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1ml 1ml 1ml
1:10
1:100
25g/m 1ml l样品
1:1000 1:10000
1ml
1ml
生理盐 水
1ml
2日020年加10月2入5日星4期6℃营养琼8 脂15~20mL
(一)样品稀释及做平板
2020年10月25日星期
9
日
检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止细菌有 所死亡或繁殖。
8、稀释倍数愈高菌落数愈少,稀释倍数愈低菌落数愈 多。如出现逆反现象,不可作为检样计数报告的 依据。
2020年10月25日星期
21
日
复习题
1、什么是菌落总数? 2、测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么意义? 3、画出平板倾注法测定菌落总数的示意图。 4、在测定菌落总数时,如何选择菌落进行计数? 5、在菌落总数的检验中,要注意哪些事项? 6、在菌落总数的检验中,如何根据样品的特性选择培养温度和时间?
2020年10月25日星期
10
日
(二)培养
➢ 倒放平板 ➢ 普通食品:36 ℃±1℃ 48h±2h ➢ 水产品: 30℃±1℃ 72h±3h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥
漫生长的菌落时,可在凝固后的平板计数
琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4m
L),凝固后翻转平板,按上步条件进行培
养。 2020年10月25日星期
2020年10月25日星期
14
日
• 式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之
和;
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数; n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数; d——稀释因子(第一稀释度)。
2020年10月25日星期
15
日
注意:旧版标准的做法为:比值小于或等于2取平
2020年10月25日星期
18
日
2020年10月25日星期
19
日
(四) 检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时,要追加对照平板; 2、吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分; 3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴; 4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触; 5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min.
2020年10月25日星期
24
日
属
代表种
埃希氏菌属 (Escherichia) 大肠埃希氏菌 (E.coli)
致病性 肠道外感染, 急性腹泻
11
日
(三)计数和报告
到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于0~ 4℃,但不得超过24h。
2020年10月25日星期
12
日
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1、菌落的选择
(1)单个菌做一个菌落计 (2)呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,作为一
个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链 均应按一个菌落计算。 (3)如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀 ,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数 。
2020年10月25日星期
3
日
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、了解细菌在食品中的繁殖动态。 3、预测食品贮藏期限的长短。
2020年10月25日星期
4
日
三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法# 平板表面涂布法 平板表面点滴法
2020年10月25日星期
5
日
四、平板倾注法测定菌落总数 GB4789.2-2010
原理:样品经过稀释后,使样品悬液中的细菌分期 存在,接种一定量(一般为1mL)到培养基中,再 加入适量的培养基,充分混匀。从理论上讲,微生 物在培养基中分散呈单个存在,一个菌体长出一个 肉眼可见的菌落。
2020年10月25日星期
6
日
检 验 步 骤( 程 序) :
2020年10月25日星期
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日
(一)样品稀释及做平板
均数,比值大于2则其较小数字
2020年10月25日星期
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日
(2)如均大于300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告 (3)如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告 (4)如菌落数有的大于300,有的又小于30,不在30~300之间,以最接近300或30的平均菌落
数乘以稀释倍数报告 (5)如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。
2020年10月25日星期
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日
(四) 检验注意事项
6、为防止细菌增殖产生片状菌落,在检液加入平皿后 ,应在20min倾入琼脂,并立即使之与琼脂混合均 匀。(在平面上先左右摇动,后顺时针和逆时间旋 转)
7、加入平皿内的检样稀释液有时带有检样颗粒,需加 做平皿放在4℃的环境中,以便计数时排除颗粒的 影响。
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日
3、菌落数的报告
① 菌落数在1~100时,按“四舍五入”原则,以整数报告; ② 如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算。 ③ 固体检样以克(g)为单位报告,CFU/g; ④ 液体检样以毫升(mL)为单位报告, CFU/mL; ⑤ 表面涂擦则以平方厘米(cm2)报告,CFU/ cm2; 。
第五章 卫生指标细菌 的检验
第一节 食品中菌落总数的测定
2020年10月25日星期
2
日
一、菌落总数
• 概念:是指食品检样经过处理,在一定
条件下培养后,单位质量(g)、容积(mL )或表面积(cm2)内所形成的好氧或兼 性厌氧细菌菌落的总数。
• 是活菌计数,需氧菌数;
• 不代表实际所有的细菌总数。
2020年10月25日星期
22
日
第二节 食品中大肠菌群的检 验
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23
日
一、大肠菌群
1、 什么是大肠菌群? 指一群在37℃能分解乳糖产酸、产气,需氧及兼性
厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。
2、大肠菌群的组成:
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属(又叫 产气杆菌属,包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌)、克雷伯 氏菌属的一部分和沙门氏菌属的第III亚属。
2020年10月25日星期
13
日
2、平板菌落计数的选择
(1) 选取菌落数在30~300之间的平板(SN标准要求为25~250个菌落)
➢若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计 数范围内,计算两个平板菌落数的平均值, 再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(m L)样品中菌落总数结果。
➢若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计 数范围内时,按公式(1)计算:
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25g/m 1ml l样品
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生理盐 水
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2日020年加10月2入5日星4期6℃营养琼8 脂15~20mL
(一)样品稀释及做平板
2020年10月25日星期
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检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min,以防止细菌有 所死亡或繁殖。
8、稀释倍数愈高菌落数愈少,稀释倍数愈低菌落数愈 多。如出现逆反现象,不可作为检样计数报告的 依据。
2020年10月25日星期
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复习题
1、什么是菌落总数? 2、测定食品、饮料等产品的菌落总数有什么意义? 3、画出平板倾注法测定菌落总数的示意图。 4、在测定菌落总数时,如何选择菌落进行计数? 5、在菌落总数的检验中,要注意哪些事项? 6、在菌落总数的检验中,如何根据样品的特性选择培养温度和时间?
