(五)、血型、交叉配血

标本要求
• 1 除特殊情况外，不在耳垂采血。采血应避 开冻疮、炎症、损伤、水肿等部位。 • 2采血后轻轻挤压血液顺畅流出，避免过度 挤压，混入组织液易致凝固。 • 3进行多项检验时,采血次序为血小板计数、 红细胞计数、血红蛋白测定、白细胞计数、 涂片等。出血时间、凝血时间用APTT、PT 和PLT计数联合取代。
实验五 一、 ABO血型鉴定
1.正向定型 2.反向定型
二、交叉配血
ABO血型鉴定实验原理
• 正定型 根据IgM类特异性血型抗体与红细胞 膜上特异性抗原结合出现凝集反应的原理，用 已知IgM类特异性标准抗A、抗B血清室温下与 被检红细胞在盐水中反应，若出现凝集现象， 表明被检红细胞膜上有血型抗体相对应的抗原， 来判断和鉴定被检者的血型。
毛细血管采血标准操作程序
• 操作步骤 • 1 采血部位成人以左手无名指内侧为宜,6月 以下婴幼儿通常选拇指内侧或足跟两侧采 血。 • 2 轻轻按摩采血部位。 • 3 用棉签蘸取消毒液消毒局部皮肤、待干。
• 4 紧捏刺血部位,使其自然充血。 • 5 用无菌刺针穿刺,动作应迅速,深度2～3mm, 稍加挤压以血液流出为宜。 • 6 用干棉球擦去第一滴血。 • 7 按需要依次采血。 • 8 采血完毕,用干棉球压住伤口,止血3min。
• 反定型
用已知标准A，B，O型红细胞分别与 被检血清反应，若出现凝集，证明被检血 清中存在与该红细胞抗原相对应的抗体。 根据血清中存在的血型抗体和Landsteiner 定律判断和鉴定被检者血型。
试剂器材
• 试剂
– 标准抗A、抗B血型定型试剂 – 5%（体积比）A，B，Ｏ型标准红细胞生理盐 水悬液。 – 生理盐水
4.凝聚胺法 5.微柱凝胶免疫技术
实验原理
盐水介质法（Immediatespin，IS ） 是利用天然IgM类血型抗体与对应红细胞 抗原在室温下的盐水介质中出现凝集反 应，通过离心观察受血者血清与供血者 红细胞以及受血者红细胞与供血者血清 之间有无凝集现象，判断供血者与受血 者之间有无ABO血型不合的情况。
凝胶卡式检测法的工作原理
• 将红细胞悬液和血清加在凝胶上部反应，离心后观察 • 凝集的红细胞，被阻挡在微柱中凝胶的上部或中央， 证明发生凝集反应，判断凝集反应阳性 • 游离的红细胞，挤过装有过滤介质的微柱到达底部， 证明未发生凝集，判断凝集反应阴性
试剂器材
• 1：试剂 生理盐水 • 2：器材 试管，试管架、记号笔、一次性 塑料吸管，玻片、离心机，显微镜， • 3：标本 患者、献血员静脉血
思考题
• 如何根据正反定型判断ABO血型
酶技术
• 利用木瓜酶或菠萝酶破坏红细胞表面唾液酸，使红细 胞失去电荷，缩小细胞间距离 • 同时改变红细胞膜表面结构，使某些隐蔽的抗原暴露， 从而增强凝集反应 • 主要用于一些不完全抗体的检测
凝聚胺技术
• 利用多聚季胺盐在介质溶液中产生大量正电荷中和红 细胞表面的负电荷，减少红细胞间排斥，形成可逆凝 集，加入解聚液仅可使非特异性聚集分散，而发生抗 原抗体特异性反应凝集不会散开。
• 5：判断结果 • 凝集判断标准：完全凝集者，上层液无 色清亮，底部有红细胞凝块，呈花边状， 轻弹试管凝块不散开。完全不凝集的试 管，上层液无色清亮，血细胞均匀沉积 管底，边缘整齐，重悬细胞后成均匀的 红色悬液。
反定型
试管法：
