急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究
异基因造血干细胞移植后B淋巴细胞重建及其影响因素论文
植后３～２４个月其ＣＤｌ９＋Ｂ淋巴细胞数量明显高于ａｌｌｏ— ＰＢＳＣＴ组。该研究还比较两组患者移植后ＢＡＦＦ水平，结果 显示，ｄＵＣＢＴ组患者ＢＡＦＦ水平在移植后１个月较ａｌｌｏ— ＰＢＳＣＴ组患者高，在移植后３～６个月与后者相似，在移植后 １２个月低于后者；ｄＵＣＢＴ组移植后１００ ｄ内感染率较ａｌｌｏ— ＰＢＳＣＴ组患者高，慢性ＧＶＨＤ发生率较ａｌｌｏ—ＰＢＳＣＴ组 患者低。 １．２预处理方案对Ｂ淋巴细胞重建的影响
骨髓移植（ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ
移植物抗宿主病对Ｂ淋巴细胞及其亚型重建的影响 ＧＶＨＤ的发生明显延缓Ｂ淋巴细胞及其亚群重建供
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＢＭＴ）患儿快。随后越
者Ｔ淋巴细胞对骨髓的入侵、ＧＶＨＤ的发生和其治疗导致了 ａｌｌｏ—ＨＳＣＴ后Ｂ淋巴细胞重建延迟，与ＧＶＨＤ相关的Ｂ淋巴细 胞发育异常包括Ｂ淋巴细胞总数减少；Ｂ淋巴细胞成熟改变如 过渡态Ｂ淋巴细胞（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎａｌ 细胞（ｉｍｍａｔｕｒｅ
ｉｓ ｃｌｏｓｅｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ
ｔｏ
ｔｈｅ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ．Ｂ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｒｅｅｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｉｓ
ｓｏｕｒｃｅ
ｏｎｅ
Ｏｆ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐａｒｔ
ｏｆ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ａｆｔｅｒ ａ１１０．ＨＳＣＴ．Ｔｈｅ
ａｎｔｉｇｅｎ，ＨＬＡ）相合同胞供者的外周血造血
干细胞中ＣＤ２０＋Ｂ淋巴细胞含量高，则移植后患者急性ＧＶＨＤ 发生率明显升高。该结果提示，采用含抗ＣＤ２０单克隆抗体的 预处理方案可能对移植后患者预防ＧＶＨＤ发生有显著作用。 抗ＣＤ２０单克隆抗体由于清除较成熟ＣＤ２０＋Ｂ淋巴细胞，导致 移植后Ｂ淋巴细胞缺如及Ｂ细胞激活因子（Ｂ
异基因造血干细胞移植后发生胃肠道急性移植物抗宿主病的危险因素分析
异基因造血干细胞移植后发生胃肠道急性移植物抗宿主病的危险因素分析高艳林;王风霞;张雅文;胡丽娟;邱婷婷;李德鹏;黄一虹【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2024(53)5【摘要】目的探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)后发生胃肠道急性移植物抗宿主病(gastrointestinal acute graft-versus-host disease,GI-GVHD)的临床特征、相关危险因素和预后情况。
方法回顾性分析2017年1月~2020年7月在徐州医科大学附属医院行allo-HSCT的201例患者的临床资料,根据GI-GVHD发生情况进行分组。
单因素Logistic回归分析评价GI-GVHD发生的相关因素,多因素Logistic回归分析评价其发生的独立危险因素,进一步分析GI-GVHD对生存及预后的影响。
结果接受allo-HSCT的201例患者中,36例(17.9%)发生GI-GVHD,发生中位时间为34(9~88)天,中位生存时间为228(21~1759)天,总体生存率为36.1%。
随访中发生GI-GVHD患者的总生存期(overall survival,OS)较未发生者明显降低(36.1%vs 75.0%),差异有统计学意义(P=0.004)。
GI-GVHD患者以持续性恶心、呕吐、腹痛、腹泻和消化系统出血等症状为主,常伴有皮肤、肝脏等靶器官的损害。
单因素Logistic回归分析结果显示,供受者性别关系(P=0.012)、移植类型(P=0.054)、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)位点不合程度(P=0.015)、预处理期间使用碳青霉烯类抗生素(P=0.029)、预处理期间使用碳青霉烯类超过7天(P=0.007)、早期血流感染(bloodstream infection,BSI,P=0.023)是GI-GVHD发生的影响因素。
异基因造血干细胞移植术后Th9细胞重建特点的研究
异基因造血干细胞移植术后Th9细胞重建特点的研究庞楠楠;杨艳新;曲建华;徐建丽;袁海龙;曹海洲;陈刚;江明;丁剑冰【摘要】目的探讨异基因造血干细胞移植术后Th9细胞重建特点.方法选取接受造血干细胞移植治疗的患者64例为研究对象,其中全相合组31例,单倍体组33例,20名健康人作为对照组,通过FCM和ELISA法动态检测患者及对照组外周血中Th9细胞和IL-9、TGF-β、IL-4的变化特点.结果全相合组和单倍体组的Th9细胞百分比值分别在移植后90 d和150 d基本恢复正常(P＞0.05),IL-9的动态变化趋势与Th9细胞的变化相一致,全相合组IL-9的浓度在移植后60 d和90 d时高于单倍体组(P＜0.05);全相合组TGF-β和IL-4在移植后90 d和60 d逐渐恢复至正常水平,单倍体组TGF-β和IL-4在移植后150 d和60 d恢复至正常水平;移植后发生aGVHD患者Th9细胞及IL-9和TGF-β浓度明显低于未发生aGVHD者,差异均有统计学意义(P＜0.05).移植后IL-9的浓度与TGF-β呈正相关.结论全相合组Th9细胞和IL-9的重建早于单倍体组,aGVHD患者Th9/IL-9重建延迟,IL-9可能有助于诱导机体免疫耐受.%Objective To investigate the characteristics of Th9 cell reconstitution after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation.Methods 64 patients with hematopoietic stem cell transplantation treatment and 20 healthy controls were enrolled in this study.Peripheral blood Th9 cells,IL-9,TGF-β and IL-4 from patients and controls were dynamically detected by Flow cytometry and ELISA.Results Th9 cells recovery started from day 90 and 150 in HLA-matched group and HLA-haploidentical group respectively (P ＞0.05);The dynamic trend of IL-9 was consistent with the changes of Th9 cells.The concentration of IL-9 in HLA-matched group were higher than that in HLA-haploidentical group atday 60 and day 90 (P ＜0.05).TGF-β and I L-4 gradually