HPLC法测定大鼠血浆中色胺酮的浓度及药代动力学参数

・ ７１・ ２
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１０ ０ ＿ ５ ０
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箱 （ 西华ห้องสมุดไป่ตู้家 用 电器 有 限 公 司 ） Ｍｌｐｒ 纯 水 器 博 ； ｉｉｏｅ超 ｌ
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Ｆ ｇ ２ ＨＰＬＣ ｈ ｏ ｔ ｇ ａ ｆｔ ｅ ａ ｓ ｙ ｉ ｃ ｒ ｍａ ｏ ｒ ｍｓ ｏ ｈ ｓ ａ
２ 方 法与 结果
２ １ 色谱条件 ．
Ｋｏ ａｉＣ８ ｒ ｓ １ ｍ ｌ 色谱柱 （． ｉ × ５ ４ ６ｍｌ ２０ ｌ
５２和 ４ ６ｈ Ｃ 分别 为 １８ ７和 ２ ６ ０ｍ Ｌ Ａ Ｃ 分 ． ． ， … ．８ ． ２ ｇ・ ～， Ｕ ０ 别为 １ ． ２ １和 １ ．Ｏｍ ｈ・ ４ ７ ｇ・ Ｌ～。结 论 本方法操 作简便 ， 准确 ， 灵敏度高 、 重复性好 ， 可用于色胺酮血药浓度检测及 药
药动学研究鲜有报道。为给色胺酮的进一步研究和 应用提 供依 据 ， 文采 用 Ｈ Ｌ 本 Ｐ Ｃ法 建 立 了大 鼠血 浆
・
２０・ ７
中国药理 学通报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕ ｅｎ ０ ２Ｆｂ ２ （ ）２ ０— ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏ ｇｃ ｌｔ ２ １ ｅ ；８ ２ ： ｅ ｏ ａ Ｂ ｌｉ ７ ４
网络 出版 时 间 ：０ ２— ２ １ ２—８９ ５ 网络 出版 地 址 ：ｔ ：／ ｗ ． ｎ ｉ ｎ ｔｋ ｍ ／ ｅ ｉ ３ ． ０ ６ Ｒ．０ ２ ２ ８ ０ ５ ．２ ． ｔ ｌ ：８ ｈｔ ／ ｗ ｗ ｃ ｋ． ｅ ｃ ｓ ｄ ｔ ｌ ４ １ ８ ． ２ １０ ０ ． ９ ８ ０ ９ ｈｍ ｐ ／ ａ／
肝素钠（ 西安阿尔宝生物技术有限责任公 司） 色胺 ， 酮 由西北大学生命科学院提供（ 纯度大于 ９ ％） 乙 ８ ，
腈 （Ｋ ｃｅ ｃｌ， ｏｅ） 水 为超 纯 水 ， 他 试 剂 均 Ｓ ｈｍｉ ｓＫ ｒａ ， ａ 其
为 分 析纯 。
１ 白血浆 中， 空 配制成 相 当于色胺酮 浓度 分别为 ０ ０ ８ 、． ７ ３ ０ ２ ２ 、． ８ ６ １ １ １ ｇ・ 的 ． １ ３ ０ ０ ２ 、． ９ ８ ０ ５ ５ 、． ７ ２ ｍ Ｌ
ｅ ｚ ９ 高通量组织研磨机 （ ｔ ２ ｎ１ 宁波新芝生 物科 技股 份有 限公 司 ）；Ｉ Ｅ Ｓ Ｃ ６ １ ＳＭ Ｎ Ｂ Ｄ．０ Ｗ无 菌 冷 藏 冷 冻 冰
中国药理 学通报
Ｃ ｉ ｓ ｈｒ ｃｌ ｉ ｌ ｕ ｅｎ ０２Ｆ ｂ ２ （ ） ｈｎ ｅ ａｍａｏ ｇｃ ｌｔ ２ １ ｅ ；８ ２ ｅ Ｐ ｏ ａ Ｂ ｌｉ
