植物愈伤组织诱导实验
绿豆芽愈伤组织诱导培养实验报告
绿⾖芽愈伤组织诱导培养实验报告⽣物⼯程中游技术实验--植物组织、器官培养的研究学校：学院：班级：姓名：学号：绿⾖芽愈伤组织诱导培养实验【摘要】本实验以MS＋2,4-D为基本培养基,添加NAA或6-BA,对绿⾖芽材料进⾏体外培养,诱导形成愈伤组织。
结果表明,在⼀定浓度范围内,NAA和6-BA对绿⾖芽的诱导有促进作⽤。
不同激素组合培养下，绿⾖芽外植体形成愈伤组织的类型不同,其⾊泽、细胞的形态结构显著不同。
其中，细胞分裂素和⽣长素的组合诱导芽及芽的增殖效果最好，MS+6-BA(6mg/L)+NAA(0.4mg/L)培养基最适。
【关键词】绿⾖芽；组织培养；愈伤组织；6-BA；2,4-D；NAA;全能性⼀、前⾔细胞⼯程(Cell engineering) 是指应⽤现代细胞⽣物学、发育⽣物学、遗传学和分⼦⽣物学的理论与⽅法，按照⼈们的需要和设计，在细胞⽔平上的遗传操作，重组细胞的结构和内含物，以改变⽣物的结构和功能，即通过细胞融合、核质移植、染⾊体或基因移植以及组织和细胞培养等⽅法，快速繁殖和培养出⼈们所需要的新物种的⽣物⼯程技术。
其常⽤技术⼿段有植物组织培养，植物体细胞杂交、动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。
根据细胞类型的不同，可以把细胞⼯程分为植物细胞⼯程和动物细胞⼯程两⼤类。
本⽂主要综述细胞⼯程中植物细胞⼯程的植物组织培养这⼀技术⼿段。
植物组织培养技术的应⽤范围包括快速繁殖、培育⽆病毒植物，通过⼤规模的植物细胞培养来⽣产药物、⾷品添加剂、⾹料、⾊素和杀⾍剂等。
植物组织培养，诱导愈伤组织形成和形态发⽣，使⼀个离体的细胞、⼀块组织或⼀个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
在植物组织培养中，由于植物细胞具有全能性,即植物的体细胞具有母体植株全部遗传信息并会发育成为完整的个体。
因⽽,每⼀个植物细胞可以像胚胎细胞⼀样,经离体培养再⽣成植株。
随着细胞⼯程技术的不断发展,植物细胞和组织培养这⼀细胞⼯程技术也⽆例外地得到发展,⽬前已在许多植物上,特别是在农林⽣产实践中得到了⼴泛应⽤。
花生种胚愈伤组织的诱导
不同浓度6-BA对花生种胚愈伤组织的诱导摘要：本实验以MS作为基本培养基，保持其他条件一致，设置浓度分别为1.0mg/L、2.0mg/L 的6-BA对花生种胚进行愈伤组织的诱导，实验结果表明，2.0mg/L浓度的6-BA更利于花生种胚的诱导。
关键词：花生种胚；愈伤组织；激素花生(Arachis hypogaea L.) 又名落花生，属蝶形花科落花生属一年生草本植物。
花生的果实为荚果，形状有蚕茧形，串珠形和曲棍行。
蚕茧形的荚果多具有种子2粒，串珠形和曲棍形的荚果，一般都具有3粒以上。
花生果具有很高的营养价值，内含丰富的脂肪和蛋白质。
据测定花生果内脂肪含量为44%-45%，蛋白质含量为24-36%，含糖量为20%左右。
并含有硫胺素、核黄素、尼克酸等多种维生素。
特别是含有人体必须的氨基酸，有促进脑细胞发育，增强记忆的功能。
现在全国各地均有种植，主要分布于辽宁、山东、河北、河南、江苏、福建、广东、广西、贵州、四川等地区。
花生组织培养至今已有40多年的历史，但由于豆科植物的再生难度较大，还有种属的特性，研究进展较缓慢,特别是高效、稳定、连续获得再生植株的问题一直没有得到很好的解决[1]。
花生不同外植体通过器官发生和植株再生，国内外已有很多成功的报导。
但在国内报道的试验中，体胚诱导率极低[2]，从愈伤组织上剖离的体胚再生成花生苗的频率，国外报道明显不同，从低于1%到92%。
本实验以花生种胚为材料，对花生进行愈伤组织的诱导，了解花生愈伤组织诱导的培养条件，学习并掌握花生种胚愈伤组织的诱导方法，筛选出适合花生种胚诱导的激素配比。
1 材料与方法1.1材料供试花生由四川农业大学农学院植物生理实验室提供。
1.2方法1.2.1材料处理选取健壮、无损伤的花生种子，在超净工作台上用75%酒精浸泡10s，无菌水冲洗3 次，0.1%的升汞浸泡8 min，无菌水冲洗4 次。
备用。
1.2.2培养基配制按照表1配制培养基，将培养基高温灭菌后备用。
植物器官培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解植物组织培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，包括消毒、接种等。
3. 学习植物器官培养的过程，包括愈伤组织的诱导、分化以及再生植株的形成。
4. 观察并分析植物器官培养过程中的各种现象，加深对植物生长发育机制的理解。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过无菌操作将植物器官、组织或细胞在人工控制的培养条件下进行培养，使其生长发育成完整的植株。
实验过程中，植物激素的添加和培养条件的调控对愈伤组织的形成和器官分化起着关键作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小麦种子、香蕉叶片、胡萝卜块根。
2. 试剂：70%乙醇、氯化汞、MS培养基、2,4-D、6-BA、蔗糖、琼脂等。
四、实验方法与步骤1. 无菌操作：将实验材料用70%乙醇和氯化汞消毒后，用无菌水冲洗干净，放置在超净工作台上进行接种。
2. 愈伤组织诱导：a. 将小麦种子接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
