黄曲霉毒素试剂盒说明书

黄曲霉毒素 B1

酶联免疫检测试剂盒使用说明书

Ⅰ．样品处理方法

一、食品

1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确

加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允

许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。

2、酱油、醋

称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入25.0ml 甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

3、食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）

称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入

25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。根据样品的国家允

许量标准，用A试剂将提取液进行稀释

（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。

4、葡萄酒

准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入25.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。

5、啤酒、黄酒

准确吸取5.0ml样品于25ml容量瓶，准确加入12.5ml甲醇，再用蒸馏水定容至25ml。振摇10min，此即为待测样品液。将待测样品稀释液进行定量或限量测定。

若结果为阳性，则采用葡萄酒中AFB1的提取方法进行测定。

6、花生

样品去皮粉碎（刀切或剪切），称取5.0g于100ml具塞三角瓶中。加入25.0ml甲醇水（1+1）和20ml正乙烷（或石油醚），振摇10min，过滤于分液漏斗中，静置分层。放出下层提取液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：

样品稀释表）。将样品稀释液进行定量过限量测定。

7、月饼、桃酥、花生酱等

称取10.0g试样于125ml具塞锥形瓶中，加入50.0ml甲醇水（1+1）提取液和20ml正乙烷（或石油醚）加塞震荡15min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一锥形瓶中。准备吸取10.0ml甲醇水提取液（相当2.0g样品）于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。

8、面粉

称取10.0g面粉样于100ml具塞三角瓶中，准确加入50.0ml甲醇水（1+1）溶液，震荡15min ,过滤，收集试样滤液。准确吸取10.0ml滤液（相当于2.0g样品）125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷层，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

二、饲料

1、一般饲料及原料

称取5.0g样品于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振荡15min，过滤，弃去初滤液。收集滤液。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

2、饲料浓缩料

称取10.0g样品于100ml具塞三角瓶中，准确加入50.0ml甲醇水（1+1）溶液，振荡15min,过滤，收集试样过滤。

准备吸取10.0ml甲醇水提取液（相当2.0g样品）于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。

放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml 三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。

将样品稀释液进行定量或限量测定。

二、样品稀释表

样品允许量（µg/kg）样品提取液（ml）A试剂（ml）样品稀释倍数（D）

≤5 直接量取0 1

≤10 0.1 0.1 2

≤15 0.05 0.2 3

≤20 0.05 0.15 4

≤30 0.05 0.25 6

≤50 0.05 0.45 10

Ⅱ.黄曲霉毒素B1测试盒使用说明书

（定量检测）

本测试盒利用固相酶联免疫吸附（ELISE）原理，通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测AFB1，适用于食品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测，特点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读。

一、测试盒组成

1、包被抗体的反应板：48/24/12孔

2、A试剂：样品稀释液1瓶

3、B试剂：AFB1标准溶液1套（0.1，0.5，1.5，10ng/ml）

4、C试剂：酶标抗原2/1瓶

5、D试剂：酶标抗原稀释液1瓶

6、E试剂：浓缩洗涤液1瓶

7、F试剂：显色底物液a 1瓶

8、G试剂：显色底物液b 1瓶

9、H试剂：终止液1瓶

10、反应板支架：1块

二、实验准备

1、样品处理：详见“Ⅰ.样品处理方法”

2、试剂的配制

⑴每瓶C试剂中准确加入1.5ml D试剂，充分溶解，配成实验用酶标抗原溶液，2-8℃保存。

⑵E试剂用300ml蒸馏水配制成洗涤液。

三、实验步骤