recovered to normal levels at day 60 and day 90 after transplantation in HLA-matched group.In HLA-haploidentical group,TGF-β and IL-4 returned to normal levels at 60 d and 150 d after transplantation;The number of Th9 cell and concentration of IL-9,TGF-β in patients with acute graft-versus-host disease (aGVHD) were significantly lower than patients without aGVHD after transplantation,which the differences were statistically significant (P ＜0.05).The concentration of IL-9 was positively correlated with TGF-β afber transplantation.Conclusion HLA-matched group showed earlier reconstitution of Th9 cells and IL-9 than HLA-haploidentical group;the reconstitution of Th9/IL-9 was delayed in aGVHD patients,and IL-9 might be helpful to induce immune tolerance.【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2017(040)012【总页数】5页(P1564-1568)【关键词】异基因外周血造血干细胞移植;急性移植物抗宿主病;Th9细胞;白介素-9【作者】庞楠楠;杨艳新;曲建华;徐建丽;袁海龙;曹海洲;陈刚;江明;丁剑冰【作者单位】新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学公共卫生学院,乌鲁木齐830011;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学第一附属医院血液病中心,乌鲁木齐830054;新疆医科大学基础医学院免疫教研室,乌鲁木齐830011【正文语种】中文【中图分类】R457.7目前，造血干细胞移植是治疗恶性血液病的最好方法之一，但是找到匹配的亲缘间HLA全相合(HLA-matched sibling donor ，MSD)的供者非常困难。
治疗相关性白血病异基因造血干细胞移植疗效分析
Efficacy analysis of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation on therapy-related leukemia Zhang Shuqin, Fei Xinhong, Wen Hongxia, Liu Yuanyuan, Cheng Haoyu, Zhang Weijie, Wang Jingbo Department of Hematology, Aerospace Central Hospital, Beijing 100049, China Corresponding author: Wang Jingbo, Email: dpwangjingbo@
2 结果
2.1 — 般 资 料 14例 患 者 原 发 病 的 类 型 ：急性曱-幼粒细胞n 血
病 [急 性 髓 系 白 血 病 （AML)-M,]2 例 ，子宫绒毛膜癌 2 例 ，骨 肉 瘤 2 例 ，急 性 淋 巴 细 胞 内 血 病 （ALL) 1 例 ， 乳 腺 癌 1 例 ，结 肠 癌 1 例 ，子 宫 颈 癌 1例 ，混合型畸胎 瘤 1例 ，侵 袭 性 葡 萄 胎 1 例 ，肝 癌 1 例 ，霍奇金淋巴瘤 (HL)1例 ：原发病的治疗：白血病和妇科肿瘤患者均 接 受 化 疗 ，其他实体瘤患者均接受手术及化疗，淋巴 瘤患者均接受放化疗及自体干细胞移棺(表1) 2 . 2 造血重建情况
【Abstract】 Objective To investigate the clinical efficacy of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) on therapy-related leukemia (TRL). Methods The clinical data of 14 patients with TRL who received allo-HSCT in Aerospace Central Hospital from April 2012 to February 2020 were retrospectively analyzed, and the therapeutic efficacy and survival status were also analyzed. Results Of the 14 patients, 5 were males and 9 were females; the median age was 35 years old (12-59 years old). There were 12 patients with acute myeloid leukemia, 1 patient with chronic lymphocytic leukemia/small cell lymphoma, and 1 patient with acute lymphoblastic leukemia. At the time of transplantation, 4 patients achieved hone marrow complete remission, 3 patients achieved bone marrow partial remission, and the remaining 7 patients had no remission. Five patients received HLA-matched sibling transplantation, 9 patients received haplotype transplantation, and they all received myeloablative pretreatment schemes. All 14 patients were successfully implanted; the median engraftment time of granulocyte was 16 d (10-24 d), and the median engraftment time of platelet was 13 d (10-34 d). Grade I - II acute graft - versus - host disease (GVHD) occurred in 7 patients, chronic GVHD occurred in 6 patients, and grade HI intestinal GVHD occurred in 2 patients. The median follow up time was 32 months (4-97 months). Among 14 patients, 5 patients died. Conclusion The allo-HSCT can improve the prognosis and long-term survival rate of TRL patients.
