培养基无菌灌装工艺验证方案

目录

一、目的

二、范围与条件

三、职责与培训

四、验证项目

五、偏差

六、结论与建议

一、目的：

1.1验证目的：

通过培养基无菌生产工艺验证，证实无菌生产工艺过程的可靠性。

二、验证范围和条件：

2.1验证范围：本验证方案适用于冻干粉针生产线（激素）培养基无菌灌装。

2.2验证条件：培养基无菌灌装工艺验证是用与正常的实际生产工艺相同的条件和操作方法，在其他各个系统（诸如公用系统、无菌环境保持系统、设备验证等）验证工作完成的基础上进行的。本方案必须在动力部门相关验证和冻干车间相关验证完成的条件下进行。

2.3 按照《培养基灌装SOP》，在各个系统验证完成后，开始进行培养基灌装工艺验证。

工艺流程图：

2.4执行的标准操作规程：

严格按照冻干车间工艺SOP、设备SOP、卫生SOP、物料SOP、基础SOP执行操作。

三、职责和培训:

3.1 验证小组成员和职责：

3.2 培训内容：

3.2.1 培训目的：为建立并保持良好的质量保证系统，应配备足够数量并具有适当资质的人员完成各项操作，所有人员应明确理解自己的职责，熟悉与之相关的GMP原则，

并接受良好的培训。

3.2.2人员培训：所有负责该验证操作的操作人员。

四、验证项目：

4.1批的选择：

冻干生产线的产品规格为，用7ml的西林瓶灌装2ml的培养基。灌装大豆胰蛋白胨液体培养基（TSB）3批，批号为201406211、201406231、201406251，灌装装量为2ml。为确保冻干机A、B每台不少于40000支，灌装数量为8万支需16.8万ml大豆胰蛋白胨液体培养基，灌装完毕后，先置23-28℃培养7天，再置30-35℃培养7天，每天观察培养基的微生物生长情况。培养基灌装与培养基促生长试验同步进行。

4.2 抑菌作用的避免:

培养基灌装使用促进微生物生长的培养基来挑战评估污染风险，因此抑菌因素应当在培养基灌装中予以考虑。将培养基灌装的注射用水冷却至室温20-25℃配制，并在室温下保存培养基液体。

4.3 合格标准：

灌装数量为80000支。

4.4 控制点：

4.5 培养基选择及检验：

4.5.1 培养基选择：选择适合广谱菌生长的大豆胰蛋白胨液体培养基（TSB）。

4.5.2 培养基检验：需要做培养基适用性检查试验。

培养基适用性试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌的生物特性。

菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐培养基中，30-35℃培养18-24h，接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基上，20-25℃培养24-28h，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于100cfu的菌悬液。接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良琼脂斜面培养基，20-25℃培养5天，加入3-5ml含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数小于100cfu的孢子悬液。

培养基接种：取每管装量8ml大豆胰蛋白胨液体培养基8支，分别接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2支，另按上述方法接种对照培养基，每种菌各2支，同时培养3天，培养温度30-35℃；另取每管装量4ml的大豆胰蛋白胨液体培养基4支，分别接种小于100cfu白色念珠菌、黑曲霉菌各2支，另按上述方法接种对照培养基，每种菌各2支，同时培养5天，培养温度20-25℃，逐日观察并记录。

养基灵敏性试验记录：单位（cfu）

4.6 无菌灌装工艺验证：

4.6.1培养基的配制、过滤：按照生产厂商的配制要求，在调配室以每30g 大豆胰蛋白胨培养基加入1L

注射用水搅拌溶解，并进行记录。在灌装前配制能够满足8万支灌装的培养基。培养基的前处理将5040g 培养基溶于不锈钢小桶中，加入适量冷却后的注射用水（20-25℃），用不锈钢搅拌棒搅拌，将溶解完全的培养基溶液转移至调配罐中，补加注射用水至168000ml ，打开自循环15分钟，从排水口取样200ml 用于过滤前微生物检查。整个调配过程和在稀配罐内存放时间相加不少于6小时。达到时间后，打开药液泵经过两次终端过滤器，过滤至AB 级储药罐内。培养基过滤至储要罐内，直至全部灌装结束，时间控制为18小时。所有在这一阶段进行的操作，包括取样、灌装、装量检查及调整等按实际生产模拟。在运行过程中采用停车、模拟异常情况、换班等进行干扰操作。 4.6.2 干扰因素：

4.6.2.1人为将灌装18小时整理为6个阶段，具体操作如下：

4.6.3灌封期间实时数据监控：

4.6.3.1 对进入B级灌封间的所有人员进行卫生及着装规范评估，评估合格才允许进入灌封间进行操作，进行评估的人员是所有进入灌封间的人员，包括灌封操作人员、

QA人员和保全人员。

进入B级灌封间的操作人员卫生及着装规范评估表

4.6.3.2培养基无菌灌装工艺验证的过程中沉降菌、浮游菌、人员卫生、表面微生物的检测：

在培养基无菌灌装工艺验证的过程中，进行沉降菌、浮游菌、人员卫生、灌装设备表面微生物的检测，与正常生产检测相同。检测结果见报告。

标准：

4.6.3.3灌封环境尘埃粒子监测：按《环境监测SMP》操作。

4.6.3.4 灌封间动态沉降菌检测：按《环境监测SMP》操作。

4.6.3.5 灌封间动态浮游菌检测：按《环境监测SMP》操作。

4.6.3.6 灌装时将配制好的培养基经2级0.22µm终端除菌过滤系统（终端过滤系统验证请详见其验证相关资料）后进行无菌灌装试验。

4.6.3.7全部样品装入冻干机18℃，冻干10小时后进行轧盖。