生长谱法测定微生物的营养要求 实验论文模板

实验生长谱法测定微生物的营养要求

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摘要

采用生长谱法研究大肠杆菌对不同碳源的利用状况，结果表明大肠杆菌可以利用糖、糖……。

关键词生长谱法碳源大肠杆菌

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前言

微生物的生长繁殖需要一定的营养物质，如碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因素等，如果缺少其中一种，或不能利用其中的某一种营养物质，便不能生长。据此，把微生物接种在基本培养基上，把待测营养物质点植于基本培养基上，由于营养物可以在琼脂培养基中扩散，若微生物需要此种营养物质，便可生长出菌落。未点植营养物质的其他各处，则不出现菌落。此种测定微生物营养要求的方法称为生长谱法，生长谱法可以定性，定量地测定微生物对各种营养物质的需要，如碳源、氮源、维生素等。在微生物育种营养缺陷型的鉴定中也常用此法。本实验利用无碳源基础培养基检测大肠杆菌对可利用糖的需求。

1、材料与方法

1．1 菌种

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)（本实验室提供）

1．2 基础培养基

（NH

4）

2

SO

4

0.5g，KH

2

PO

4

0.1g，MgSO

4

•7H

2

O 0.05g，琼脂粉2.0g，

蒸馏水100mL，pH（6）自然，105℃灭菌20-25分钟。

糖溶液（所用糖样品为色谱纯）

分别配置：10%葡萄糖 1.0g；10%木糖 1.0g；10%麦芽糖 1.0g；10%蔗糖 1.0g；10%乳糖 1.0g；10%果糖 1.0g。每种碳源用9 mL蒸馏水配制，105℃灭菌20-25分钟。

1．3 试剂：

(NH

4)

2

SO

4

天津市福晨化学试剂厂

KH

2PO

4

天津市福晨化学试剂厂

MgSO

4•7H

2

O［江西华南化工试剂厂·南昌］，琼脂粉［Beijing solarbio science

& Techonology Co.，Ltd］，蒸馏水［实验室］，葡萄糖（Glucose）［天津市福晨化学试剂厂］；木糖［天津市福晨化学试剂厂］；麦芽糖（Maltose）［上海蓝季科技发展有限公司］；蔗糖［中国医药化学采购供应站］；乳糖［天津市福晨化学试剂厂］；果糖（出处：）；无菌1%生理盐水；带玻璃珠无菌水。

1．4 用具：培养皿〔2个〕、1mL移液管〔2支〕、玻璃刮铲〔1支〕、厌氧管〔6支〕、镊子、酒精灯、记号笔、牙签〔2根〕等。

1．5 设备：超净工作台［］，手提式压力蒸汽灭菌锅［上海华线医用核子仪器有限公司］，电子称［豪斯（国际）贸易上海有限公司］

2、方法

2．1 菌悬液的制备：取培养37℃培养24小时的大肠杆菌斜面一支，将3~5mL 无菌水倒入斜面，洗下菌苔，摇床振荡15分钟，制成菌悬液。

2．2 每组取无菌培养皿两套，先用记号笔在平板底面划分六个区，记上欲滴加的各种糖的名称，皿盖注明班级、组别。然后将融化的基础培养基，倾注于无菌培养皿中，每皿约20mL，待凝备用。

2．3 向倒有培养基的培养皿各加入上述菌悬液0.1mL，用无菌玻璃刮铲涂布均匀。

2．4 用镊子将浸泡过各种糖的小圆滤纸片，分别放在平板相应的培养基上，37℃恒温培养箱培养24小时后，观察生长情况。

图1 ××××图

3、结果

2.1 不同碳源利用能力测定

以6种不同糖作为碳源，测定E.coli对其利用情况，以滤纸片周围是否出现生长圈为判断标准。

表1：不同碳源大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的生长状况

碳源类型葡萄糖木糖麦芽糖蔗糖乳糖果糖

菌体生长状况菌落颜

色

培养皿1

培养皿2 pH值

培养皿1

培养皿2 菌落数

量

培养皿1

培养皿2

4、结论：实验失败。

5、失败原因：

两个培养基上一个菌落未长，疑是菌种问题，即接入培养基中的菌悬液中含的活菌数目过少。

7、讨论：

培养基的配制（注意：直接用三角瓶溶解原料试剂，或是留下一定蒸馏水清洗用来溶解烧杯）

糖溶液浓度不一致，经过灭菌后的无菌水因蒸发消耗，且各瓶含量不同，六种糖未按水的比例称量，而是统一称量一克加入，各种糖溶液浓度不同，且有些糖溶液浓度过大，不过糖溶液浓度过大所导致的渗透压过大，仅会使滤纸片附近不长菌或是菌落数较少，而离滤纸片较远处的培养基在有适当碳源且糖溶液经扩散降低浓度后，仍会长菌，并不会导致整个培养基上不长菌。

7、参考文献：

[1] 李剑欣,张绪梅,徐填寿.色氨酸的生理生化作用及其应用[J].氨基酸和生物资源, 2005, 27: 58-62.

①《微生物》周德庆

②《嗜鞣管囊酵母(Pachysolen tannophilus 1622)和重组大肠杆菌

(E．coli(pGM-PA))乙醇发酵特性研究》太阳能学报, Acta Energiae Solaris Sinica, 2008年01期

通过对嗜鞣管囊酵母和重组大肠杆菌代谢木糖及混合糖产乙醇研究,阐明两种菌的不同发酵能力。结果表明:重组大肠杆菌在5%木糖培养基中乙醇产率为理论值的100%,在10%木糖的培养基中乙醇产率达到理论值的96%。重组大肠杆菌木糖转化乙醇的能力明显高于嗜鞣管囊酵母,但嗜鞣管囊酵母与重组大肠杆菌相比乙醇耐受度更高(可达8%).且代谢过程中pH降低幅度不大。固定化技术对于提高P.tannophilus 1622乙醇发酵表现作用显著,而对重组大肠杆菌乙醇发酵的产率提高没有明显作用。

③《发酵过程中微生物利用单糖的差异性》中国生物工程杂志, China

Biotechnology, 2009年09期