鸡胚培养新城疫

实验九新城疫病毒的鸡胚培养 与病毒滴度检测


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扬州大学兽医学院

成大荣

2009年5月4日星期一



一、目的要求


1. 掌握鸡胚接种的常规方法；
2. 学习NDV的分离培养及其鉴定方法。




二、背景知识介绍


1. 病毒的鸡胚培养



①鸡胚是正在发育的活体：
. 组织分化程度低；
. 细胞代谢旺盛；
. 适于许多病毒的生长增殖，
尤其是禽类病毒。







②
鸡胚培养的优点：



. 来源充足；
. 价格低廉；
. 操作简单，无需特殊设备；
. 易感病毒谱较广；
. 对接种的病毒不产生抗体。



③
鸡胚培养的缺点：



. 非SPF鸡胚，可能含有某些家禽
病毒的母源抗体，甚至还可能带
有鸡白痢沙门氏菌、支原体、鸡
白血病病毒、鸡贫血病毒等。




④
鸡胚接种的方法：



. 尿囊腔接种：
. 绒毛尿囊膜接种
. 卵黄囊接种
. 羊膜腔接种
. 静脉接种




④
鸡胚接种的方法：



. 尿囊腔接种
. 绒毛尿囊膜接种：
. 卵黄囊接种
. 羊膜腔接种
. 静脉接种




④
鸡胚接种的方法：



. 尿囊腔接种
. 绒毛尿囊膜接种
. 卵黄囊接种：
. 羊膜腔接种
. 静脉接种




④
鸡胚接种的方法：



. 尿囊腔接种
. 绒毛尿囊膜接种
. 卵黄囊接种
. 羊膜腔接种：
. 静脉接种




④
鸡胚接种的方法：



. 尿囊腔接种
. 绒毛尿囊膜接种
. 卵黄囊接种
. 羊膜腔接种
. 静脉接种：




2. 新城疫病毒



①
副粘病毒科/副粘病毒亚科/禽腮腺炎病毒属。
②
新城疫的病原体。
③
形态：
. 病毒子多呈球形；
. 单股负股RNA；
. 核衣壳螺旋形对称；
. 有囊膜；
. 囊膜表面有纤突。



④
血凝性：可凝集人、鸡、豚鼠和小白鼠的红细胞。
⑤
病毒分离培养：9~11日龄鸡胚尿囊腔接种。




三、实验材料


1. 常规接种工具：注射器、打孔器、酒精灯等；
2. 待接种的新城疫病毒材料；
3. 9~11日龄鸡胚（1个/人）；
4. 灭菌生理盐水；
5. 其他：
. 镊子、照蛋器；
. 酒精棉球、碘酊棉球；
. 固体石蜡；
. 灭菌瓶子、灭菌吸管等。







四、实验内容


1. 照胚：


取9~12日龄发育良好的鸡胚，观察气室及胚胎位置，
标出气室底边，在无大血管处标出尿囊腔注射部位。


以尿囊腔接种为例，介绍新城疫病毒的接种方法：



2. 消毒



. 气室向上放置鸡胚于卵架上；
. 先后用碘酊和酒精棉球消毒蛋壳所标记的位置。



3. 打孔



. 在所标记注射部位用剪刀尖端打孔；
. 注意用力要稳，恰好使蛋壳打通而不伤及壳膜。



距气室底边0.5cm

4. 注入病毒材料



. 用1mL注射器抽取接种物；
. 针头垂直刺入注射部位1-1.2cm即达尿囊腔内；
. 注入待接种的新城疫病毒：接种量为0.1~0.2mL。




5. 封孔



. 用熔好的石蜡或消毒胶布封闭注射孔。



6. 孵育与观察



. 气室朝上于37℃温箱中孵育；
. 以后每天检卵1~2次。
. 弃去24h内的死亡鸡胚：
– 机械损伤、细菌或霉菌污染等引起。







7. 病毒的收获与鸡胚的观察



①
收集24h后死亡鸡胚，置4℃冰箱过夜，以免收获时流血;
②
取出冷却的鸡胚，消毒气室端卵壳表面；
③
用镊子击破气室部卵壳并去除壳膜，撕破绒毛尿囊膜；



④
以眼科镊镊住绒毛尿囊膜，用吸管吸取
尿囊液，置无菌容器中保存备用。


一般能尿囊液6-10mL。

⑤
取出鸡胚胎，于平皿内观察胚胎有无病
理变化，如出血、蜷缩、侏儒胚等。




8. 新城疫病毒滴度的检测



血凝试验（HA）


. 凡能使鸡红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数,称为该病毒的
血凝滴度。




六、思考题


1. 鸡胚接种过程中，应该注意的问题？
2. 接种病毒后，24h内鸡胚死亡原因？
3. 如何判断新城疫病毒的血凝滴度？
4. 临床上还有哪些病毒具有血凝性？