联合克拉屈滨预处理方案在难治复发性急性髓系白血病患者异基因造血干细胞移植中的疗效观察
联合克拉屈滨预处理方案在难治／复发性急性髓系白血病患者异基因造血干细胞移植中的疗效观察王晴晴，夏凌辉ＯｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｃｕｒａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｏｆｃｏｍｂｉｎｅｄｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｃｌａｄｒｉｂｉｎｅｉｎａＩｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏ ｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｏｆｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ／ｒｅｌａｐｓｅｄａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｐａｔｉｅｎｔｓＷＡＮＧＱｉｎｇｑｉｎｇ，ＸＩＡＬｉｎｇｈｕｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＵｎｉｏｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＴｏｎｇｊｉＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｕａｚｈｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕｂｅｉＷｕｈａｎ４３００２２，Ｃｈｉｎａ．【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｃｏｍｂｉｎｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｗｉｔｈｃｌａｄｒｉｂｉｎｅｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ／ｒｅｌａｐｓｅｄａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ（ＡＭＬ）ｗｉｔｈａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｏｆ１７ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ／ｒｅｌａｐｓｅｄＡＭＬｗｈｏｕｎｄｅｒｗｅｎｔｃｏｍｂｉｎｅｄｃｌａｄｒｉｂｉｎｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｐｌａｎａｎｄｒｅｃｅｉｖｅｄａｌｌｏ－ＨＳＣＴｉｎｔｈｅｌａｍｉｎａｒｆｌｏｗｗａｒｄｏｆｏｕｒｈｏｓｐｉｔａｌｆｒｏｍＡｐｒｉｌ２０１７ｔｏＯｃｔｏｂｅｒ２０１９ｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄａｎｄａｎａｌｙｚｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｗａｓｃｏｍｐｌｅｔｅｄｉｎａｌｌｔｈｅ１７ｐａｔｉｅｎｔｓ，ａｎｄｔｈｅｍｅｄｉａｎｔｉｍｅｏｆｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗａｓ１２ｄ（９～２０ｄ），ａｎｄｔｈｅｍｅｄｉａｎｔｉｍｅｏｆｐｌａｔｅｌｅｔｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｗａｓ１１ｄ（９～３０ｄ）．Ｄｕｒｉｎｇｔｈｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｏｎｅｐａｔｉｅｎｔｄｅｖｅｌｏｐｅｄｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｃｙｓｔｉｔｉｓ．４ｐａｔｉｅｎｔｓｏｃｃｕｒｒｅｄⅠ－ⅡｄｅｇｒｅｅｏｆａＧＶＨＤ．Ａｔｔｈｅｅｎｄｏｆｆｏｌｌｏｗ－ｕｐ，８ｏｆｔｈｅ１１ｓｕｒｖｉｖｉｎｇｐａｔｉｅｎｔｓｈａｄｌｏｃａｌｉｚｅｄｃＧＶＨＤ．Ｆｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓｒｅｌａｐｓｅｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｗｉｔｈａｍｅｄｉａｎｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅｔｉｍｅｏｆ４ｍｏｎｔｈｓ（２～１９ｍｏｎｔｈｓ）．Ｔｈｅ１－ｙｅａｒｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｗａｓ５７．２％，ａｎｄｔｈｅ１－ｙｅａｒｄｉｓｅａｓｅ－ｆｒｅｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｗａｓ５５．２％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍｅｆｆｅｃｔｏｆｃｌａｄｒｉｂｉｎｅｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｓｂｅｔｔｅｒ，ｗｉｔｈｏｕｔｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｔｈｅａｄｖｅｒｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｉｔｃａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅｏｆｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ｃｌａｄｒｉｂｉｎｅ，ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ａｃｕｔｅｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０２１，２９（０８）：１４１９－１４２２【摘要】 目的：评价联合克拉屈滨预处理方案在异基因造血干细胞移植（ａｌｌｏ－ＨＳＣＴ）治疗难治／复发性急性髓系白血病（ＡＭＬ）中的疗效。
异基因移植后慢性移植物抗宿主病患者T细胞亚群动态观察
亚群 的缺失 或调 节功 能紊 乱 在 ｃ Ｖ Ｄ过程 中均能 够观 察 Ｇ Ｈ 到 。但具体的 Ｔ细胞 亚群 的变 化规律 目前 尚不清楚 。本 研
究 通 过 动 态 观 察 移 植 患 者 Ｔ淋 巴细 胞 亚 群 的异 常 变 化 ， 解 了