1：标记试管 取试管3支，分别标记A，B，O。 2：加入样本血清或血浆 血样经2500r/min离心3min分离 出血浆或血清，在A，B，O试管中分别加1滴血浆或 血清， 3：加标准红细胞悬液 再分别加入5%A型、B型、Ｏ型标 准红细胞生理盐水悬液各1滴，混匀，以1000r/min离 心1min。 4：观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜持试管轻 轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮，观察有无凝集， 如仅轻微凝集或不见凝集，必须将反应物倒于玻片上 以低倍镜观察。
二、交叉配血实验
分类 1.“主侧”配血 2.“次侧”配血
献血者
受血者
红细胞
血清
红细胞
血清
• 供血者红细胞与受血者血清反应（主侧交叉配血） • 受血者红细胞与供血者血清反应（次侧交叉配血） • 其目的是检查受血者与供血者是否存在血型抗原与抗体不合的情 况。
交叉配血实验技术1.盐水介源自法 2.酶介质法 3.抗人球蛋白介质法
判断结果：
凝集结果判断： • 判断标准同正定型试管法 • 配血是否相合判断标准：①ABO同型配血，主 侧，次侧均无溶血及凝集，血型相合，可以输 血；主，次侧任何一管发生溶血或凝集，不可 输血，应寻找原因。②异型配血时（指O型血 输给A，B，AB型），主侧无凝集无溶血，次 侧有凝集，无溶血，可以输入少量血。如主侧， 次侧均凝集或主侧凝集，均需要查找原因，不 能输血 。
红细胞的ABO正反定型结果判断
正向定型
抗A + + 抗B + + 抗A,B + + + A细胞 + + -
反向定型
B细胞 + + -
判断
O细胞 结果 O A B AB
注意事项：
1.严格标记，器材干燥洁净，防止溶血，避免交叉 污染。 2.试管法出现溶血现象，表明存在抗原—抗体反应 并有补体激活。 3.4~6个月以内婴儿反定型可能不凝集或凝集很弱， 年老体弱者抗原较弱，最好用试管法鉴定血型。 4.亚型红细胞抗原较弱，凝集较弱。 5.防止冷凝集素的干扰。 6.某些疾病可能使红细胞定型困难：①严重的肠道 细菌感染出现类B抗原；②血清中存在病理性冷 凝集素；③部分高球蛋白与异常球蛋白症患者。
• 器材 试管、试管架、记号笔、吸管、离心 机、玻片、显微镜 • 标本 5%被检红细胞生理盐水悬液，血清 或血浆
操作步骤
试管法：
正定型
1：标记试管 取试管两支，分别标记抗A，抗B。 2：加定型试剂 将抗A、抗B试剂各1滴分别加入 抗A，抗B试管中。 3：加入红细胞悬液 各加5%被检者红细胞生理盐 水悬液1滴于试管中，混匀，以1000r/min离心 1min。 4：观察结果 先观察上层液有无溶血现象，再斜 持试管轻轻摇动或弹动，使管底红细胞再悬浮， 观察有无凝集，如仅轻微凝集或不见凝集，必 须将反应物倒于玻片上以低倍镜观察。
操作步骤
1：患者标本准备 分离血清，标记为PS（patient serum） 配制5％患者红细胞生理盐水悬液，标记 为PC（patient cell） ２：献血员标本准备
– – 分离血清，标记为DS（donor serum） 配制5％献血员红细胞生理盐水悬液，标记 为DC（donor cell）
交叉配血
• 1. 取两支试管，分别标明主，次，即主侧 配血管和次侧配血管。 • 2.在主侧配血管中加PS 1滴，ＤＣ１滴， • 3.在次侧配血管中加DS 1滴，ＰＣ１滴， • 4.混匀，1000r/min离心1min。 • 5.观察结果 先观察试管上层液有无溶血， 再斜持试管轻轻摇动，观察管底反应物有 无凝集，重悬液在低倍镜下观察有无红细 胞凝集。