控制菌检查用培养基的适用性检查方案
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培养基适用性验证方案
控制菌培养基
控制菌检查用培养基的适用性检查方案
目录
1. 概述 (2)
2. 验证目的 (2)
3. 参照标准 (2)
4. 验证项目 (2)
5. 验证小组人员及职责 (2)
6. 试验材料 (3)
7. 控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标 (4)
8. 菌液制备 (4)
9. 验证步骤 (4)
10 .附表 (6)
1.概述：
培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。控制菌检查用培养基可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价检验用培养基是否符合检验要求。
2.验证目的：
2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。本次验证的目的是确认胆盐乳糖培养基（BL）、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养基（MUG）、营养肉汤培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）是否符合检验要求。
3.参照标准：
2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
4.验证项目：
胆盐乳糖培养基（BL）、4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养基（MUG）、营养肉汤培养基和四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）。
5.验证小组人员职责及要求：
5.1
5.2验证人员职责及要求：
5.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
5.2.2认真观察并做好验证原始记录。
5.2.3对实施验证的结果负责。
5.3验证中各部门的职责：
5.3.1验证领导组职责：
5.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
5.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
5.3.1.3负责验证方案的批准工作。
5.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
5.3.1.5负责验证报告的批准工作。
5.3.2验证工作小组职责：
5.3.2.1负责验证方案的起草工作。
5.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
5.3.2.3负责验证方案的实施。
5.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
5.3.2.5参与验证结果的评价工作。
5.3.3质量部职责：
5.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
5.3.3.2负责验证方案的审核工作。
5.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
5.3.3.4负责检验仪器及检验方法的验证。
5.3.3.5负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程
中的各项检验工作负责。
5.3.3.6负责对验证人员的培训、考核工作。
5.3.3.7负责验证资料和报告的审核工作。
5.3.3.8负责验证文件回收、归档管理工作。
6试验材料：
5.2验证用菌株：
5.3仪器设备：
5.3.1. YM50型立式压力蒸汽灭菌器
5.3.2.YJ-1450GB净化工作台
5.3.3.DNP-9272电热恒温培养箱（30℃～35℃）
5.3.4.PYX-DHS-40x50隔水式电热恒温培养箱（23℃～28℃）5.3.5.DHG-9140AS电热恒温鼓风干燥箱
5.3.
6.DL-1型电子万用炉
7. 控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标:
8.菌液制备：
接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上，于30℃～35℃培养箱中培养18～24小时，再用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为10～100cfu的菌悬液。
9.验证步骤：
9.1胆盐乳糖培养基(BL)：
新鲜配制100ml/瓶的对照胆盐乳糖培养基3瓶，121℃灭菌20min，备用。分别接种大肠埃希菌以及金黄色葡萄球菌各1瓶，接种菌液量1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置30℃～35℃培养箱中培养。培养18h,与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；培养48h，空白培养瓶和接种金黄色葡萄球菌的培养瓶应不得浑浊。
9.2 4-甲基伞形酮葡萄糖苷酸培养基培养基（MUG）：
新鲜配制50ml/支的对照MUG培养基3支，121℃灭菌20min,备用。接种大肠埃希菌2支，接种菌液0.2ml(不大于100cfu)，另一支不接种菌作为空白对照，培养5h，在366nm紫外光灯下观察结果；被检培养基同法操作，置30℃～35℃培养箱中培养。空白培养管应不得浑浊，且366nm处观察无荧光；与对照
培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊，366nm 处应呈荧光。若荧光不明显，则可延长至24h观察。
9.3营养肉汤培养
新鲜配制100ml/瓶的对照营养肉汤培养基3瓶，121℃灭菌15min，备用。分别接种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各1瓶，接种菌液量1ml(不大于100cfu)，另一瓶不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊；培养48h，空白培养瓶应不得浑浊。
9.4四硫磺酸钠亮绿培养基（TTB）
新鲜配制10ml/支的对照四硫磺酸钠亮绿培养基基础，121℃灭菌15min，备用。临用前，无菌操作加入0.2ml碘试液和0.1ml亮绿试液。取5支，分别接种乙型副伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌各2支，接种菌液1ml(不大于100cfu)，另一支不接种菌作为空白对照；被检培养基同法操作，置规定温度培养。培养18h,与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基上清浑浊；培养24h，空白培养管和接种金黄色葡萄球菌的培养管应不得浑浊。
9.5结果见附表1。