胞仪进行 三色流式 细胞 术检 测 ， 所有 数据 采用 Ｃ ｌ ｕｓ 软 ｅ Ｑ ｅｔ ｌ
中华 临床 医 师 杂志 （ 电子 版 ） Ｏ Ｏ年 １ ２Ｌ ｉ月第 ４卷第 １ 期 １
பைடு நூலகம்
Ｃ ｉ ｌ ｉｉ ｓ Ｅｅ ｔ ｎｃＥ ｉ ｏ ） Ｎ ｖ ｍ ｅ １ ，０ ０ Ｖ １ Ｎ ． １ ｈｎ ＪＣｉ ｃ ｎ （ ｌｃ ｏ ｉ ｄ ｉ ． ｏ ｅ ｂ ｒ ５ ２ １ ． ｏ． ｏ １ ｎ ａ ｒ ｔｎ ４．
件进行分 析。
机体免疫功能的状态 ， 从而在移植过程 中对 临床上免疫 调节
剂等药物的应用起到一定的指导作用。
一
３ ．统计 学分析 ： 应用 Ｓ Ｓ ００医用统计软件包进行数 Ｐ Ｓ１． 据分析 ， 试验数据采用均数 ±标 准差 （ ±ｓ 表示 ， ） 进行计 量 资料 ｔ 检验 。Ｐ＜００ ． ５为差异有统计学意义。
・
短 篇 论 著 ・
异 基 因移 植后 慢 性移 植 物抗 宿 主病 患者 Ｔ细 胞 亚 群 动 态 观 察
周 芳 葛林阜 刘 希 民 周 兰月 张 东红
【 摘要 】 目的 通过 动态观察 移植 患者 Ｔ淋 巴细胞 亚群 的异常 变化 ， 了解 机体免 疫功 能 的状
态， 从而在移植过程 中指导临床上免疫调节剂等药 物的应用 。方法 流式细胞 仪检测 患者外周 血 Ｔ 细胞亚群 Ｃ ３ＦＴ 、 Ｄ ．Ｅ， Ｄ 一ＩＣ Ｃ ８Ｐ Ｃ ３ＦＴ 、 Ｄ ６＋５ 一Ｅ Ｃ ４Ｃ Ｃ Ｃ ２ 一Ｅ抗体 Ｄ 一ＩＣ Ｃ ４ Ｐ Ｃ ３ＦＴ 、 Ｄ 一Ｅ， Ｄ 一ＩＣ Ｃ １ ６Ｐ 、 Ｄ 一Ｙ 、 Ｄ ５Ｐ 标 记。试验数据采用均数 ± 标准差表示 ， 行计 量资料 ｔ 进 检验 。结果 （ ） １ 患者 Ｃ ３ Ｄ Ｔ细胞 比例在
EBV-CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EB病毒感染的分析
EBV-CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EB病毒感染的分析缪晓娟;李业成;易海;苏毅;杨慧;孙浩平;付利;范方毅;王译;何光翠;赖思含;侯严堂【摘要】目的：研究EB病毒特异性细胞毒 T 淋巴细胞（EBV‐CTL）治疗异基因造血干细胞移植后难治性 EBV感染的疗效。
方法报道4例EBV‐CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EBV感染病例并结合文献分析。
结果3例取得了较好疗效，分别于治疗后1、2、3个月转阴，分别随访8、12、6个月未复发，仅有1例在EBV‐DNA转阴后第6个月复发，再次EBV‐CTL治疗后，迅速进展为移植后淋巴细胞增殖性疾病（PTLD），治疗无效死亡。
结论EBV‐CTL是治疗难治性EBV感染的一种有效手段，但仍有部分病例治疗无效，值得进一步探讨和研究。
【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2015(000)029【总页数】3页(P4051-4053)【关键词】疱疹病毒4型 ,人;特异性细胞毒T淋巴细胞;异基因造血干细胞移植【作者】缪晓娟;李业成;易海;苏毅;杨慧;孙浩平;付利;范方毅;王译;何光翠;赖思含;侯严堂【作者单位】成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083;成都军区总医院血液科，成都610083【正文语种】中文【中图分类】R457.7EB病毒(EBV)感染是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后常见并发症，通常采用减停免疫抑制剂、抗病毒药物和CD20单克隆抗体(利妥昔单抗)治疗，部分病例病情可以得到有效控制，但仍有部分病例病情进展，成为难治性EBV感染，甚至可发展成移植后淋巴细胞增殖性疾病(post-transplantlymphoproliferativedisease，PTLD)[1]。
《2024年多发性骨髓瘤患者T淋巴细胞及其细胞因子的变化研究》范文
《多发性骨髓瘤患者T淋巴细胞及其细胞因子的变化研究》篇一一、引言多发性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）是一种常见的恶性浆细胞病，其特征为骨髓中异常浆细胞增生并产生大量的单克隆免疫球蛋白。
患者体内免疫系统紊乱，往往伴随着T淋巴细胞及其细胞因子的变化。
因此，深入研究多发性骨髓瘤患者T淋巴细胞及其细胞因子的变化对于揭示疾病的发病机制、诊断、治疗及预后具有重要意义。
本文将就此问题展开研究，为临床提供更多理论支持。
二、材料与方法本研究选取了近期入院诊断为多发性骨髓瘤的患者，共60例作为研究对象。
通过流式细胞术和酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，检测患者外周血中T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+）的分布及细胞因子（如IFN-γ、IL-4、IL-10等）的水平。
同时，选取健康人群作为对照组，进行同样的检测。
三、T淋巴细胞亚群的变化1. 检测结果通过流式细胞术检测发现，多发性骨髓瘤患者外周血中T淋巴细胞亚群分布与健康人群相比存在显著差异。
具体表现为CD3+、CD4+ T淋巴细胞数量减少，而CD8+ T淋巴细胞数量增多。
这表明多发性骨髓瘤患者存在T淋巴细胞免疫功能的紊乱。
2. 影响因素分析研究发现，T淋巴细胞亚群的变化与患者疾病分期、病情严重程度及治疗方案等密切相关。
早期患者T淋巴细胞亚群紊乱较轻，随着病情发展，紊乱程度加重。
经过化疗等治疗后，T淋巴细胞亚群分布有所改善。
四、细胞因子的变化1. 检测结果通过ELISA法检测发现，多发性骨髓瘤患者外周血中细胞因子水平与健康人群相比也存在显著差异。
如IFN-γ、IL-4等炎症相关细胞因子水平升高，而IL-10等免疫调节细胞因子水平降低。
这表明多发性骨髓瘤患者体内存在炎症反应和免疫失衡。
2. 细胞因子与T淋巴细胞的关系研究发现在多发性骨髓瘤患者中，T淋巴细胞亚群的变化与细胞因子水平密切相关。
CD4+ T淋巴细胞数量的减少可能导致IL-4等细胞因子水平降低；而CD8+ T淋巴细胞的增多可能引起IFN-γ等细胞因子水平升高。
同种异体造血干细胞移植后免疫重建的检测技术
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外周血T细胞受体删除环(TRECs)定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展