对 照 品 、 胃后 血 浆 样 品 ， 照 “ ． ” 下 方 法 处 灌 按 ２３ 项
（ 密理博上 海贸易 有 限公 司 ） ＩＣ独 立换 气 系统 ； Ｖ
（ 上海 邵 丰实 验动 物设 备有 限公 司 ） 。 １２ 试 药 ． 桂 皮 醛 对 照 品 （ 号 １０ １．０ ２２ 批 １７０２０ １ ） 购 于 中 国药 品生物 制 品检定 所 （ 纯度 均 大 于 ９ ％ ） ８ ，
血 浆样 品。按 “ ． ” 下 操 作 ， 血 浆 中色 胺 酮 的 ２３ 项 以 质 量 浓度 为横 坐 标 （ ， Ｘ） 以色胺 酮 和 内标 峰 面积 的
１３ 动物 ．
ｓ Ｄ大 鼠， 体质量 （８ ２ ） ， ２０± ０ ｇ 由第 四军
比值为纵坐标（ ）用最小二乘法 回归运算 ， Ｙ， 得到直
摘要 ： 目的 建立测 定血浆 中色胺酮 含量 的 Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 ， 并用 于色胺酮在大 鼠体 内的药代 动力学 研究 。方 法 采用 Ｏ Ｓ Ｄ ｃ 色谱柱 （ ． ｍ × ５ ｍ） 流动 相 为 乙腈 ： （７ ： 。 ４６ｍ ２０ｍ ， 水 ４
５ ） 流速为 １０ｍ ・ ｉ ～， ３， ． ｌ ｍ ｎ 检测 波长为 ２ １ｎ 柱 温 ３ ％ ， ５ ｍ， ０
中色 胺酮 的测定 方 法 ， 测 定 大 鼠灌 胃给 予 色胺 酮 并
代动力学研究 。 关键 词 ： 色胺酮 ； Ｌ 药代动力学 ； ＨＰ Ｃ； 桂皮醛 ； 血药浓度 ； 大鼠
后经时血药浓度 ， 研究其在大 鼠体 内的药代动力学 特征 。
色 胺 酮 （ｒｐａｔｒ ） 吲 哚 喹 啉类 生 物碱 ， ｔ ｔ ｈｉ 为 ｙ ｎ ｎ 其 化学名 称 为 吲 哚 ［ ，一］ 唑 啉．，２二 酮 （ ，２ ２ １ｂ 喹 ６ ｌ－ ６ １一 ｄ ｙｒ－ １－ｉ ｏｎｏ ＿２ １ｂ －ｕｎｚｌ ｅ ， 构 ｉ ｄｏ ２ｄｏ ｉｄｌ ［ ，－］ｑ ｉａｏｎ ） 结 ｈ ６， ｘ ｏ ｉ 式 见 Ｆｇ１ 主要 存 在 于 马 蓝 （ ｔｂｌｎｈｓＣＳ ） ｉ 。 Ｓｒ ｉ ｔｅ ￣ｉ 、 ｏ ａ ａ
Ｆｇ１ Ｃ ｅ ｃ ｌｔｕ ｔｒ ｆ ｒｐａ ｔｒ ａ ｉ ｈ ｍｉ ｒｃｕ ｅｏ ｙ ｔｎｈ ｉ ） ａｓ ｔ ｎ（
ａ ｄｉｔ ｎ ｌ ｔｎ ａｄｃ ｍａ ｌｅ ｙ ｅ（ ） ｎ ｅ ａ ａ ｄ ｒ ｉ ｍａｄ ｈ ｄ ｂ ｎｒ ｓ ｒ
１ 材 料
１１ 仪器 ．
日本 岛津 高效 液 相 色谱 （ Ｐ Ｃ） ， Ｈ Ｌ 仪 配
Ｋ ｙ— ｙｔ ｏａＭｉ ａ等 的实验 表 明 ， 过预 防 性 给予 色胺 ａ 通
酮， 可降低肠道肿瘤 的发生率 ； 珊等 研究发 现 缪
色胺 酮 还 能 明显 抑 制 ＭＣ － 胞 增殖 并 具 有诱 导 Ｆ７细 细胞发 生凋 亡 的作用 ； 还能 影 响人 白血病 细 胞株 Ｋ 一 ５２细胞 的增 殖 和 凋 亡 ＿ 。但 是 ， 胺 酮 在 体 内 的 ６ ９ Ｊ 色
