测定微生物的数量课件

，不正确的是
( )。
A．防止杂菌污染
B．消灭全部微生物
C．稀释土壤溶液的过程中必须在火焰旁操作
D．灭菌必须在接种前进行
答案 B
3．探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数。 实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将 用表土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种 情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将 自生固氮菌与其他细菌分离开来。 材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养 基、盛9 mL无菌水的大试管若干、无菌吸管、无菌涂布器、 无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱、酒精灯。 方法步骤： (1)倒平板 分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在 ________操作。
②计数的同时能观察微生物 ①样品中含菌数较少时，
的形态特征
也可以进行计数
特点
③难以计数微小的细菌
②只能对活细菌进行计数，
④一般适用于纯培养悬液中 也称活菌计数法
各种单细胞菌体的计数
③操作较复杂，计数时间
⑤不能区分死细菌和活细菌，较长
计数结果为细菌总数
示例二 土壤中细菌的计数
【例2】 (安徽理综卷)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验
平均值25 (2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数 的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌数是(涂布平板时 所用稀释液的体积为0.2 mL)________。
(3)用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量 __________________，因为________________________。 (4)某同学在测定大肠杆菌的密度时发现，在培养基上还 有其他杂菌的菌落，能否肯定该大肠杆菌的品系被污染了？ 为什么？____________________________________。 答案 ②稀释混合平板法 (1)D (2)1.17×108 (3)多
能力展示
自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物 时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是 对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。 步骤如下： ①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。 ②为了得到更加准确的结果，你选用____________(稀释 混合平板法、稀释涂布平板法)接种样品。 ③适宜温度下培养。 结果分析：
4．培养 待这些接种好的平板培养基冷却后，_倒__置__放入_2_8_～__3_0_℃的 恒温箱中培养_2_4_～__3_6_h，直至长出菌落为止。
5．选取具有合适菌落的稀释倍数并计数 细菌、放线菌、酵母菌以每个培养皿内有_3_0_～__3_0_0_个菌落为 宜。霉菌以每个培养皿内有_1_0_～__1_0_0_个菌落为宜。
(1)测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中， 得到以下几种统计结果，正确可信的是 ( )。 A．一个平板，统计的菌落数是23 B．两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24 C．三个平板，统计的菌落数分别是21、5和52，取平均
值26 D．四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取
操作的叙述中，错误的是
( )。
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭
菌后倒平板
B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，
分别涂布于各组平板上
C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 h
D．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组
平板进行计数
特别提醒 设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将 待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液， 分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布 器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计 数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加 到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落 平均数。
④没有设置对照
A．①②③
B．②③④
C．①③④
D．①②④
解析 A同学比其他同学的实验结果数据大，可能由于选 取的土样不同，培养基灭菌不彻底或操作过程中有杂菌污 染，也可能是操作失误，如配制培养基混入其他含氮物质、 稀释度不够准确等。 答案 A
2．下面对“从土壤中分离分解尿素的细菌过程中灭菌”的理解
6．计算 将统计出的菌落数按下列公式计算，得出每克样品菌数。
1．土壤中好气性细菌的计数
制备土壤稀释液
土壤中好 气性细菌 的计数
取样 倒平板 培养
观察记录
特别提醒 移液时，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次 吸上的液面要高于前一次，让菌液混合均匀并减少稀释中 的误差。每配一个稀释度要换用一支移液管。 2．土壤中分解尿素的细菌的计数 (1)土壤取样 ①土壤微生物大约70～90%是细菌。 ②细菌适宜在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多 数分布在距地表3～8 cm的土壤层。 (2)样品处理 样品的稀释程度直接影响平板上生长的菌落数目，选用一 定稀释范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300之 间，便于计数。
(3)微生物的培养与观察 将培养基平板放置于30～37 ℃温室中培养1～2 d，每隔24 h 统计一次菌落数目，最后选取数目稳定时的记录作为结果。 (4)细菌的计数 当菌落数目稳定时，取同一条件下的至少3个平板进行计数， 求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数 目。 特别提醒 进一步鉴别分解尿素的细菌需在培养基中加酚红指
【巩固1】 显微镜直接计数法的优点是
( )。
A．直接观察不存在误差
B．难以计数微小的细菌
C．所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数的同时
能观察到所研究微生物的形态特征
D．所需设备复杂，还要用到细菌计数板，统计结果误差
大
答案 C