外周血T细胞受体删除环(TRECs)定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展武小亮;韩娟;王靖;卢林纲【摘要】骨髓移植成功的关键在于移植后免疫系统的重建状况,特别是T细胞数量及功能的重建.T细胞受体删除环(TRECs)作为胸腺近期输出naive T细胞含量的标志,在细胞中十分稳定,可作为评价胸腺近期的输出功能及T细胞免疫重建状况的指标.鉴于TRECs对评价骨髓移植术后免疫重建状况具有重要现实意义,该文就TRECs的定量检测及其在评价骨髓移植后免疫重建状况中的应用概况及进展进行综述.【期刊名称】《现代检验医学杂志》【年(卷),期】2019(034)004【总页数】6页(P1-5,27)【关键词】T细胞受体删除环(TRECs);骨髓移植;免疫重建【作者】武小亮;韩娟;王靖;卢林纲【作者单位】农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081;农业农村部食物与营养发展研究所评价研究室,北京 100081【正文语种】中文【中图分类】R457.7;R392.4胸腺是人体重要的中枢免疫器官，是T淋巴细胞生长、发育和成熟的重要场所[1]。
来自骨髓中的前T细胞在胸腺中发育形成naive T细胞，随血流运输至外周血发挥免疫作用。
胸腺naive T细胞的输出能力，一定程度上反映了机体的免疫水平。
研究表明，胸腺输出功能与年龄呈现明显的相关性，随着年龄的增长胸腺逐渐萎缩，胸腺输出功能逐渐降低，但还是能够维持最基本的输出naive T细胞的能力并对机体发挥免疫作用[2-3]。
除年龄增长所引起胸腺萎缩及输出功能下降外，HIV，CHB，AIDs，白血病等病毒和疾病，临床中的化疗、放疗、骨髓移植、实体器官移植、免疫治疗，或长期接触有害化学物质如苯等，均会引起胸腺输出功能降低[4-6]。
造血干细胞移植后免疫状态的研究进展
作者■舟： 全ｆ ７ 一 ， 江苏南京人． 马 １ ６ ）男． 南京医科大学第一附属医院外抖硕士研究生
审 拉 者： 寓京医科大学第一附属 医院普外科 武正炎 范 萍
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其原因可能与 Ｃ ８ Ｔ细胞分化成熟不依赖胸 Ｄ 大剂量放 匕 【疗使患者 的造血和免疫功能 受到彻底 左右 ， 破坏 。 在植入的干细胞未恢复正常造血功能之前， 患 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ， Ｃ ４ Ｔ细胞分化成熟依赖胸腺 生成有关 ， 而 Ｄ 从 而使 Ｃ ４ ｔＤ ’ 值倒置或低于正常 ， Ｄ Ｃ ８ 比 这一 比 的 值 者外周血细胞数很低 ， 抵抗力极低 ， 对各种病原体易
疗等措施 ， 免疫系统受到彻底破坏 ， 故免疫功能恢复 后显著下降 ， 白移植后第 ６ 开始恢复 ， 周 外周血 中首 相当缓慢。Ｈ Ｃ 后 ， Ｓ Ｔ 患者骨髓造血很快发生急性衰 先出现 Ｃ Ｉ Ｂ淋巴细胞 ， Ｄ９ 的 随后 Ｃ ２ Ｃ ２ ’ Ｄ ０ 和 Ｄ ２ 竭， 导致外周血 白细胞计数迅速下降 ， 通常在 】 周时 的 Ｂ淋 巴细胞逐渐 出现 ， 至少需要 ６ ２ 月方可 —１ 个 达到不能计数水平 ， 约在 ｌ 天后 ， ０ 回输 的造血干 恢复正 常， 至 １ 后 Ｂ淋 巴细胞 的增殖仍 有缺 甚 年 细胞开始分化 ， 才逐渐出现粒细胞和淋 巴细胞。一 陷㈨ 。
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国外医学免 疫学分册
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年
第 ２卷 ｓ
第２ 期
基本与 ＣＹ Ｂ细胞 同步。通常是 Ｉ ｄ２ ０ 首先 后出现最早 ， ４ 第 周开始恢复 ， ６ 第 周即可达到甚至 回升 ， 约 — 个月达正常水平 ， 接着是 Ｉ ， ａ ｔ 恢复 ｒ ， 超过正常水平 。Ｎ Ｋ细胞 占淋 巴细胞 总数 的百分 出现， ６ ９ 常需 １ 年之久。即便在免疫球蛋 白总量正常 比在 璐ｃ 后 １ Ｔ 个月有一过性高峰（ｏ Ｈ ｃ 前 为 ２ ％， ｓ ｒ 最慢， 血清中 和 的亚类仍 常低于 正常 水 １％）在移 植后 ３ ２ ， ～６ 月恢 复正 常 ， 可能与 之后 ， 个 Ｊ这 Ｎ 细胞 的恢复不依赖于胸腺或高水平的淋巴因子 平 ， Ｋ 容易导致受者发生感染。Ｂ细胞对 Ｔ细胞依 赖
急性髓系白血病CAR-T治疗的靶点选择
急性髓系白血病CAR-T治疗的靶点选择
邵若男;辛红蕾;施小凤
【期刊名称】《中国实验血液学杂志》
【年(卷),期】2024(32)3
【摘要】嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法将抗原抗体的靶向识别与T细胞的杀伤作用相结合,已成为最有应用前景的肿瘤治疗方法之一。
在淋巴系肿瘤中,CAR-T显示出了强大的治疗效果,并已陆续在临床中得到应用。
然而,在急性髓系白血病的治疗中尚未发现如淋巴系肿瘤中CD19一样有效且特异的靶点,因此,尝试多种靶点,并且使用优化策略,以增强疗效、减轻毒性,是目前主要的研究方向。
本文介绍了近年来CAR-T治疗急性髓系白血病靶点的最新研究进展,分析了目前亟待解决的相关问题,并总结了研究中提到的优化构建策略,希望能为相关研究的进行以及产品的临床应用提供参考。
【总页数】5页(P965-969)
【作者】邵若男;辛红蕾;施小凤
【作者单位】南京医科大学第二附属医院血液科
【正文语种】中文
【中图分类】R733.71
【相关文献】
1.CAR-T细胞治疗在急性髓系白血病中的研究和应用进展
2.《中国肿瘤临床》文章推荐:CAR-T细胞治疗在急性髓系白血病中的研究和应用进展
3.CAR-T治疗急性
髓系白血病的研究进展4.《中国肿瘤临床》文章推荐:CAR-T细胞治疗在急性髓系白血病中的研究和应用进展5.CAR-T疗法治疗急性髓系白血病的相关靶点研究进展
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异基因造血干细胞移植患者干细胞亚群数量与侵袭性真菌感染关系的临床研究
ｉ ｌｐｒｓｏｉ ｄｓｅｔ ｎｏ ｔｃ ｏａｉ ｅｍ ｉ ｃｓ ［ ］ Ａ ｔ ｎ ａ ａ ｃｐｃ ｉ ｃｉ ｆｉ ａｔ ｖｒ ｎ ｄｒ ｏｄ ｙｔ Ｊ ． ｃ ｏ ｓ ｏ ｎ ａ ｓ ａ
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造血干细胞移植后免疫重建早期T细胞受体删除环的检测分析
