肝功能的检测及临床应用

• 另外，r-GT、ALP、5‘-核苷酸（5’-NT)也是 很敏感的反映胆汁淤积的酶类，它们的升高主 要指示可能出现了胆道阻塞方面的疾病。
• 如果同时测定TBil 、DBil可以鉴别诊断溶血性、 肝细胞性和梗阻性黄疸。
溶血性黄疸 肝细胞性黄疸 阻塞性黄疸 TB<85umol/L TB<200umol/L TB>340umol/L DB/TB<20% DB/TB>35% DB/TB>60%
• 胆红素是红细胞正常或非正常降解后在 内皮系统形成的有机化合物。检测胆红 素常用于诊断肝病、检出溶血性贫血、 评估黄疸的程度。
• 1938 年 Ehirich 介绍重氮方法测定胆红素 以来，已经有许多改进的方法。EvelynMalloy 方法应用甲醇催化游离胆红素参 与重氮偶联反应，在溶液中形成重氮胆 红素。该方法的缺点是样品中的蛋白被 甲醇沉淀，使结果偏低。
• 肝功能是反映肝脏的生理功能，检测肝功能在于探 测肝脏有无疾病、肝脏损害程度以及查明肝病原因、 判断预后和鉴别发生黄疸的病因等 ，以确保及时准确的了 解肝功能情况，保障肝脏的正常运行。 • 肝功能的检测尤为对肝脏疾病，如肝炎，肝硬化等 疾病的判断极为敏感和重要。发生这些病变时，首 先影响肝脏的代谢功能、免疫功能、合成功能等。
总蛋白的检测
• 检测原理：比色法，
试剂R1 氢氧化钠，酒石酸钾钠 R2 氢氧化钠，酒石酸钾钠，碘化钾，硫酸 铜 二价铜离子在碱性溶液中与蛋白的肽键发生 反应形成特征性的紫色双缩脲复合物。酒石酸 钾钠可以防止氢氧化铜沉淀，碘化钾能够阻止 铜的自身还原作用。 蛋白+Cu+ 双缩脲复合物 显色的强度与蛋白的浓度成正比，比色测定。
肝功能的检测及临床应用
农垦总局医院检验科
徐育红
肝脏的生理功能
• 合成与贮存：合成血浆蛋白、脂蛋白、糖原、胆固 醇、胆炎等，贮存糖原，维生素、铁等。 • 分泌胆汁：肝细胞将血红蛋白代谢为可溶性胆红素， 并重新释放入血经肾排出或释放入胆小管内，与胆 盐、胆固醇等组成胆汁，排入十二指肠。 • 解毒作用：将吸收或代谢产生的毒物转变成毒性较 小的或无毒物质，加速排泄，以保护机体。 • 防御作用：肝内富含吞噬细胞，能吞噬和清除血中 的异物，是机体防御系统主要组成部分。 • 造血功能：在胚胎时期的肝脏有造血功能，正常成 人肝一般已不参与造血，但仍具有这种潜在能力， 在某些病理状态下，肝可以恢复一定的造血功能。
肝功能的检测项目
• 一.反映肝细胞损伤的项目，肝脏有近千种酶， 转氨酶有数十种，最常检测的是谷丙转氨酶、 谷草转氨酶、碱性磷酸酶、谷氨酰转肽酶等。 ALT 是肝细胞膜通透性增强的极敏感的指标。 AST 除在肝细胞破坏时增高以外，在心肌病变 如急性心肌梗死、骨骼肌严重损害时也可升高。 ALT 升高可能是肝病本身引起，也可以是非肝 脏疾病所致。 ALT只存在于肝细胞细胞浆中， AST80%存在于肝细胞的线粒体内，20%存在于 肝细胞浆中。AST主要反映肝脏损伤的程度。
• 肝功能检查也有一定局限性，肝功能检查只能作为诊断肝胆系统疾病的 一种辅助手段。在对肝功能试验的结果进行评价时，必须 结合临床
症状全面考虑肝功能，避免片面性及主观性。
肝功能的检测项目
• 反映肝细胞损伤的项目:谷丙转氨酶、谷草转氨酶 • 反映肝脏分泌和排泄功能的项目，包括总胆红素 （ TBil ）、直接胆红素 (DBil) 、总胆汁酸（ TBA) 等 的测定。 • 反映肝脏合成贮备功能的项目，包括前白蛋白 （ PA ）、白蛋白、 r 谷氨酰转肽酶、胆碱酯酶和凝 血酶原时间等。 • 反映肝脏纤维化和肝硬化的项目，包括白蛋白、总 胆红素、单胺氧化酶、血清蛋白电泳等。 • 反映肝脏肿瘤的血清标志物
• 丙氨酸氨基转移酶 (谷丙转氨酶 )属于转氨酶的 一种，可以通过氨基的转移促进氨基酸和 α-酮 酸之间的转化；还可促进逆转过程。尽管其大 部分活性存在于肝脏中，但在肾脏、心脏、骨 骼肌、胰腺、脾脏和肺组织中也可检测出少量 活性。 转氨酶水平升高可提示心肌梗死，肝脏疾病、 肌肉营养失调以及内部器官损伤。由于与AST 相比，ALT是一种更具有肝脏特异性的酶，所 以除了在肝实质疾病中之外很少观察到有血清 ALT活性增高。