b. 将香蕉叶片切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
c. 将胡萝卜块根切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
3. 愈伤组织分化：a. 当愈伤组织形成后，调整培养基中激素比例，诱导愈伤组织分化成根和芽。
b. 将分化出的芽和根接种于新的培养基中，继续培养。
4. 再生植株形成：a. 当芽和根生长到一定程度后，将其移植到土壤中，培养成完整的植株。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导：实验结果表明，在不同植物材料中，愈伤组织的诱导效果不同。
小麦种子和香蕉叶片的愈伤组织诱导效果较好，而胡萝卜块根的愈伤组织诱导效果较差。
2. 愈伤组织分化：在调整培养基中激素比例后，愈伤组织分化成根和芽。
小麦种子愈伤组织分化出较多的根和芽，香蕉叶片愈伤组织分化出较多的芽，而胡萝卜块根愈伤组织分化出的根和芽较少。
3. 再生植株形成：将分化出的芽和根移植到土壤中，大部分植株成功生长。
愈伤组织的诱导和培养
班级：植物092 姓名：徐炜佳学号：0901080223愈伤组织的诱导和培养一、实验目的及意义植物愈伤组织的诱导和培养在植物科学的基础研究和应用研究中都有重要的意义。
通过本次实验，可以初步掌握植物外植体材料消毒、接种的无菌操作技术，愈伤组织的诱导方法和愈伤组织继代培养的方法。
二、实验原理植物组织与细胞培养是应用无菌操作的方法培养离体的植物器官、组织或细胞的过程。
如果组织培养使用的植物材料是带菌的，在接种前就必须选择适当的消毒剂对植物外植体进行表面消毒，获得无菌材料进行组织培养，这是取得植物组织培养，成功的基本前提和重要保证。
由于植物细胞具有全能性，外植体在合适的培养基上通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团——愈伤组织（callus）。
植物生长调节剂如2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）等是诱导外植体形成遇上组织的重要因素。
三、实验仪器与药品超净工作台，酒精灯，镊子，剪刀，解剖刀，75%乙醇，酒精消毒棉材料：烟草无菌苗，甘薯无菌苗四、实验步骤1.按下表分别配制培养基将配置的四种培养基分别分装入20个培养瓶，高温灭菌后水平放置凝固2.接种前，将实验所需器具放入超净工作台，打开紫外灯灭菌20~30min，关闭紫外灯，开启通风开关。
洗手后用酒精喷洒消毒手、手臂、实验材料及培养基外部等进入超净工作台的部分。
进入超净工作台，用酒精棉擦拭台面（手勿伸出工作台），台面完全风干后点燃酒精灯。
3.接种开始时，将镊子及手术刀在酒精中浸泡，并在酒精灯外焰上烧炽片刻，充分冷却。
取幼嫩的烟草（甘薯）叶片，用手术刀切割成小片，再用镊子将其接种至相应的培养基上，每瓶接种3~5片，封口后取出超净工作台，标注姓名、日期、培养基和接种材料。
4.将上述培养材料常温暗培养，每隔7天观察一次，并记录培养情况五、实验结果组织长芽，而当生长素含量大于细胞分裂素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定根，也可形成愈伤组织，细胞色素沉淀情况严重；NAA为植物生长素，6-BA为细胞分裂素，促进扦插生根，而当细胞分裂素含量大于生长素含量时，二者共同作用在室温下可诱导外植体生成不定芽，此次实验由于温度非形成愈伤组织的最适温度，所以未形成完整的愈伤组织细胞团。
实验2-3 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
（2）植物材料的表面灭菌和接种
①操作人员洗手消毒
②装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
③将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒， 取出用无菌水冲洗干净。 ④倒入消毒剂（ 0.1%HgCl2 ）并计时
⑤到预定时间（20分钟）后倒出消毒液并 用无菌水清洗干净。
⑥将材料切块后接种到诱导培养基上。
6 实验流程
（1）准备工作
① 外植体表面灭菌前的准备工作 a 接种室的清洁和消毒； b 超净工作台的开机和消毒；
c 消毒溶液、无菌水、装等的准备。
② 实验材料的准备
a 准备新鲜健康的胡萝卜肉质直根作实验 材料；
b 实验材料的修整、刷洗、冲洗； c 用洗衣粉水或肥皂水浸洗后再用自来水 冲净。
（2）胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制
配方：MS基本培养基＋ 2mg/L NAA＋ 0.1mg/L 6-BA＋200mg/L水解酪蛋白＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖 配制流程：同胡萝卜愈伤组织诱导培养基 的配制
作业
详细写出胡萝卜愈伤组织诱导培养的操作 步骤。
实验2-2 胡萝卜愈伤组织的诱导
1 实验目的
通过本次实验，使同学能够熟练掌握外植 体的表面消毒技术和无菌操作技术。 2 实验原理 将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒 后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基 上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。