造血干细胞移植后免疫重建早期T细胞受体删除环的检测分析王坤;韩俊永;陈金烟;刘慎敏;薛士杰;金静君【摘要】背景:目前对于造血干细胞移植后的免疫监测缺乏直接明确的检测指标,利用不断改良的实时定量荧光PCR技术监测T细胞受体删除环(T-cell receptor excision circle,TREC或signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC)拷贝数来反映胸腺新近功能,从而评估免疫重建水平,指导预后治疗.目的:检测造血干细胞移植患者免疫重建早期T细胞受体删除环水平,分析移植方式、年龄、疾病类型、性别等因素的影响.方法:采用Taq Man探针,实时定量荧光PCR技术检测29例健康正常人,19例造血干细胞移植前患者,6例造血干细胞移植后患者的外周血1 000个细胞中所含sjTREC拷贝数.结果与结论:①正常对照组1 000个细胞中所含sjTREC拷贝数为26.99±29.3,随年龄增加而降低,男女性别 sjTREC 水平无明显差异;患者组移植前 sjTREC 水平低于正常对照组且差异有显著性意义(P=0.006);②6例患者移植后1个月时sjTREC水平上升,移植后6个月时sjTREC水平下降;③移植后6个月时2例HLA半相合亲缘移植与4例HLA全相合非亲缘移植患者sjTREC水平接近;④结果表明,移植前患者胸腺功能严重受损,在移植后 1 个月出现短暂上升后下降的趋势可能与胸腺应激性反应相关;亲缘与非亲缘移植、男性与女性、不同年龄患者等单因素分析未见明显差异,但移植后 sjTREC 水平上升反映了移植后胸腺新近输出功能的变化,体现了免疫重建受多种因素的影响.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2018(022)029【总页数】7页(P4643-4649)【关键词】T细胞受体删除环;异基因造血干细胞移植;免疫重建;胸腺功能;干细胞【作者】王坤;韩俊永;陈金烟;刘慎敏;薛士杰;金静君【作者单位】福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001;福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001;福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001;福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001;福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001;福建省医学科学研究院免疫研究所,福建省医学测试重点实验室,福建省福州市350001【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章快速阅读：文题释义：T细胞受体删除环：来自骨髓的前T淋巴细胞在胸腺内经过T细胞受体(T-cell receptor，TCR)基因重排，形成α、β、γ、δ 4种T细胞受体，并以异源二聚体的形式组成αβ TCR和γδ TCR，其中外周血T细胞中95%以上是αβ T细胞。
草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定
草鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性鉴定【摘要】目的: 研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。
方法: 制备草鱼免疫球蛋白IgM，以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠， 3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合，用ELISA法对杂交瘤进行筛选，并鉴定mAb的生物学特性。
结果: 各株阳性克隆经3次亚克隆后，共获得5株抗草鱼IgM的mAbs，分别命名为4B3、 2B11、 4D5、 3F2和4E6，它们的细胞上清ELISA效价为1∶3 200～1∶6 400，其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶6 400和1∶256 000，经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1。
交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应，除mAb 4B3外，其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应，而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应。
mAb 4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应，而与其他鱼类血清反应很弱。
免疫印迹实验结果表明mAb 4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链。
ELISA检测mAb 4D5对草鱼IgM的敏感性达10 μg/L。
结论: 制备的抗草鱼IgM mAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等，具有广阔的应用前景。
【关键词】免疫球蛋白; 间接ELISA; 单克隆抗体; BALB/c小鼠草鱼(Ctenopharyngodon idellus)是一种草食性鱼类，饲养成本低，养殖地域广，具有悠久的养殖历史，是我国四大家鱼之一，其养殖对我国农业经济增长具有重要的意义[1]。
但草鱼病害一直困扰该产业的发展，尤其是草鱼出血病危害最为严重，常引起草鱼鱼种及成鱼的大批死亡。
要解决这些问题，除了加强管理、提高养殖技术外，还必须重视其病原学、免疫学等领域的研究，将免疫预防手段引入到草鱼养殖业，通过免疫手段有效增强鱼体主动防御能力，减少疾病的发生机率[2]。
嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗桥接异基因造血干细胞移植患者的免疫重建
嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗桥接异基因造血干细胞移植患者的免疫重建异基因造血干细胞移植是治疗血液系统恶性肿瘤的最有效方法之一，但对于难治易复发的B急性淋巴细胞白血病（refractory or relapsed B-lineage acute lymphoblastic leukaemia，RR-B-ALL）即使高强度化疗及移植复发率依然很高，随着嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor，CAR）-T特异性靶向肿瘤细胞的应用，国内外很多研究共同表明［1, 2, 3］在RR-B-ALL患者移植前使用CAR-T细胞免疫治疗用于清除残存的肿瘤细胞，从而减少了此类患者的移植后复发率，改变了RR-B-ALL患者预后。
然而免疫功能重建与移植预后、感染及移植物抗宿主病等移植相关并发症密切相关，是移植后患者共同面对的问题。
本研究对比描述CAR-T细胞免疫治疗与常规治疗的非CAR-T细胞免疫治疗患者病例特征及在移植前后多时间点免疫细胞亚群的差异性，进而探讨维持CAR-T治疗桥接移植后患者免疫功能状态正向重建的影响因素。