土壤中好气性细菌的计数
1．测定土壤含菌量的意义 土壤中微生物的_种__类__和_数__量__极其丰富，它们对提高_土__ _壤__肥__力__有重要作用，因此，测定土壤中的_含__菌__量可以作 为判定土壤__肥__力_的一个重要指标。
答案 C
示例一 微生物的记数方法及特点
【例1】 取少量酵母菌液放入血球计数板直接记数，测得的数
目是
( )。
A．活细胞数
B．死细胞数
C．菌落数
D．细胞总数
思维导图：
深度剖析 显微镜直接记数法是测定微生物数量的一种常 用方法，由于该法不能区分微生物的死活，故测得的数目 为细胞总数。 答案 D
方法技巧 直接计数法与间接计数法
1．直接计数法 (1)常用方法：显微镜直接计数法。
(2)过程：先将待测样品制成悬液，然后取一定量的悬液 放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物 数目来计算出单位体积内的微生物总数。显微镜直接计数 示意图如右： (3)优点：所需设备简单，可迅速得到结果，而且在计数 的同时能观察到所研究微生物的形态特征。 (4)缺点：难以计数微小的细菌。 2．间接计数法 (1)间接计数法最常用的是稀释平板计数法，它是根据微 生物的培养特征而设计的计数方法。
(2)过程：将待测样品配制成均匀的系列稀释液，尽量使样 品中的微生物细胞分散开。再取一定稀释度、一定量的稀 释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内； 或是将一定量的稀释液，与溶化后冷却至45 ℃左右的琼脂 培养基混合，倾入无菌培养皿中，摇匀、静置待凝。经过 培养后，就由单个微生物生长繁殖形成菌落，这样的一个 菌落就代表着一个微生物个体。统计培养基中出现的菌落 数，即可推算出检测样品中的活菌数。 (3)优点：在样品中含菌数较少的情形下，也可以完成计数。 (4)缺点：由于死亡的细菌不能繁殖产生菌落，所以稀释平 板计数法只计数活菌数，故又称活菌计数法。
2．制备土壤稀释液 取土壤表层_5_～__1_0_ cm处的土样。称取__1g土样，放入盛有 _9_9_ mL无菌水的锥形瓶中，制成_1_0_2倍的稀释液。
3．取样及倒平板 用_无__菌__移__液__管__3支，分别吸取稀释倍数为_1_0_4、_1_0_5、 _1_0_6 的 土壤稀释液各_0_._2 mL，注入到相应编号的培养皿中。将已 灭菌_牛__肉__膏__蛋__白__胨__琼__脂__培养基溶化、冷却至_4_5_～__5_0_℃左右 时，倾入到上述各培养皿中。
(2)显微镜直接计数法 利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一 定容积的样品中微生物的数量，但不能区分细菌的死活。 计算公式：每mL原液所含细菌数＝每小格平均细菌数 ×400×10 000×稀释倍数。 (3)滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例，将已知体积的水过 滤后，将滤膜放于伊红—美蓝培养基上培养，在该培养基 上，大肠杆菌菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色的菌落 数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。
中 ③吸取0.5 mL进行平板涂布 ④依次稀释至102、103、
104、105、106倍稀释度
A．①→②→③→④
B．①→③→②→④
C．①→②→④→③
D．①→④→②→③
解析 在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(1 g)，然后加无
菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液
涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。
第三节 测定微生物的数量
血球计数板的构造
1．测定某种微生物的数量。 2．用土壤浸出液进行细菌培养，仅以尿素为氮源，测定
能生长的细菌的数量。
1．了解测定微生物数量的原理和方法。 2．观察菌落数，进行微生物数量的统计。 3．理解稀释平板计数法的原理和操作过程。
测定微生物数量的方法
1．测定微生物数量的方法 测定微生物数量的方法可分为两类：_直__接__计__数__法__和_间__接__ _计__数__法__。
直接计数法
间接计数法
稀释平板计数法：当样品
方法 原理
显微镜直接计数法：利用特 定细菌计数板或血细胞计数 板，在显微镜下计算一定容 积的样品中微生物数量
的稀释度足够高时，培养 基表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的一 个活菌，通过统计平板上 的菌落数，就能推测出样
品中大约含有多少活菌
Байду номын сангаас
①设备简单，计数迅速
2．直接计数法 (1)常用方法 直接计数法中常用的是_显__微__镜__直__接__计__数__法__ ，这种方法是 先将待测样品制成_悬__液__，然后取一定量的悬液放在 _显__微__镜__下进行计数。
(2)特点 该法所需_设__备__简__单__，可迅速得到结果，而且在计数的同 时能观察到所研究微生物的_形__态__特__征__ 。其缺点是难以计 数_微__小__的__细__菌__。这种方法一般适用于_纯__培__养__悬浮液中各 种_单__细__胞__菌__体___的计数。 3．间接计数法 间接计数法最常用的是_稀__释__平__板__计__数__法__，它是根据微生 物的_培__养__特__征__而设计的计数方法。在样品中含菌数_较__少__ 的情形下，也可以完成计数。
———探究微生物的数量测定———
技法必备
微生物的计数方法不仅用于科学研究，而且还广泛应用于 食品卫生检验、环境污染检测等领域。由于微生物形体微 小，需用一些特殊的方法进行计数。 (1)稀释涂布平板法(也叫活菌计数法) 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落， 来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落 数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
思维导图：
深度剖析 确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的 平板进行计数，D错；A是培养基的灭菌方法，B设置了一 系列对照实验，C是细菌的培养方法，A、B、C三个选项 均是正确的。 答案 D
归纳总结 土壤中微生物含量不同，其活菌计数时所用的 稀释倍数也不同。如：
稀释 倍数
倍数测细菌数：选用104、105、106倍稀释 测放线菌数：选用103、104、105倍稀释 测真菌数：选用102、103、104倍稀释
当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个 菌落 (4)不能。因为不能排除杂菌来自培养基或来自培养过程
1. 在做分解尿素的细菌的分离实验时，A同学从对应106培养
基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50
个菌落。A同学的结果产生原因可能有
( )。
①由于土样不同 ②由于培养基污染 ③由于操作失误
示剂，若此种菌存在，则会变红，原理是分解尿素的细菌能产
生 脲 酶， 该酶 可 催化 下列 反应 ： CO(NH2)2＋ H2O―脲―酶→CO2 ＋2NH3。因产生 NH3 使培养基碱性增强，pH 升高，使酚红 指示剂呈现红色反应。
【巩固2】 请选出进行土壤中细菌计数的正确的操作步骤 ( )。 ①土壤取样 ②称取1 g土壤放入盛有99 mL无菌水的锥形瓶