3 主要实验用具和仪器
用具：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、 枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养 皿、酒精灯等。 仪器：超净工作台、恒温培养箱 4 药品和试剂 胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75 ％酒精、0.1%HgCl2。 5 实验材料：胡萝卜肉质直根
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验报告实验目的：本实验旨在探究水稻愈伤组织的诱导方法，为将来的水稻遗传改造研究提供参考。
实验材料和仪器：1. 材料：水稻种子、MS培养基、植物生长调节剂2,4-D、生长调节剂TDZ、无菌器具、琼脂、无菌操作室。
2. 仪器：无菌操作台、显微镜、实验室平衡器等。
实验步骤：1. 生物材料准备：选取幼苗期生长良好、品种鲜明的水稻种子作为材料。
将水稻种子进行表面消毒，处理方法为分别用70%的酒精和5%的次氯酸钠(1:1)混合消毒3-5分钟，然后充分清洗。
2. 建立组织培养体系：将消毒后的水稻种子在无菌操作台上进行分离培养。
将种子取出后，从胚乳中取出胚轴，用剪刀消毒后放入含有MS培养基的无菌培养瓶中，置于无菌操作室中进行培养。
在35-37°C下连续培养3-5天。
3. 筛选愈伤组织：将培养2-3天的胚轴等植物试管苗等组织放置在含有不同浓度的2,4-D和TDZ的培养基中，培养10-15天。
筛选出生长具有愈伤能力的组织，采用显微镜等方法进行观察，并进行相应的分离和培养。
4. 愈伤组织的维持和复壮：将筛选出的愈伤组织维持在含有2,4-D和TDZ的培养基中，定期进行转移或分离。
当愈伤组织增生至一定程度后，将其转移到不含激素的培养基中，进行复壮。
实验结果：在实验过程中，我们选择了4个不同浓度的2,4-D和TDZ进行培养，筛选出了愈伤组织，并进行了维持、修复工作。
经过5次转移和增殖培养，我们成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
结论：本实验采用的方法可行，成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
本研究为今后的水稻遗传改造和抗性育种提供了良好的基础。
草莓茎尖愈伤组织的诱导与增殖培养实验报告册
草莓茎尖愈伤组织的诱导与增殖培养实验报告册1、培养程序和培养基5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖，大小为0.3--0.4mm，作为组织培养的外植体。
用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS，附加6-BA 0.5mg/L，NAA 0.2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉6.5g/L，pH 值调至5.8--6.0。
在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS 培养基附加6-BA 0.5mg/L 、NAA0.01mg/L。
扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块，转入继代培养基。
在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。
诱导生根培养基用1/2MS 附加。
经查文献得知0.1mg/L浓度的IBA处理的生根率最高，为100%，平均根条数为2.4条。
不加TBA及IBA浓度超过0.2mg/L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。
2、操作技术要点及培养条件⑴)灭菌与接种预处理―为了灭菌彻底，常把接种材料先进行湿润处理，采用的是75%的酒精，湿润的时间为半分钟至1分钟。
灭菌处理在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。
我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%)，浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉)，用其饱和上清液，浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20 分钟;新洁尔灭5--10%水溶液，浸泡10--15分钟;升汞0. 1%水溶液，浸泡8--10分钟。
其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，以致影响培养效果。
升汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。
因此，在草莓组织培养中，如把握好时间，升汞是应用较多的灭菌剂。
灭菌后的接种材料，要用无菌水充分清洗，通常要换水 3--5次。
接种以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养，所接种的茎尖材料很小，在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点，并使用固体培养基比较适宜，接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心细胞工程实验实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养实验摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。