资料与方法一、对象回顾性分析2018年8月至2021年12月期间在北京陆道培医院接受CAR-T细胞桥接异基因造血干细胞移植（allogeneic hematopoietic stem cell transplantation，allo-HSCT）治疗的所有急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）患者61例病历资料，其中行自体CD19-CAR-T细胞免疫治疗患者32例，非CAR-T细胞免疫治疗患者29例。
随访截至2022年1月31日，采用电话随访或查阅门诊/住院病历方式获得患者生存信息。
入组患者均已签署知情同意书，本项目已通过陆道培医疗伦理委员会批准（DPEC-M-202108）。
二、移植类型与预处理均选用清髓性预处理，其中全身照射（total body irradiation，TBI）/CY方案52例（TBI 200cGY×5次；CY 1.5~1.8 g/m2，-5至-4 d），BU/CY方案9例（BU 0.8~1.2 mg/kg Q6，-9至-6 d；CY 1.5~1.8 g/m2，-5至-4 d）。
中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(Ⅱ)——移植后白血病复发(完整版)
中国异基因造血干细胞移植治疗血液系统疾病专家共识(H)——移植后白血病复发(完整版)白血病复发是异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)失败的主要原因之一。
国际骨髓移植登记组(CIBMTR)的资料显示，复发在非血缘和同胞相合移植后的死因中分别占33％和47%[1]。
北京大学血液病研究所的资料显示，单倍型和同胞相合移植后的复发相关死亡率在总体人群中分别为15.6％和16.7%[2]，在死因中分别占32％和42%。
移植后一旦复发预后很差，目前治疗选择仍然有限；各移植中心在处理移植后复发方面各自进行了探索。
本共识综合各移植中心的经验和临床研究，并参考国外文献，进行归纳总结，旨在对移植后白血病复发的诊断和处理原则进行推荐。
一、定义和分类根据复发时肿瘤负荷分为血液学复发、细胞遗传学和(或)分子生物学复发；根据肿瘤细胞来源可分为供者型复发和受者型复发；从复发部位上可分为髓内复发、髓外复发和髓内伴髓外复发。
指移植后完全缓解的患者外周血中又出现白血病细胞或骨髓中原始细胞＞5%或出现新的病态造血或髓外白血病细胞浸润。
2•细胞遗传学复发：指移植后已达细胞遗传学完全缓解的患者又出现原有细胞遗传学异常，或性别染色体由完全供者型出现受者一定比例的嵌合(比例界值尚无统一标准，且不等同于白血病细胞的增加)，尚未达到血液学复发的标准。
3•分子生物学复发：是近年硏究的热点指应用流式细胞术(FCM)和(或)聚合酶链反应(PCR)等分子生物学方法检测到特异或非特异分子生物学标志异常或超过一定界值、尚未达到血液学复发的标准。
参见以下微小残留病(MRD)判定标准。
二MRD检测(一)常用MRD检测方法1•染色体：G显带、R显带和(或)荧光原位杂交(FISH)分析证明有白血病细胞或肿瘤细胞特异的染色体易位和融合基因存在是检测MRD的标志技术。
FISH检测MRD的敏感度为10-2〜10-3，佥测结果阳性即表明患者体内有残留白血病细胞。
2・FCM:FCM检测的MRD为白血病相关免疫表型(LAIP)感度达10-4左右。
异基因造血干细胞移植后免疫重建的研究进展
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急性髓性白血病患者异基因造血干细胞移植后早期T细胞免疫重建的研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：吴秀丽李扬秋朱康儿, 杨力建陈少华, 卢育洪陈洁, 刘启发【摘要】目的: 监测急性髓性白血病(AML)患者接受异基因造血干细胞移植(allo HSCT)后外周血中的T细胞受体重排删除环(TRECs)水平, 了解移植后早期的T细胞免疫重建情况。
方法: AML患者15例分别在allo HSCT前以及allo HSCT后每隔2周收集外周血, 采用实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMNCs)中的TRECs水平; 7例年龄相近的正常人外周血样本作为对照。
流式检测CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的阳性率。
结果: allo HSCT组移植前的TRECs 平均拷贝数为(1.42±1.51)拷贝/1000 PBMNCs, 明显低于正常组的(3.03±0.45)拷贝/1000 PBMNCs水平; 移植后第12周的TRECs平均拷贝数为(1.67±1.93)拷贝/1000 PBMNCs, 与正常相比仍然较低。
移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主, 而外周血TRECs水平在allo HSCT后4周左右出现短暂地升高趋势, 随后又下降, 至allo HSCT 8周后才开始稳步上升。
有急性移植物抗宿主病(aGVHD)病史的移植患者的外周血TRECs水平显著降低, 明显低于无aGVHD病史移植患者的外周血TRECs水平。
3例移植后早期复发的患者的外周血TRECs水平降至基线水平或检测不到。
结论: 不同个体T细胞免疫重建时间存在差异; AML患者在allo HSCT后早期(90 d内)的胸腺输出功能仍处于恢复阶段, 移植后4周内的免疫重建仍以来源于供者细胞的外周扩增为主; 外周血TRECs水平可能与AML患者allo HSCT后病情的发展、转归有关。
【关键词】造血干细胞移植, 异基因; T细胞受体重排删除环; 免疫重建异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo HSCT)是目前治疗急性髓性白血病(acute myelogenous leukemia, AML)等恶性血液病的有效方法之一, 已广泛应用于临床。
造血干细胞移植后造血功能的全面重建主要包括两个方面, 即造血细胞数量和功能的恢复, 后者主要是指免疫功能重建。
临床上往往将中性粒细胞和血小板的恢复作为造血恢复的指标, 容易忽视免疫功能的恢复。
免疫功能重建现在被认为是评价移植疗效的重要因素之一, allo HSCT后重建T细胞特异性免疫功能, 需要来源于胸腺依赖途径所产生的初始T细胞, 即经胸腺发育而输出的na ve细胞, 而目前能够作为na ve T细胞的标志的是T细胞受体删除DNA环(T cell receptor excision DNA circles, TRECs)[1-3]。
为了解AML患者接受allo HSCT后早期的T细胞免疫重建情况, 我们对其胸腺近期输出功能(外周血TRECs水平)进行了监测, 并对外周血CD45RA+/CD4+、 CD45RO+/CD4+及CD45RA+/CD8+细胞亚群进行了流式细胞术分析。
