第五章 减压柱色谱分离技术要点

Semi-Dry Column Chromatography SDC
第一节 真空液相色谱技术 Vacuum Liquid Chromatography
真空液相色谱法，简称VLC，也称减压液相色
谱法。 是近几年来国外实验室迅速发展起来的新技术， 它是利用柱后减压使洗脱剂迅速通过固定相从 而很好的分离样品的色谱技术。 VLC具有快速，简易，高效，价廉等优点，目 前已成功的应用于有机制备以及天然产物如萜 类，类酯，双萜及多种生物样品的分离。
四，VLC流动相选择
与柱层析相同，先用TLC来选择条件。VLC更
适用于梯度洗脱，可用二元，三元混合溶剂系 统。一般先用极性较小溶剂，如石油醚、正己 烷、环己烷，然后逐渐加大极性（ CH2Cl2、 Et2O、AcOEt、CH3OH） 极性溶剂的增加开始要缓慢（1%，2%，3% 等），然后增加的幅度可逐渐增大（5% 10% 20%等），通常收集20～25个流分可将所有成 分洗脱。
10um～40um 硅胶60H或60G）聚酰胺 等 2. 装柱：干法装柱法。 将吸附剂装入漏斗或短柱中，轻轻拍 紧或减压拍打或从顶端挤压，直至吸 附剂紧密，最后变得坚硬。吸附剂的 高度一般不超过5cm。
3，吸附剂用量：
（ 1 ）对于微量分离，样品＜ 100mg, 可采用直径 为 0.5～1cm色谱柱或漏斗，吸附剂高度为 5cm， 一般固定相用量为10～15：1倍，如图4-a,可在 小试管中收集流分。 （ 2 ）对于 0.5 ～ 1.0g 样品，柱中装有 2.5 × 4cm高 度的吸附剂较合适。 （ 3 ）对于 1 ～ 10g 样品的分离，可在柱中装入 5×5cm的吸附剂。 （4）较大样品分离，最好采用250ml砂芯漏斗中 进行。吸附剂的高度为 5cm。（如图 b）可用 三角烧瓶收集之。 加大吸附剂与样品比例，可提高分离度。常 用比例为30：1～300：1
2. VLC法用于多种天然化合物的分离 （1）曾有人用VLC法对姜中辛辣成分的分离 先将冷冻干燥的姜粉用丙酮提取，经过一系列溶剂分 配后，得所需部位。 选用一内径为 3.5cm 的 100ml 的布氏漏斗内装硅胶 60 （40～63μm,Merck公司）9.5g, 高度3cm. 300mg 姜提取物的溶液与硅胶 60 混和，蒸发除去溶剂 后，均匀分布于硅胶柱床表面上，并在样品表面上覆 盖一张与漏斗内径相同的滤纸，缓缓加入 25ml的己烷。 待溶剂透过柱床后，开始减压抽干柱床，得第一流分。 继续用极性增大的溶剂（己烷－乙醚－乙醚－甲醇） 洗脱，每份 25ml，共得20份洗脱液，利用该法可将姜 醇与姜烯酚完全分开。
VLC吸附剂经处理后可反复使用。
二、实验装置与操作
1986年，Coll和Bowden曾介绍过一种
十分简单的用于实验室小规模的减压 液相色谱法装置（图－a,b）。
Pelletier在1986年，介绍可使用于较大规模的分
离的装置（图－2）
1.固定相； 常 采 用 TLC 用 硅 胶 、 Al2O3,（ 粒 度 ：
由于经典的柱层析费时费力，需要大量的固定
相和洗脱液，工作效率低，为此人们相继建立 了离心薄层、 VLC、 FCC等快速层析分离的 方法。其中VLC在天然产物分离中应用最多。 该法 1969 年由澳大利亚 Coll J.C 提出， 1977 年 首次应用于分离澳洲软珊瑚中 2 个新的二萜化 合物(Cembrenoids).
1 9 7 9 年 美 国 Targett.NM 将 该 法 命 名 为
Vacuum liquid chromatography (VLC), 并且详细报道了实验装置和操作方法。
从此以后， VLC 便逐渐为广大化学家所
接受，并且在实验装置上作了进一步改 进。
一、VLC特点
VLC 实 质 上 是 柱 色 谱 ， 它 综 合 了 制 备 薄 层
三、上样
放掉真空后，常压下加入低极性
溶剂于吸附剂表面上，减压使溶 剂均匀流过吸附剂。如有空隙， 需要重装。使柱子抽干后，重复 1～2次，即可准备上样。
A．用低极性溶剂或洗脱剂（如石油醚、 正己烷）溶解样品。常压下小心加入 柱顶端，再加入洗脱剂或溶剂覆盖吸 附剂表面，慢慢减压，使样品在柱顶 端形成样品层。 B．可也采用固体上样法。即先将样 品溶于极性溶剂，加入5～10份吸附 剂，旋转蒸发至干后，加到吸附剂的 表面上，然后进行洗脱。
（Preparative PTLC）和真空抽滤技术。 VLC 不同于常压柱层析和快速柱层析 Fcc，因为后 两者洗脱剂是连续的，在操作中不会间断；而VLC 进行溶剂洗脱时，在加洗脱剂后，在柱后减压下全 部抽出，每一次洗脱收集一次，抽干后，再更换溶 剂，并再进行下一个流分的收集，所以在这一点上 VLC 与 PTLC 多次展开极为相似。（展开一次后吹 干，再展）。 FCC采用柱前加压，而VLC采用柱后加压。 VLC可分离样品量达几十克，而FCC只能分离几克。
六、应用实例
1. VLC 法可用于合成反应混合物的分离．Байду номын сангаас
delphinine(翠雀花碱)于220℃， 0．1 mmHg下
发生裂解反应，生成 Pyrodelphine (焦翠雀 灵)．两者的混台物用甲苯：丙酮＝24：1洗脱， 得到896mg Pyrodelphinines; 甲苯：丙＝19：1 洗脱，得到108 mg Delphinine．分离全程仅仅 花费2小时．
五、洗脱与收集
用适当溶剂系统洗脱或用梯度洗脱
（gradient elution）。 在常压下，加入溶剂后，将柱抽干，收集为 一个流分。真空度要求 20 ～ 70mmHg；抽干 后再更换溶剂和容器，重复以上操作，并用 TLC跟踪每一个流分的分离情况（先摸一摸 再行动）。 为避免每一流分拆卸漏斗，可采用图 B 的方 法，该抽滤甁底部为磨口，减去负压后，更 换接受甁。
第五章
减压柱色谱 分离技术
为加快柱分离的速度和/或增加分离 度，通常采用在柱前加压和柱后减压 的方法进行柱层析与分离。 —柱前加压法通常称为加压柱色谱 —柱后减压法通常称为减压柱色谱
第一节 真空液相色谱技术
Vacuum Liquid Chromatography 第二节 半干柱液相色谱