(定)31菊花的组织培养.pptx

配制母液时，大量元素浓缩___1_0_倍_____ ，微量 元素浓缩___1_0_0_倍____ ，常温保存。激素类、维生素 类以及用量比较小的有机物可以按照__1_m_g__/m__l__的质 量浓度单独配制母液。
用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩 倍数，计算用量。
2.配制培养基。 ①配制培养液 ②调PH ③培养基的分装 在菊花组织培养中，可以不添加___植___物___激___素_____ ， 原因是菊花茎段组织培养__比___较___容___易________ 。
常用的一种培养基为_M__S_培__养__基___
其主要成分包括： _大__量___元素：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S _微__量___元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co __有___机____物_ ：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 _植___物___激___素_ ：生长素、细胞分裂素、赤霉素等
薄壁
(3)再分化：__________继续培养，重新分化成根或
芽等器官的过程。愈伤组织
(4)如何控制细愈胞
（二）影响植物组织培养的因素
1．外植体的选取
△不同植物的组织培养难度 _差___别__很___大__
如烟草和胡萝卜的组织培养较为容易,而枸 杞愈伤组织的芽诱导比较难 △对于同一种植物材料，材料的__年__龄_____、 _保__存__时__间__的__长__短_____等也会影响实验结果。
3.1菊花的组织培养
一、基础知识
(一)、植物组织培养的基本过程 1．理论基础：_细__胞__的__全__能__性_____。 2．细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在 3．_过形__程态__：、_结离__构体__、_的生植理物功组能织上或出细现胞__稳脱__定分__性化__差,_愈_异_伤__组织 再分的化过,程根。、芽→完整植株。
使用顺序
先使用生长素，后使用细胞 分裂素
先使用细胞分裂素，后使用 生长素
同时使用
实验结果 有利于细_胞__分_裂__，但 __细_胞__不_分__化_ 细胞既分裂又分化
___分_化__频_率____提高
使用量
生长素/细胞分裂素比值 高时
生长素/细胞分裂素比值 低时
生长素/细胞分裂素比值 适中时
实验结果 促进_根_分__化__，抑制_芽__形__成____
如菊花的组织培养，一般选择___未__开__花______ 植株茎______上__部__新__萌__生__的__侧__枝______。
思考
在选取菊花茎段的时候，为什么要 选取生长旺盛的嫩枝？
外植体的生理状态是成功进行组织 培养的重要条件之一。生长旺盛的嫩枝 生理状况好，容易诱导脱分化和再分化。
2.培养基的配制
5.无菌环境
在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境。
无菌技术包括对_培__养_基__和___外__植_体______ 的消 毒灭菌
二、实验操作
制备MS固 体培养基
外植体 消毒
栽培
接种 培养 移栽
二、实验操作
（一）制备MS固体培养基
实验室一般使用_4____℃保存的配制好的培养基 母液来制备
1.配制各种母液
（三）接种
接种操作都必须在_酒__精__灯__旁进行。将菊花茎段 插入_培__养_基___时应注意方向，不要倒插。
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在__无__菌__箱____中培养。培养期 间定期进行___消___毒___，温度控制在1__8_～___2__2_℃，并且每天 用日光灯光照____1_2____h。
思考
各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基 的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需 的无机盐；
蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；
甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植 物细胞对特殊营养的需求。
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培 养不同，MS培养基则需提供大量无机营养。
3.灭菌
将分装好的培养基连同其他器械一起 进行___高___压___蒸___汽__灭___菌。
（二）外植体消毒
将菊花嫩枝茎段用流水冲洗后，用无菌吸水纸吸干 外植体表面的水分，先用70%的酒精消毒6～7 s， 再用__无__菌__水__清洗，然后用0.1%的氯化汞溶液消毒
1～2 min，最后再用无菌水至少清洗3次。
（五）移栽和栽培：
移栽前用流水清洗根部的_培__养__基__，将幼苗移植到消过
流水 冲洗
酒精
无菌水
氯化汞
无菌水
浓度__7_0_%__ 摇动_2_～__3_次 时间_6_～__7_s
浓度__0_._1_%_
至少清洗__3_次
时间_1_～__2_min 漂净_消__毒__液__
思考
在外植体消毒过程中，是不是强 度越大越好，为什么？
不是。对外植体进行表面消毒时， 既要考虑到消毒效果，又要考虑到植 物的耐受能力。
促进_芽_分__化__，抑制_根__形__成____
促进__促_进__愈_伤__组__织_生_ 长
4.环境因素 (pH、温度、光照)
不同的植物对各种条件的要求往往_不__同___。 如进行菊花的组织培养，一般将 pH控制在___5_.8__左右； 温度控制在_1_8_～__22__℃___ ； 并且每天用日光灯照射__1_2h__ 。
思考
在植物组织培养的过程中，为什么需要无菌 操作？
植物组织培养所利用的植物材料体积小 、抗性差，对培养条件的要求较高。
用于植物组织培养的培养基同样适合于 某些微生物的生长。
3.植物激素
植物激素中_生__长__素__和__细_胞__分__裂__素__是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性因素。_植__物__激__素__的_浓__度___、 _使_用__的__先__后__顺__序_以及_用__量__的__比__例_等，都会影响实验结果。
植物组织培养的基本过程
离体的植物器官、 组织、细胞
脱分化
愈伤组织
再分化
根、芽
移栽
植物体
阅读32页解决下列问题：
(1)愈伤组织的特点：细胞排列疏松而无规则，是高
度_________的呈无定形状态的_______细胞。
(2)脱（去）分化：由高度分化的植物组织或细胞产
生__液__泡__化___的过程。