关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。
同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。
1.材料和方法1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。
1.2方法：1.2.1愈伤组织的诱导培养（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8（2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况1.2.2继代培养从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师资料
植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师资料植物愈伤组织诱导培养实验实验目的：1.掌握植物愈伤组织的诱导和培养技术；2.了解植物生长素和植物生长调节因子的作用；3.实践动手能力，培养分析问题、解决实际问题的能力。
实验步骤：1.实验材料种子：芸苔、小麦、玉米等试剂：琼脂、SD综合培养基、激素溶液、酒精灯、移液管等2.种子的表面消毒取适量的芸苔种子，用70%的酒精灯烧消毒。
将种子放入无菌蒸馏水中浸泡20分钟，再用三次含酸性消毒液（NaClO）洗涤。
洗涤后，用无菌蒸馏水洗三次，并将水倒掉。
将种子放在干净、无菌的滤纸上晾干。
3.愈伤组织诱导3.1 试剂配制将SD综合培养基和激素溶液按体积比例配制成诱导培养基。
激素溶液的配方参考如下：IAA：千叶素：6-BA的比例为 10：1：1，浓度为0.108 mg/L；3.2 培养陈列室准备工作实验室必须具有无菌灯、搅拌器、制冷箱或培养箱等基本的实验设备。
实验前清洗设备，使用高压蒸汽或酒精灯等方式灭菌。
在无菌条件下制备琼脂、移液管、培养瓶等。
在实验操作台上，用70%的酒精清洗双手，并用无菌纸巾擦拭干净。
3.3 培养基的制作制好的培养基分装到15ml的培养瓶中。
琼脂用70%酒精擦拭干净，均匀铺在实验平台上，用于接种组织。
3.4 组织接种将种子放在培养基上，用无菌铁丝按一定距离排列成一排。
取出种子，切成0.5-1cm的暴露在外的子叶或幼芽，然后在接种组织区域按照一定距离进行均匀排列。
将培养瓶密封，并放在指定的温度下生长。
4．实验结果的处理和分析4.1 愈伤组织的诱导情况观察家哈的发育情况，如出现愈伤组织的形成，记录其在构型，大小等。
4.2 理化指标的测定在诱导完成后的期间，测定愈伤组织中的蛋白质含量，葡萄糖含量，游离氨基酸含量等指标。
注意事项：1.实验过程中要注意操作技巧，避免污染；2.在培养过程中，要注意温度和光照的控制；3.进行实验时，要做好实验记录和实验数据分析工作；4.实验后，要注意实验设备的清洁和归档。
植物愈伤组织诱导实验
实验一植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。
2、培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台原理：本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境三、仪器试剂培养皿及培养架、光照培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、解剖刀、弯头镊子、剪子、100ml烧杯、培养皿（或不锈钢浅盘）、封口膜、棉线、橡皮筋、次氯酸钠（或HgCl2）、MS 培养基全部试剂、植物激素及生长调节物质、无水乙醇、工业酒精、胡萝卜四、实验步骤（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用自来水冲洗后,用酒精棉擦拭欲取材部位表面, 或于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml烧杯（或试剂瓶）中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散，以绿豆为材料时，将绿豆纵切或横切，去皮后分别接种。
愈伤组织实验报告
一、实验目的1. 掌握植物组织培养技术的基本操作流程。
2. 熟悉愈伤组织的诱导方法及再分化过程。
3. 学习植物激素在愈伤组织形成与再分化中的作用。
4. 了解植物细胞的全能性及组织培养技术在植物育种中的应用。
二、实验原理植物组织培养技术是将植物器官、组织或细胞在人工条件下进行无菌培养，使其在适宜的培养环境中生长、分化，最终形成完整植株的过程。
愈伤组织是植物组织培养过程中的一个重要阶段，它是由已经分化的细胞脱分化形成的无定形细胞团。
通过诱导愈伤组织，可以进一步分化为根、茎、叶等器官，实现植物繁殖和育种。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段。
2. 试剂：无菌水、无菌滤纸、70%乙醇、5%次氯酸钠、琼脂、蔗糖、硝酸钙、硝酸钾、硝酸铵、磷酸二氢钾、生长素、细胞分裂素、琼脂酶、滤纸等。