2020年10月25日星期
10
日
(二)培养
➢ 倒放平板 ➢ 普通食品:36 ℃±1℃ 48h±2h ➢ 水产品: 30℃±1℃ 72h±3h
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥
漫生长的菌落时,可在凝固后的平板计数
琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4m
L),凝固后翻转平板,按上步条件进行培
养。 2020年10月25日星期
2020年10月25日星期
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• 式中:
N——样品中菌落数;
ΣC——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之
和;
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数; n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数; d——稀释因子(第一稀释度)。
2020年10月25日星期
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日
注意:旧版标准的做法为:比值小于或等于2取平
2020年10月25日星期
18
日
2020年10月25日星期
19
日
(四) 检验注意事项
1、对照平板出现几个菌落时,要追加对照平板; 2、吸管进出瓶子或试管时,吸管口不得触及瓶口、管口的外围部分; 3、吸管插入试样液内的深度不得小于2.5cm,调整时要使管尖与容器内壁紧贴; 4、进行稀释时,吸管口不得与稀释液接触; 5、检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min.
2020年10月25日星期
24
日
属
代表种
埃希氏菌属 (Escherichia) 大肠埃希氏菌 (E.coli)
致病性 肠道外感染, 急性腹泻
11
日
(三)计数和报告
到达规定培养时间,应立即计数。如果不能立即计数,应将平板放置于0~ 4℃,但不得超过24h。
2020年10月25日星期
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
1、菌落的选择
(1)单个菌做一个菌落计 (2)呈链状生长的菌落之间无任何明显界限,作为一
个菌落计,如存在有几条不同来源的链,则每条链 均应按一个菌落计算。 (3)如片状菌落不到平板一半,而另一半又分布均匀 ,则可以半个平板的菌落数乘2代表全平板的菌落数 。
2020年10月25日星期
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二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、了解细菌在食品中的繁殖动态。 3、预测食品贮藏期限的长短。
2020年10月25日星期
4
日
三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法# 平板表面涂布法 平板表面点滴法
2020年10月25日星期
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四、平板倾注法测定菌落总数 GB4789.2-2010
原理:样品经过稀释后,使样品悬液中的细菌分期 存在,接种一定量(一般为1mL)到培养基中,再 加入适量的培养基,充分混匀。从理论上讲,微生 物在培养基中分散呈单个存在,一个菌体长出一个 肉眼可见的菌落。
2020年10月25日星期
6
日
检 验 步 骤( 程 序) :
2020年10月25日星期
7
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(一)样品稀释及做平板
均数,比值大于2则其较小数字
2020年10月25日星期
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(2)如均大于300,则取最高稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告 (3)如均小于30,则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告 (4)如菌落数有的大于300,有的又小于30,不在30~300之间,以最接近300或30的平均菌落
数乘以稀释倍数报告 (5)如所有稀释度均无菌落生长,则应按小于1乘以最低稀释倍数报告。
2020年10月25日星期
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(四) 检验注意事项
6、为防止细菌增殖产生片状菌落,在检液加入平皿后 ,应在20min倾入琼脂,并立即使之与琼脂混合均 匀。(在平面上先左右摇动,后顺时针和逆时间旋 转)
7、加入平皿内的检样稀释液有时带有检样颗粒,需加 做平皿放在4℃的环境中,以便计数时排除颗粒的 影响。
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3、菌落数的报告
① 菌落数在1~100时,按“四舍五入”原则,以整数报告; ② 如大于100时,则报告前面两位有效数字,第三位数按四舍五入计算。 ③ 固体检样以克(g)为单位报告,CFU/g; ④ 液体检样以毫升(mL)为单位报告, CFU/mL; ⑤ 表面涂擦则以平方厘米(cm2)报告,CFU/ cm2; 。
第五章 卫生指标细菌 的检验
第一节 食品中菌落总数的测定
2020年10月25日星期
2
日
一、菌落总数
• 概念:是指食品检样经过处理,在一定
条件下培养后,单位质量(g)、容积(mL )或表面积(cm2)内所形成的好氧或兼 性厌氧细菌菌落的总数。
• 是活菌计数,需氧菌数;
• 不代表实际所有的细菌总数。
2020年10月25日星期
22
日
第二节 食品中大肠菌群的检 验
2020年10月25日星期
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日
一、大肠菌群
1、 什么是大肠菌群? 指一群在37℃能分解乳糖产酸、产气,需氧及兼性
厌氧的革兰氏染色阴性无芽胞杆菌。
2、大肠菌群的组成:
大肠埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属(又叫 产气杆菌属,包括阴沟肠杆菌和产气肠杆菌)、克雷伯 氏菌属的一部分和沙门氏菌属的第III亚属。
2020年10月25日星期
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2、平板菌落计数的选择
(1) 选取菌落数在30~300之间的平板(SN标准要求为25~250个菌落)
➢若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计 数范围内,计算两个平板菌落数的平均值, 再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(m L)样品中菌落总数结果。
➢若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计 数范围内时,按公式(1)计算: