饲料中过瘤胃蛋白测定方法

饲料中过瘤胃蛋白测定方法

概述

过瘤胃蛋白是反刍动物瘤胃中产生的一种消化酶，其含量的测定可以预测反刍动物

（如牛、羊等）对粗饲料的消化利用率。目前，常用的测定方法有荧光技术、酶学测定法等。本文将介绍一种酶学测定法。

试剂和仪器

试剂：N-酰胺基酰胺、牛血清蛋白、丙二醇、组氨酸，用0.1M甘氨酸缓冲液调制。

仪器：紫外分光光度计、离心机、恒温水浴器等。

方法与步骤

1. 制备酶提取物

取5g饲料样品，加入50ml 0.1M甘氨酸缓冲液，与离心机进行打浆，离心3000r/min，4℃，15min，取上清将离心液收集到离心管中，标记清楚。

2. 测定过瘤胃蛋白酶活力

取一定体积酶提取液（在2.5-10μL之间），加入1mL含有0.1%牛血清蛋白和0.025M N-酰胺基酰胺的0.05M甘氨酸缓冲液中，室温下反应15min，终止反应。将过瘤胃蛋白酶

水解产物反应一定时间后的产物的光密度与对照组进行对比，测定对照组的光密度，并求

出酶活力U。

3. 计算含量

通过测定过瘤胃蛋白酶的酶活力，利用酶底物比色法，将其光密度与标准曲线进行对比，从而计算得出饲料中过瘤胃蛋白的含量。

注意事项

1. 提取酶液时要加入足够的甘氨酸缓冲液，保证样品的均匀混合。

2. 保持提取液的温度在4℃，避免酶活力发生变化。

3. 在酶提取液的制作过程中，要注意极端温度对酶的影响，应保存在较低温度中。

结论

本文介绍了一种酶学测定法，可以用于测定饲料中过瘤胃蛋白的含量。该方法操作简便，准确性高，能够满足实际应用需求，为农业生产提供技术支持。