四、实验步骤1. 材料预处理（1）将水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段分别用70%乙醇消毒30秒，再用5%次氯酸钠消毒5分钟，最后用无菌水清洗3次。
（2）将消毒后的材料用无菌滤纸吸干水分。
2. 愈伤组织诱导（1）将预处理后的材料切成约1cm×1cm的小块，放入含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
（2）将培养皿放入培养箱中，在适宜的温度和光照条件下培养。
3. 愈伤组织再分化（1）将愈伤组织转移到含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中。
（2）在适宜的温度和光照条件下培养，观察愈伤组织分化为根、茎、叶等器官的情况。
4. 数据记录与分析（1）观察并记录愈伤组织的生长情况，包括生长速度、愈伤组织颜色、形态等。
（2）观察并记录愈伤组织再分化为根、茎、叶等器官的情况，包括器官形态、生长速度等。
（3）分析不同植物激素浓度对愈伤组织形成与再分化的影响。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导实验结果表明，水稻叶片、玉米叶片、胡萝卜根段在含有不同浓度生长素和细胞分裂素的MS培养基中均能诱导出愈伤组织。
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验报告
实验目的：
通过诱导方法获取水稻愈伤组织，为后续的基因转化等实验打下基础。
实验材料和设备：
水稻种子、MS培养基、2,4-D溶液、NaClO溶液、无菌操作
器材、显微镜等。
实验步骤：
1.种子消毒：将水稻种子放入1% NaClO溶液中浸泡10分钟，再用去离子水洗净后，放进无菌操作室中。
2.种子发芽：将消毒后的种子放进含有营养的MS培养基中，
在25℃下进行光照培育。
3.愈伤组织诱导：将发芽后的幼苗从培养基中取出，用无菌水
清洗。
将茎部和叶片等不同部位的组织嫁接在含有2,4-D溶液
的MS培养基上，培养在25℃下、光照下，观察诱导组织的
生长情况。
4.分离愈伤组织：当组织生长到一定大小后，用无菌操作器材
将组织用无菌剪刀分离下来。
5.愈伤组织培养：将分离出的愈伤组织放入含有NAA、BA、MS培养基中进行培养。
结果分析：
在诱导的茎部和叶片等不同部位，均出现了白色愈伤组织的诱导生长。
经过分离和培养，得到了纯化的愈伤组织。
通过显微镜观察发现，愈伤组织的细胞间隙变窄，胞间质增多，中心细胞数量增多，细胞核增大，一些细胞内的小器官也出现转化现象。
结论：
通过2,4-D溶液的诱导方法，可以在水稻幼苗的不同部位诱导出白色愈伤组织，愈伤组织的分离和培养也取得了成功。
实验结果为后续的基因转化、基因工程等实验提供了基础。
细胞工程实验-植物愈伤组织诱导培养基的配制
实验一植物愈伤组织诱导培养基的配制一、实验目的掌握培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术。
二、实验原理培养基是离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供的近似生物体内生存的营养环境。
完善的植物培养基配方为水、无机营养成分、有机营养成分、生长调节物质还有琼脂。
MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
三、主要仪器与试剂1.实验仪器：搪瓷杯、玻璃棒、量筒、移液管、加样器、移液枪、电子天平、药匙、称量纸、电热炉、pH试纸、三角培养瓶、试剂瓶、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、镊子、解剖刀2.实验试剂：琼脂、蔗糖、各类MS母液、2,4-D、HCl、NaOH、三蒸水四、实验步骤1.按照配方配制培养基时,先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入搪瓷杯中，并加入1mL2，4-D后，加入三蒸水至大约400ml。
2. 称取15g蔗糖加入搪瓷杯中，调节pH至5.7-5.8。
3.加入琼脂4.5g，加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源，分装在100ml的三角培养瓶中拧紧瓶盖。
4.取一个试剂瓶，加入适量去离子水。
5.将配置好的培养基、装有去离子水的试剂瓶以及一个空试剂瓶、培养皿、镊子、解剖刀放入高压蒸汽灭菌锅中灭菌，备用。
五、实验结果MS培养基配制完成。
植物组织培养前期准备完成。
六、思考题1.培养基配制应注意哪些问题？①注意琼脂和蔗糖的称量②一定要添加2,4-D③配制MS培养基时应该注意调节pH至5.7~5.8，因为过酸培养基不易凝固，过碱培养基会变硬，同时过酸或过碱还会影响到培养材料的生长。
植物愈伤组织诱导培养实验指导--李老师
植物组织培养基的配制与植物愈伤组织诱导一、实验目的；通过植物组织培养基和植物愈伤组织诱导实验的学习和训练，使学生了解植物组织培养的基本原理和操作技术，初步掌握MS固体培养基制备方法、外植体的常规灭菌技术以及愈伤组织诱导方法。
二、实验原理：根据植物细胞全能性原理，培养植物材料。
即在无菌条件下，将植物的器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）放在人工培养基上进行培养，通过细胞分裂，形成一团薄壁细胞，即愈伤组织。
愈伤组织可以在适宜的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下进行再分化，重新产生出植物的各种器官和组织，进而发育成完整的植株。
