固体培养基的配制及灭菌

实验二固体培养基的配制与灭菌
一、目的要求
1、通过实验的准备工作，掌握培养皿、三角瓶等器皿的洗涤技能；
2、通过固体培养基的配制，掌握配制固体培养基的基本技能；
3、掌握培养基的灭菌方法与分装方法。

二、仪器与用具
1、仪器：各类天平、电炉、高压灭菌锅；
2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、三角瓶、标签、pH试纸、报纸或牛皮纸；
3、试剂：0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，各类培养基母液，琼脂粉，蒸馏水。

三、方法步骤
（一）相关器皿的洗涤
1、将使用完毕的培养器皿中的培养基残渣清除干净（倒入垃圾桶而非下水道中）
2、用洗衣粉或肥皂水浸泡培养器皿后进行清洗
3、用清水冲洗培养器皿3遍
4、用蒸馏水冲洗1-3遍
5、将清洗干净的培养器皿倒扣于铺好报纸的桌面上或试管架上晾干备用。

（二）培养基的配制
1、将培养基母液按照以下次序摆放于试验台上：大量、微量、铁盐、有机、生长调节物质
2、取适量蒸馏水放入容器
3、按需要量依次取母液（若使用移液管，需专管专用，不可混用；若用量筒，已取出的多余母液严禁倒回原试剂瓶中）
4、加入蔗糖（30g/L）溶解
5、加入蒸馏水，使溶液体积比最终体积略少
6、调节PH值（pH=5.8）
7、加入琼脂（6-10g/L）
8、定容至终体积
（三）培养基的分装与灭菌
1、用三角瓶培养
（1）将上述培养基煮开2-3min，使琼脂溶化均匀
（2）趁热将培养基分装入洗净晾干的三角瓶中
（3）扎好瓶口
（4）高压灭菌
（5）将灭菌后的培养基摆放于平面上，待凝固后存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用
2、用培养皿培养
（1）将培养基进行高压灭菌后趁热取出
（2）趁培养基凝固之前，在超净工作台上将灭菌后的培养基分装至无菌培养皿中
（3）将分装好的培养皿平置于超净工作台上，待其凝固，并吹干培养皿盖上的水汽
（4）将凝固吹干后的培养基用干净的保鲜膜包好，存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用。

（四）高压灭菌方法
1、用牛皮纸或报纸等将玻璃器皿和金属器械包扎好
2、在高压灭菌锅内装一定量的蒸馏水，水必须淹没电热丝，严禁干烧
3、把分装好培养基的培养瓶、包扎好的玻璃器皿和金属器械、装有蒸馏水的玻璃瓶等物品放入高压灭菌锅内（注意带盖的密封试剂瓶不要拧太紧，要留有一定的缝隙防止因热胀冷缩而造成的瓶体破裂或变形），盖好高压锅盖，成对拧好锅盖上的螺帽，打开排气阀，开启电源（严禁对易燃易爆易挥发的物品进行高温高压灭菌）
4、当排气阀开始放气时计时3-5分钟，待排出的气体呈持续均匀的白色蒸汽时关闭排气阀（关闭排气阀时注意防止蒸汽烫伤）
5、当高压灭菌锅显示锅内温度达到121℃时开始计时，使温度稳定在121℃以上（锅内压力严禁超过0.165 M Pa），保持15-20min
6、切断电源，让高压灭菌锅自然冷却，必须等压力降到0.05 M Pa以下时打开排气阀（无论何种情况下，严禁在压力超过0.05 M Pa时开排气阀），待压力指针降到零，锅内外压力一致后方可打开锅盖，取出锅内物品（永远记得要先开排气阀，再开高压灭菌锅锅盖）。

四、作业
1、写出实验报告
2、洗涤培养器皿时应注意哪些事项
3、高压灭菌的步骤及安全注意事项
4、使用不同的培养器皿时分装培养基的方法有何不同？。