对于复杂的样品或实验结果，可以使用统计学方法进行数据分析和解释。
总结起来，设计一氧化氮检测试剂盒及相应的检测方法和设计方案应包括试剂的选择、实验步骤、检测原理以及数据分析等方面。
通过合理的设计，可以开发出简单快速、灵敏准确的一氧化氮检测方法，为一氧化氮的检测提供重要的工具和技术支持。
人血清一氧化氮(NO)ELISA试剂盒试验方法
人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒试验方法人血清一氧化氮（NO）ELISA试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内），仅供科研使用，不得用于临床！原理本试验采用双抗体夹心ABCELISA法。
用抗人NO单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的NO与单抗结合，加入生物素化的抗人NO，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最终加停止液硫酸，在450nm处测OD值，NO浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NO浓度。
试剂盒构成（28℃保管）酶标板（CoatedWells） 96孔酶标抗体工作液（EnzymeConjugate） 12ml 10×标本稀释液（SampleBuffer）12ml 20×浓缩洗涤液（WashBuffer）50ml标准品（Standards）：1000μM/瓶 2瓶底物工作液（TMBSolution） 12ml 第一抗体工作液（BiotinylatedAntibody） 12ml 停止液（StopSolution）12ml准备试剂与收集血样1.收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，28℃保管48小时；更长时间须冷冻（20℃或70℃）保管，避开反复冻融。
2.标准品液配制：使用前加入1ml蒸馏水混匀，配成1000μM的溶液。
设标准管8管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。
在第一管中加入1000μM的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。
如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。
第八管为空白对照。
3.10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液 9ml蒸馏水）。
4.洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）检测程序1.加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
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人试剂盒说明书人血清一氧化氮NOELISA检测试剂
盒
人试剂盒说明书,人血清一氧化氮（NO）ELISA检测试剂盒樊克生物专业供应：
使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本血清
试验原理：
NO试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知NO浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将NO和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中NO的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制
自备材料
1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1．避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。
避免用手接触，有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法
1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原
和内毒素的试管。
收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000
×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。
1000×g
离心10分钟，取上清液
5、保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-
70 ℃保存，避免重复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂
血。
如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。
不要在37℃
或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1．标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。
稀释前将标准品振荡混匀。
稀释比例按下表中进行：
2．洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1．使用前，将所有试剂充分混匀。
不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
每个标准品和空白孔建议做复孔。
每个样品根据自己的数量来。