三、实验内容实验包括以下3部分内容：实验1-1、植物组织培养基母液的配制和保存实验1-2、MS培养基的配制与灭菌实验1-3、胡萝卜愈伤组织的诱导实验1-1 植物组织培养基母液的配制和保存1、目的要求学习植物组织培养基母液的配制方法，为培养基的配制做准备。
2、基本原理植物培养基是植物离体培养的组织或细胞赖以生存的营养基质，是为离体培养材料提供近似活体生存的营养环境，主要包括水、大量元素、微量元素、铁盐、有机复合物、糖、凝固剂和植物生长调节等物质。
在配制培养基前，为了使用方便和用量准确，常常将培养基成分首先配制成比实际培养基浓度大若干倍的母液，然后在配制培养基时，再根据所需浓度，按比例稀释。
本实验以MS培养基为例，学习培养基母液的配制。
MS培养基母液可分为：MS大量元素母液、MS微量元素母液、MS铁盐母液和MS有机化合物母液等。
另外，还要配制生长激素母液，在不同类型的培养基中使用。
3、实验仪器设备和试剂3.1仪器、用具分析天平、酸度计（或pH试纸）、冰箱、药匙、玻棒、称量纸、滴管、洗瓶、记号笔、烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、500ml、1000ml）、磨口试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液抢、微波炉等。
3.2试剂（1）95%乙醇、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
植物外植体消毒、接种及愈伤组织(芽)诱导
常用消毒剂的区别：
植物细胞工程原理与技术实验
仪器、器具、试剂等：
超净工作台、养基、无菌水、镊子、培养皿、大烧杯、一块脱脂棉、酒 精灯、喷壶、火柴、2%次氯酸钠、75%乙醇、95%乙醇,无菌滤纸等
植物细胞工程原理与技术实验
操作步骤：
1 培养基、用具灭菌（实验一已完成） 2 将所用物品放出超净台中（除实验材料外），打开超净工作台的紫外灯，照射
实验二 植物外植体消毒、接种及愈伤组织（芽）诱导
• 实验目的： • 通过亲自操作掌握外植体接种的无菌操作技术。 • 领会无菌培养对实验材料消毒、接种的要求。 • 学习观察记载的方法。
植物细胞工程原理与技术实验
实验原理：
外植体消毒：外植体接种前要保证外植体处于无菌状态，因此，对于带菌的植物 材料，要进行植物外植体表面消毒。消毒既要使材料表面细菌除去，又要保证植 物材料的活性，这是取得组织培养成功的最基本的前提和重要保证。 接种：已消毒的外植体经无菌操作，接到培养基上，这一过程叫做接种。
愈伤组织诱导：根据植物细胞的全能性，即分化细胞保留着全部的基因组，具有生 长发育所需的全部遗传信息，具有在适宜条件下发育成完整个体的潜能。
外植体在合适的培养基上，通过脱分化，形成一种能迅速增殖的无特定结构的 功能的细胞团------愈伤组织。
影响外植体形成愈伤组织和愈伤组织分化的重要因素是植物生长调节剂。
实验中的注意事项 ：
75%乙醇30s
植物细胞工程原理与技术实验
实验中的注意事项 ：
次氯酸钠10min
旋转
无菌水洗4-5次
取出成熟胚
打开培养基
植物细胞工程原理与技术实验
接种
封口并标记
观察记录：
胡萝卜愈伤组织的诱导培养
愈伤组织诱导的培养基与愈伤组织扩大培养所需的培养基不同，而愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源和种类，而是培养条件，所以培养基的成分对于愈伤组织的产生与否有很重要的作用。
与其他同学的比较，发现胡萝卜的块根大的，愈伤组织形成情况较好。
在愈伤组织继代培养中，结果不理想分析其原因可能如下：
（1）由于扎培养瓶的线较粗，而瓶口较小，扎线不紧，导致培养过程中染菌。
(2)在接种过程中，操作方式不够规范，因为在实验中，我发现自己会不自主的将双手太过靠近培养基，将细菌带到培养基中。致使在接种过程中染菌。
（2）胡萝卜愈伤组织的诱导
①实验材料的准备：a准备新鲜健康的胡萝卜肉质直根作实验材料；b实验材料的修整、刷洗、冲洗；c用洗衣粉水或肥皂水浸洗后再用自来水冲净。
2植物材料的表面灭菌和接种
a、操作人员洗手消毒
b、装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
c、将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒，取出用无菌水冲洗干净。
②配制流程：同胡萝卜愈伤组织诱导培养基的配制
（4）胡萝卜愈伤组织的继代培养
将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体上产生的愈伤组织剥离转接到愈伤组织继代诱导培养基上，放置在25℃全黑暗条件下进行愈伤组织的增值培养，以获得足够的愈伤组织，作为后续实验的实验材料。
注意事项：
在操作过程中，要严谨细致；
（2）实验药品和试剂
MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH
2,4-D、6-BA、无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2、
培育胡萝卜实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解植物组织培养的基本原理和操作技术。
2. 掌握胡萝卜愈伤组织的诱导、继代增殖和细胞悬浮培养的方法。
