实验八、3,5-二硝基水杨酸测定总糖

实验八、3，5-二硝基水杨酸测定总糖
1．在样品的总糖提取时，为什么要用浓HCl处理？而在其测定前，又为何要用NaOH中和？
总糖测定是建立在还原糖的测定的基础上的，经HCL处理是为了将所有的非还原糖水解还原成还原性糖，经过测定还原糖含量确定总糖含量。

用NaOH中和是因为HCL会消耗菲林试剂，所以必须要先中和来消除其影响
2.标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行？
时间差别大，吸光度会产生较大误差，虽然溶液在一定时间范围内是保持相对稳定的，但是分光光度计本身存在局限性，要求时间不能太长。

3.比色测定的操作要点是什么？方法的基本原理是什么？
操作要点：1..用相同型号的比色管。

2.配制等体积的系列标准样品。

3.配制待测样品（与标准样品等体积）。

4.对比,找出相同的浓度。

基本原理：基于被测溶液的颜色显色剂后生成的有色溶液，其颜色强度和物质含量成比例。

溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光的吸收效应。

4.72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么？
原理：72型分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。

注意事项：1.保持其干燥，且不能置于高温环境使用。

2.定期使用，日常维护工作中要定期更换仪器的硅胶。

3. 每次装入比色皿的溶液不要过满,一般装2/3即可,并在每次倒溶液时应小心
操作,减少对进光面的擦洗次数,以防进光面磨损而影响透过率。

4. 分光光度计是计量仪器,必须定期检定或校准,若经修理后必须重新检定,
经检定合格后方可使用。

5.比色测定时为什么要设计空白管？
减除溶液的差异，以便消除实验的误差。

6.3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?
黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。

再通过还原糖求出总糖含量。

7.如何正确绘制和使用标准曲线?
标准曲线应在坐标纸上绘制，横坐标轴距坐标纸底边1.5-2cm，标示出刻度和葡萄糖的毫克数；纵坐标轴距坐标纸左边1.5-2cm，标示刻度和光密度值；曲线为过原点的直线，测定点均匀分布在直线的两侧；标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下，用于确定样品中的物质含量。

对于重复的测定，应取吸光度的平均值查标准曲线；测定数据不应记在标准曲线上。

8.糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？
具有还原性的物质。

过滤除去
9.在提取糖时，其他杂质是否会影响到测定？
会，会影响到吸光度，所以先除出去杂质。