1 对象和方法1.1 对象接受allo HSCT治疗的AML患者15(男13, 女2)例, 年龄18～56(中位年龄35.7)岁, 其中M2 5例, M3 2例, M4 5例, M5 3例; 供者为HLA位点完全相合同胞或无关供者; 采用联合氟达拉宾的减量清髓预处理方案; 移植后受者全部植活(中性粒细胞连续 3 d ≥0.5×109/L为粒细胞植活, 血小板连续7 d≥20×109/L为血小板植活), 所有受者移植后均为完全供受者嵌合体; 所有患者allo HSCT后临床上未采用改变细胞亚群数量的特殊治疗方案, 并均告知同意及医院伦理委员会同意。
分别于移植前、移植后每间隔2周收集患者外周血样本; 同时收集7例与移植组年龄相近的正常人(均为男性)外周血样本作为对照, 年龄17～48(中位年龄31.6)岁。
1.2 方法1.2.1 流式细胞术检测CD45分子表达和DNA提取按常规方法收集各样本的外周血单个核细胞(PBMNCs), 计数后一部分细胞用于免疫荧光标记(鼠抗人CD4+、 CD8+、 CD45RA、 CD45RO mAb, Fermentas), 利用流式细胞术进行CD45RA+/CD4+、 CD45RO+/CD4+及CD45RA+/CD8+细胞亚群阳性率的检测; 剩余细胞提取DNA(QIAprep Spin Miniprep Kit, QIAgen), 并用紫外分光光度计检测DNA的浓度及纯度。
1.2.2 引物设计从T细胞受体(TCR)δ基因组序列(ACCESSION AE000661)中于δRec基因片段的下游设计一下游引物(T1)和在ψJα的上游设计一上游引物(T2)[2], 引物的方向恰好与一般的PCR引物相反(所检测的是δRec和ψJα的两个基因片段删除后重组形成的环形DNA, 即TRECs), 并在该扩增片段中间设一荧光素标记探针(T3); 选择RAG2基因作为细胞定量对照: 分别在RAG2基因组序列(ACCESSION M94633)中设计一对引物(R1和R2)及一荧光素标记探针(R3)。
引物和探针由德国柏林TIB生物公司合成。
1.2.3 RAG2TREC标准品的构建利用两对引物分别扩增所需的RAG2和TRECs的基因片段, 经序列分析证实后分别将其连接到TA载体上(TOPO TA Cloning Kit, Invitrogen), 转入感受态细菌扩增, 抽提、纯化质粒后再经酶切、 PCR和测序证实目的基因片段的准确性; 用凝胶电泳和紫外分光光度计检测质粒的浓度及纯度, 根据质粒分子量换算为拷贝数, 稀释标准质粒, 将其调整为梯度浓度: 107、106、 105、 104、 103、 102和10拷贝/2 μL。
1.2.4 实时定量PCR 每一标本分别检测2次RAG2和2次TRECs, 总反应体积为25 μL, 其中含标准品2 μL或约100 ng基因组DNA, 0.5 μmoL/L引物, 0.2 mmoL/L dNTP, 1.5 U Ampli TaqGold(ABI, USA), 0.1 μmoL/L的6 FAM TAMRA探针和PCR缓冲液(含4 mmoL/L MgCl2)。
在95℃ 10 min变性后, 共进行45个循环扩增, 每一循环包括95℃30 s和64℃ 1 min。
反应在MJ Opticon Monitor(BIO RAD)中进行。
反应分别设标准组(7个浓度)、阳性对照组(两个平行反应)、阴性对照(两个平行反应)及样品组。
1.3 统计学分析根据所检测样本中RAG2的实测数值来确定所检测样本中所含的细胞数(每个细胞含2个RAG2拷贝), 然后计算每1000个PBMNCs中所含的TRECs拷贝数, 计算公式为: n=2×1000×[TRECs(1)+TRECs(2)]/[RAG2(1)+RAG2(2)]; 使用SPSS 13.0软件包进行统计学处理, 采用非参数检验的Mann Whitney U检验进行组间比较; 各组样本中的平均TRECs水平以x±s表示。
2 结果2.1 allo HSCT后CD45RA+细胞亚群及CD45RO+细胞亚群阳性率的变化 allo HSCT后各时间组的CD45RA+细胞亚群和CD45RO+细胞亚群的平均阳性率显示出一定的变化趋势(图1)。
CD45RO+/CD4+、CD45RA+/CD8+细胞亚群的阳性率在移植后第4周时均明显较低, 随后逐步上升, 8～12周又出现下降趋势; CD45RA+/CD4+细胞亚群的阳性率在移植后12周内均维持在较低水平; 移植后8周内以CD45RO+/CD4+细胞的扩增为主。
图1 allo HSCT后90 d内CD45RA+细胞亚群及CD45RO+细胞亚群阳性率变化2.2 实时定量PCR的敏感性、重复性和特异性最大敏感性可达到10个拷贝/μL, 且1×107～1×102拷贝/μL的重复性良好; 模板在10个拷贝数以下时结果不稳定, 故将检出限为10拷贝数以上; 经电泳可见到符合目的片段大小的条带(RAG2为245 bp, TRECs为390 bp)。
标准曲线的斜率(slope)均为-0.28, 系列稀释的标准品浓度与循环阈值具有较好的相关关系(r=0.996, 0.998)。
无模板对照未见任何扩增。
2.3 allo HSCT后外周血TRECs水平的变化 PBMNCs中的TRECs水平有着较大的个体差异。
正常对照组外周血中的TRECs平均拷贝数为(3.03±0.45拷贝/1000 PBMNCs); allo HSCT组移植前的TRECs 平均拷贝数为(1.42±1.51拷贝/1000 PBMNCs), 明显低于正常组(Mann Whitney U检验, P0.05)。
移植后TRECs水平的变化也有较大个体差异, 移植后各时间组的平均TRECs水平存在着一定的变化趋势, 其中7例allo HSCT后90 d内未发生GVHD的患者的TRECs 水平变化见图2。
在allo HSCT后4周左右, 外周血TRECs水平出现短暂的升高趋势, 但维持时间不长, 随后又复下降; 在allo HSCT后第8周时, 外周血TRECs水平降低最为明显, 接近或达到基线水平; 之后TRECs水平开始缓慢平稳上升, 移植后第12周的TRECs平均拷贝数为(1.67±1.93拷贝/1000 PBMNCs), 虽然稍高于移植前水平, 且有1例患者的TRECs水平已经达到甚至超过正常人平均水平, 但总体与正常对照组相比仍然较低(Mann Whitney U检验, P0.05)。
allo HSCT后有急性移植物抗宿主病(acute graft vs host disease, aGVHD)病史的移植患者(3例发生肠道aGVHD, 2例发生皮肤aGVHD)外周血TRECs水平显著降低(0.07±0.14拷贝/1000 PBMNCs), 明显低于同时期无急性GVHD病史的移植患者外周血TRECs 水平(0.82±1.12拷贝/1000 PBMNCs), 甚至趋于基线水平(Mann Whitney U检验, P0.05)。