3. 熟悉胡萝卜体细胞胚胎发生培养过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜胡萝卜肉质根、MS培养基、植物激素、无菌水、75%酒精、无菌滤纸等。
2. 实验仪器：超净工作台、高压蒸汽灭菌器、电子天平、显微镜、移液枪、培养皿、培养箱等。
三、实验方法1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 将新鲜胡萝卜肉质根洗净，切成小块，用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗3次。
- 将消毒后的胡萝卜小块接种于诱导培养基（MS培养基+2,4-D 1mg/L+6-BA1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察胡萝卜小块的愈伤组织形成情况。
2. 胡萝卜愈伤组织的继代增殖- 将诱导出的愈伤组织切割成小块，接种于继代培养基（MS培养基+2,4-D0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L）中。
- 在无菌条件下进行培养，观察愈伤组织的增殖情况。
3. 胡萝卜细胞悬浮培养- 将继代增殖后的愈伤组织用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（2,4-D 0.1mg/L+6-BA 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于细胞悬浮培养基（MS培养基+2,4-D 0.1mg/L+6-BA0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察细胞悬浮培养的生长情况。
4. 胡萝卜体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养得到的愈伤组织细胞，用无菌水冲洗，剪碎，加入适量MS培养基和植物激素（NAA 0.1mg/L+KT 0.1mg/L）。
- 在无菌条件下进行搅拌，使愈伤组织细胞悬浮。
- 将悬浮细胞接种于体细胞胚胎发生培养基（MS培养基+NAA 0.1mg/L+KT0.1mg/L）中，在无菌条件下进行培养。
- 观察体细胞胚胎发生培养的生长情况。
四、实验结果与分析1. 胡萝卜愈伤组织的诱导- 经过诱导培养，胡萝卜小块表面逐渐出现愈伤组织，愈伤组织呈白色、半透明状，质地较软。
植物愈伤组织诱导培养基的配制
实验一植物愈伤组织诱导培养基的配制一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。
2、培养基的配制，灭菌等基本实验操作技术。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
三、仪器试剂培养皿及培养架、光照培养箱、超净工作台、高压灭菌锅、解剖刀、弯头镊子、剪子、100ml烧杯、培养皿（或不锈钢浅盘）、封口膜、棉线、橡皮筋、次氯酸钠（或HgCb）、MS 培养基全部试剂、植物激素及生长调节物质、无水乙醇、工业酒精、胡萝卜四、实验步骤1、培养基的制备①用于配制培养基的水最好是三蒸水。
②所用的各种化学药品：分析纯级别的试剂，避免药品的交叉污染和混杂。
③配制培养基最方便的方法是预先配制好不同组分的培养基母液，存放在2〜4C冰箱内，使用时按比例稀释配用即可。
①按照配方配制培养基时，先将储存母液按顺序摆放好，根据欲配制的总体积，量取各种不同体积的母液，加入2，4-D（2mg/L），先加三蒸水至大约400ml。
②称取加入蔗糖（浓度3%）,调节pH至。
③加入琼脂（8-9g/L ）加热搅拌溶解，沸腾后立即端离火源（第一个大气泡从缸底上升顶破泡沫层），分装在100ml的三角培养瓶中（一般以容器的1/3〜1/4体积为宜），拧紧瓶盖。
（培养基的pH值直接影响培养物对离子的吸收，过酸或过碱不仅影响到培养材料的生长，而且还影响到琼脂的凝固。
经高压高温灭菌后，由于某些成分的降解或氧化，酸度会增加（pH值一般可降低），因此调整pH值时应加以考虑。
S4实验四 植物叶片愈伤组织的诱导培养(理论)
实验四植物叶片愈伤组织的诱导培养（理论）一、概念愈伤组织（callus）◆自然状况下指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。
◆植物组织培养中，指在人工培养基上由外植体组织增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。
二、植物愈伤组织及形成过程外植体形成愈伤组织，标志着植物组织培养的开始。
1、形态结构◆形状不规则，结构疏松◆有大量的分生中心◆细胞排列毫无次序◆内有大量的细胞间隙◆颜色不一致优良的愈伤组织所具备的特性：A、高度的胚性或再分化能力，以便从愈伤组织得到再生植株B、易散碎，可建立优良的悬浮体系，并可分离出全能性的原生质体C、旺盛的自我增殖能力，可建立大规模的愈伤组织无性系D、经过长期继代保存而不丧失胚性，可进行各种遗传操作2、愈伤组织形成过程A、诱导期◆细胞准备分裂◆合成代谢活动加强◆细胞大小基本不变诱导期时间长短因植物种类、外植体生理状况及外部因素而异B、分裂期◆一分为二，不断增殖◆形态结构与生理生化发生变化主要表现：◆数目迅速增加◆细胞平均鲜重下降◆细胞体积小◆核与核仁增至最大◆ RNA减少，DNA保持不变◆组织总干重、蛋白质与核酸含量增加◆新细胞壁合成极快C、形成期细胞经诱导、分裂形成无序结构愈伤组织的时期。
细胞特点：◆大而不规则、高度液泡化◆无次生细胞壁与胞间连丝◆整个组织松散◆表面以下约5~10个细胞生长中心本时期的愈伤组织是最适合获得单细胞或原生质体的，是建立悬浮体系的最好时期。
