亲和层析法原理
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亲和层析法原理
亲和层析法的原理是基于生物分子之间的特异性亲和力进行分离的。
亲和层析的基本原理是利用生物分子间的亲和力,将一个分子固定在不溶性基质上,然后利用分子间的亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
被固定在基质上的分子称为配体,配体和基质是共价结合的,构成亲和层析的固定相,称为亲和吸附剂。
在亲和层析时,首先选择与待分离的生物大分子有亲和力物质作为配体,例如分离酶可以选择其底物类似物或竞争性抑制剂为配体,分离抗体可以选择抗原作为配体等等。
然后将配体共价结合在适当的不溶性基质上,如常用的Sepharose-4B等。
通过适当的洗脱液将其从配体上洗脱下来,就得到了纯化的待分离物质。
由于很多生物大分子之间的这种差异较小,所以这些方法的分辨率往往不高。
亲和层析法的应用范围非常广泛,可以用于分离纯化各种生物大分子,如蛋白质、酶、抗体、激素等等。
由于亲和层析法的分离效果非常好,因此可以获得高纯度、高活性的生物大分子,在生物工程、生物制药等领域具有重要的应用价值。
如需更多信息,建议查阅相关文献或咨询生物学家。