病细 胞分 化 ， 高浓 度 可通 过 ｃｓａｅ３或 Ｆｓ 原 途 ａｐｓ一 ａ抗 径诱 导凋 亡 ， 而 引起 细胞 的死 亡 ； ＿研 究 发 现 从 Ｍｕ４ 呈浓 度 依 赖性 抑 制 培 养 的 肿 瘤 细 胞 的 Ｄ Ａ合 成 ； Ｎ
文献标识码 ： 文章编 号 ：０ １— ９ ８ ２ １ ） ２— ２ ０— ５ Ａ １０ １ ７ （ ０ ２ ０ ０７ ０ 中国图书分类号 ： ． ２ Ｒ ８ ．１ Ｒ １ ． ； ９９ １ Ｒ３ ；２ ２ ７ ；９ ６ ４ Ｒ ６ ． ２
Ｔ ｌ０９８ ７２ ２ ， － ａｌ ｉｅ２ ０ １ ＠ １６ ｃｍ； ｅ：２ ・４ ７２ ８ Ｅ ｍ ｉ ｊ０ ９ ９ ０ ２ ．ｏ ：ｌｉ
有 Ｌ． Ａ Ｃ２ Ｔ二元泵 ，Ｐ — ２ Ａ型二极管 阵列检测 ０ Ｓ ＯＭ ０
器 ，Ｉ—Ｏ Ｆ 自动进 样 器 ，Ｔ 一０ Ｓ型 柱 温箱 ； Ｑ ＳＬｌＡ Ｃ Ｏ １Ａ Ｋ 一 ３０ Ｄ ０Ｖ Ｅ型 双频 数 控超 声 波 清洗 仪 （ 山市 超 声 仪 昆 器 有 限公 司 ） 电 子 天平 （ 国 赛 多 利 斯 ） Ｘ －６ ； 德 ； Ｋ９ Ａ
抗炎 、 抗肿 瘤 、 疟 和 杀 虫作 用 ， 抗 特别 是 可 以 通过 多 种途 径对 肿瘤 细 胞增 殖 有 抑 制作 用 。据报 道 ， 蓝 蓼 中的色胺 酮能 诱 导 白血 病 细胞 凋 亡 ； ｉｏ Ｋｍ ｔ ｏ等
也 观察 了色胺 酮在 体外 对多 种人 白血病 细胞 的杀 细
理， 进样后所得色谱 图见 Ｆ 。结果表 明， 实验 ｉ２ ｇ 本
条 件 下 ， 胺 酮与 内标 峰分 离 良好 ， 杂质 干扰 。 色 无
２ ４ ２ 标 准 曲线 的 制作 和 最低 定 量 限考 察 ．． 分别
吸取 “ ．． ” 下 的系 列 标 准 溶 液 ２ ｌ加 入 ２０ ２２ １ 项 ０ ， ０
ＨＬ Ｐ Ｃ法测定大 鼠血 浆中色胺酮 的浓度及药代动 力学参数
李 捷， 缪 珊 ， 四旺 ， 剑波 ， 艳华 王 王 谢
７ ０３ ） １０ ２ （ 第四军 医大学药学院天然药物 学教研 室， 陕西 西安
ｄｉ１ ．９ ９ ｊｉ ｎ １０ —１７ ．０２ ０ ．２ ｏ：０ ３ ６／．ｓ ．０ １ ９ ８２ １． ２０ ７ ｓ
快速混匀器（ 姜堰市新康 医疗器械有限公司 ）Ｔ Ｌ ；Ｇ 一
１Ｇ ６ Ｂ高速 台式离 心机 （ 上海 安 亭科 学 仪器 厂 ） Ｓｉ ；ｃ —
王 四旺（９８ ， ， １５ 一）男 教授 ， 博士生 导师 ， 究方 向 ： 研 中药
新药 开发 ， 通讯作者 ， － ｉ ｗ ｎｓ ＠ｆ ｕ ｅｕ ｃ Ｅｍａ ： ａｇｉ ｍｍ ．ｄ ．ｎ ｌ ｗ
ｐｏ ｅｄｕ ｓ ｉ ｎ ｌ ｄｓ ｆ ６ ｍ ｋ ～ ｆｒ ． ：ｉｎｍａ ｅ ｙｅ（ｎｅ ａ ｓａｄｒ ｅｋ ； ｔ ｐａ ｔｒ ｅｋ ｒｂ ｒｇ ｔ ａｓ ｇ ｎｅｏ ｇ・ ｇ ｏ ｈ １ｅｎ ａ ｌ ｈｄ ｉｔｒ ｌ ｔｎ ａｄｐ ａ ） ２：ｒ ｔｎｈｉ ｐ ａ ｗｈ ｉ ｅ ５ ３ ｄ ｎ ｙ ｎ