D、分化期停止分裂的细胞发生生理代谢变化，导致形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。
本期愈伤组织特点：◆细胞分裂部位由表层转变到深层◆分裂方向由单周分裂变为深层局部分化◆分化组织瘤状结构形成◆维管组织形成瘤状结构的出现使愈伤组织逐渐形成具有维管组织，呈分散的节状结构形成，出现各类组织细胞。
细胞分裂素对促进维管化组织有重要作用3、愈伤组织的继代培养◆长期保存愈伤组织的一种方法◆直径到2~3cm时与外植体分离，单独培养◆选取其生长迅速的部位作继代培养◆分化与再生植株时，应选生长较慢的愈伤组织◆每一继代培养时间取决于其生长速度◆一般可在3~6周继代一次三、植物愈伤组织的遗传变异1、引起异质性的原因A、外植体染色体倍数性与遗传组成不同的细胞经诱导后的分裂B、培养条件引起的不规则性它们常同时发挥作用2、初生愈伤组织接种到培养基上后，细胞核内的变化：A、正常有丝分裂B、先核内复制，后有丝分裂C、先核碎裂，后有丝分裂◆初生愈伤组织的异质细胞群体性反映了外植体中的染色体状况反映了愈伤组织诱导期间核变异的结果◆在诱导中，会出现二倍体、多倍体、单倍体、非整倍体与染色体结构变异体等3、建成愈伤组织◆选择作用的结果◆只有一种主要核型占优势◆培养基成分和培养类型的影响◆异质群体中细胞间的竞争与互作的影响四、影响因子及培养条件1、培养基2、组织原有的倍数性3、培养环境的条件五、愈伤组织的发生方式发生方式：1、器官发生指细胞或愈伤组织通过形成不定芽再生成植株的过程。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
中国海洋大学实验报告
姓名：马宁专业年级：生命基地班2009级学号： 040212009020 课程：细胞工程实验题目：植物愈伤组织诱导实验
一.实验目的
掌握植物愈伤组织诱导的原理和方法。
二.实验原理
1、植物组织培养：
无菌条件下，培养植物的组织、器官以至单个细胞，使其分裂、增殖和分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，脱分化形成愈伤组织，愈伤组织又再分化根和芽等组织和器官。
2、植物激素控制器官分化理论。
3、超净工作台工作原理
本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备
室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境。
三.主要仪器试剂
每人：培养瓶（内含培养基）1个、100mL去离子水1瓶、100mL空试剂瓶1个；
两人：超净台
胡萝卜
无菌器皿、用具的准备：用酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子，灼烧后冷却。
四.实验操作步骤
植物愈伤组织诱导
（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用自来水冲洗后，用流水冲洗片刻后洗净，切段（5cm左右）。
先在70%酒精中浸泡数秒。
（3）将材料放入已灭菌的100 ml烧杯中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10-15分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中或灭菌过的培养皿中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀将胡萝卜切去表皮和中柱，取皮层部分，切成0.5cm3的小块。
弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
（8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。
（9）将接种后的三角瓶，培养于25℃黑暗条件下，20天左右观察，看外植体是否逐渐膨大形成愈伤组织。
愈伤组织的形成标志着接种的外植体已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。
五.实验结果
我自己的胡萝卜褐化了。
以大组总瓶数为样本总数，每瓶为样本个体，统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他现象。
样本总数：26瓶
污染：13瓶
褐化：7瓶
出愈率：23.08% 污染率：50% 褐化率：26.92%
六.思考题
1.以大组总瓶数为样本总数，每瓶为样本个体，统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他现象。
答：在众多污染的培养基中，有的是长满了白色厚厚的丝状菌毛，有的铺遍了绿色的苔藓状的菌落，还有的是一半金色菌落，一半绿色菌落。
我自己的胡萝卜完全褐化了，连培养基的颜色也变成了褐色，胡萝卜和培养基基本快要融合在一起。
另外，培养瓶外壁不够透明，也不便于观察。
统计结果见上。
2.你如何认识无菌操作对植物组织培养的重要性？你认为在具体操作时还应注意那些事项？
答：无菌操作是植物组织培养的基础。
做不到无菌操作，组织培养是根本不可能良好的进行
的。
因为微生物是无处不在的。
会在各种情况下影响实验。
要知道，头发、手上到处都是微生物。
无菌操作时，操作过程一定不能在超净台之外进行。
每一个动作都必须在酒精灯的有效范围内进行。
就像这次的实验，被污染的现象完全是五花八门的。