Ｍｔ ｉ ｏ ｋ 等 发现 ， ｏ 色胺酮通过丝裂原活化蛋 白激酶 （ Ｐ） ＭＡ Ｋ 活化 的下游 区域 来抑 制 肝细 胞 生长 因子 的
生 成 ， 而抑制 肿瘤 细胞 的恶 化 、 袭 、 长 和转移 ； 从 侵 生
进样量 ２ ｌ内标物为桂皮醛 。按 ５ ｇ・ ｇ 剂量 给大鼠 Ｏ ， ６ｍ ｋ 灌 胃后 ， ＨＰ Ｃ法测定给药后不同时刻大 鼠血浆 中色胺酮 用 Ｌ 的浓度。采用 Ｄ Ｓ２ １１软件分析 ， Ａ ． ． 计算药动学参数 。结果 色胺酮在 ０ ０ ８ ． １３～１１ １ ｇ・ 范 围内线性 关系 良好 ． ７ ２ｍ Ｌ （。 ． ９ ） 最 低 定量 限为 ００ ｇ・Ｌ ｒ ＝０ ９９ ， ．２ｍ ～。 回收 率 大 于 ９ ． ％ ， １内 、 ５０ 其 ３ 日间 Ｒ Ｄ均小 于 ８ 。大 鼠灌 胃色胺酮 ５ Ｓ ％ ６
Ａ：ｌｎ ｌｓ ； ｐａｍａｓｉｅ ｉ ｔｒａ ｓ ｎ ａｄ ２ ｂａ ｋｐａｍａＢ：ｌ ｐｋｄｗ ｔ ｉ ｅｎ ｌｔ ｄｒ（ ０ｍｇ・ ）ａ ｄｔ ｐａｔｒ １． １ ｓ ｈｎ ａ Ｌ一 ｎ ｙｔｎｈｉ ｒ ｎ（ １７２ｍｇ・ ； ｐａｍ ｆｒ ｒｌ ｄ ｉｉｒｔ ｎｏ Ｌ一 ） ｃ：ｌｓ ａａｔ ａ ｍｎｓａｉ ｆ ｅｏ ａ ｔ ｏ
ｍ ｋ 后 ， ｇ・ ｇ 早和 ６ 分别为 ４ ３ ４和 ５ ５ ７ｈ Ｔ ．１ ．９ ，ｍ 分别为
Ｓａ ａ ｈｒ 等 合成了多个色胺酮衍生物 ， ｍ 并筛选这些 化合物对体外 ８ 、 内 １ 种人类肿瘤细胞株的杀 种 体 ２ 伤活性 ， 结果显示大多数化合物具 有细胞毒活性 ；
线 回归方 程 为 Ｙ＝３ ６ ８５ 一０ ０ ２ １ ｒ ． ０ Ｘ ． ８ ，２＝０ ９ ９ ．９ 。
医大 学 试 验 动 物 中心 提 供 ， 可 证 号 Ｓ Ｘ － 军 ） 许 Ｃ Ｋ（
２ ０ —０ ７。 ０７ ０
结 果表 明色 胺 酮质 量 浓 度 在 ００ ８ ． １３—１１ １ ．７ ２ｍｇ・ Ｌ 线 性关 系 良好 。按 以上 条 件 测 得 血 浆 中色 胺 酮
胞作用 ； 另有研究表 明， 色胺酮在低浓度可诱导 白血
收稿 日 ： １ — ９ １ ， 回日期 ： １ — Ｏ一 Ｏ 期 ２ １ ０ — ３修 ０ ２ １ １ ２ ０ 基金项 目： 国家重大新药创制科技重大专项 （ ｏ ０ Ｘ ９０ — ８ Ｎ １Ｚ ０４１ ０ ） ２ １ ３
作者 简介 ： 李 捷 （９ ３一） 女 ， １８ ， 硕士 ， 助教 ， 研究 方向 ： 中药药理学 ，
蓼蓝 （ ｏ ｇ ｎ ｍ ｔ ｅ ｒ ｍ Ｌ ｕ） 菘 蓝 （ｓｔ ｎｔ— Ｐ ｌ ｏ ｕ ｎｔ ｉ ｏ ｒ 、 ｙ ｉ ｏｕ Ｉ ｉ ｔｃ ａｓｉ ｏ
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ｒ Ｌ ） 产蓝植 物 中 ， ．等 现也 可 通 过微 生 物 发 酵 或人
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工合成得到 。近年来药理研究表 明其具有抗菌 、 Ｊ