• 来源：胆红素是一种四吡咯色素，是各种含血红素蛋白 的分解产物，其中大部分来自于衰老红细胞的血红蛋白 降解占胆红素总量的 70%-80% 。少部分来源于血红蛋白 以外的肌红蛋白、细胞色素 P450 、 过氧化物酶等的血红素 辅基的分解。极小部分来源于造血过程中在骨髓部位破 坏的未成熟的红细胞。 • 生成：红细胞被单核巨噬细胞吞噬后数分钟内即被溶解。 血红素在微粒体氧合酶等作用下，形成胆绿素，再还原 成胆红素。继而在内质网酯化为间接胆红素，整个过程12min 内完成。在循环血中与白蛋白结合转运仅溶于脂溶 剂而不溶于水，具有脂溶性便极易透过细胞膜，这是间 接胆红素最突出的理化特性。 • 毒性：间接胆红素在体内积累过多（白蛋白相对减少时） 会出现严重的毒性。这是由于它的亲脂性而极易透过血 脑屏障，进入脑细胞，将一些神经核团染黄，从而干扰 脑细胞的正常代谢和功能引起胆红素脑病（核黄疸）， 产生极其严重的后果。而结合胆红素即使在血浆中很高， 也不进入脑组织。
• 严重脱水及多发性骨髓瘤等会发生高蛋 白血症。因为某蛋白组分的浓度改变， 影响所有血浆蛋白的相对比例变化。而 总蛋白量却没有变化。常使用 A/G 比值 表示白蛋白和球蛋白分布情况。肝硬化、 肾小球肾炎、急性肝炎、系统性红斑狼 疮以及一些急性和慢性炎症时 A/G 会有 明显变化。总蛋白测定用于肝、肾、骨 髓以及代谢或营养不良疾病的诊断和治 疗。
②胆红素与蛋白结合的复合物运至内质网，在微粒 体的转移酶作用下形成结合胆红素（即直接胆红 素），能溶于水，因此很容易通过胆汁从肠道排泄。 不能透过类脂膜，也不透过血脑屏障和脑细胞膜。 ③肝细胞将结合胆红素通过毛细胆管排入胆汁是一 种耗能的主动分泌作用。
胆红素的肠肝循环
• 直接胆红素随胆汁进入肠腔后，被肠道 细菌作用还原成尿胆原，大部分随粪便 排出，少部分经门静脉回肝，回肝的尿 胆原中大部分被肝细胞摄取再转变为直 接胆红素并再排入肠腔（即胆红素的肠 肝循环),另一小部分从门静脉入体循环， 进入肾脏，随尿排出。
• 1938 年， Jerdrassik 和 Grof 介绍的测定方 法可以得到可靠结果。该方法较 EvelynMalloy 的优点是精密度好，减少了乙醇 使蛋白失活的浊度等。罗氏诊断直接胆 红素测定法基于Jerdrassik-Grof 。
• 检验原理：比色方法，样品中直接胆红素在
EDTA/NaCL 缓冲体系中与重氮磺胺酸偶联， 形成偶氮胆红素。只有结合胆红素和重氮磺胺 酸进行反应。重氮胆红素显色的强度与直接胆 红素浓度呈正比，光电比色测定。
碱性磷酸酶
• ALP 在胆汁诱导下由肝细胞合成分泌，自胆道排泄， 是反映肝功能和骨质发育状况以及骨骼疾病的诊断 和疗效的生化指标。健康人血清 ALP ，小儿主要来 自骨骼，成人来自肝脏系统。 • 肝病时 ALP 升高程度为：胆汁淤积＞肝癌＞肝細胞 损伤 。 • ALP 活性降低可发生于甲减、恶性贫血、锌缺乏、 和先天性低磷酸酶血症、某些药物（安妥明、口服 避孕药）、标本溶血或乳糜、高蛋白饮食。 • 餐后 2h （尤以高脂餐），小肠分泌的 ALP 进入血中， 可使ALP升高1.5—2倍，持续6h。故应空腹12h采血 检测ALP
丙酮酸盐 + NADH + H+ ＝ L-乳酸盐 + NAD+
NADH被氧化为 NAD+ ( 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 ) 。 分光
光度计所检测到的NADH的减少与丙酮酸盐的 形成速度—即ALT的活性值成正比。
百度文库
• EB 病毒和巨细胞病毒都可以引起肝损伤，传 染性单核细胞综合征患者血清ALT大多升高， 部分可有黄疸。 • 在重症肝炎时， ALT 半衰期短（ 2-6d ） , 由于 大量肝细胞坏死，血中ALT逐渐下降，而此时 胆红素却进行性升高，即出现“胆酶分离”现 象，这常常是肝坏死的前兆。但不是较早的指 标，也不是唯一的指标。并非全部重症肝炎都 有此现象，判断预后仍需结合临床，综合多种 因素。 • 在急性肝炎恢复期，如果出现ALT正常而r-GT 持续升高，常常提示肝炎慢性化。患慢性肝炎 时，如果r-GT持续超过正常参考值，提示慢性 肝炎处于活动期。
• 1956 年 Wroblewski 和 LaDue 首 次 描 述 了 血清中ALT活性的动力学检测。 1977 年和 1980 年，国际临床化学联合会 (IFCC) 推荐的 ALT 检测标准程序包括： 最佳底物浓度、TRIS缓冲液的使用、为 避免与 NADH 产生的副作用而进行组合 缓冲液以及血清的预孵化、底物启动和 磷酸吡哆醛活性。2002年IFCC确认了参 考方法并将范围扩展至37℃。
• 血浆蛋白主要在肝脏、血浆细胞、淋巴结、脾脏、 骨髓中合成。疾病时，总蛋白的浓度以及各蛋白组 分的比例都会明显偏离正常范围。 • 由失血、腹泻、肾病综合症、严重烧伤、盐潴留综 合症和恶性营养不良症等都会造成低蛋白血症。 • 血清蛋白检测：可了解肝脏受损害的程度。白蛋白 能结合并溶解各种复合物，如胆红素、钙和长链脂 肪酸。此外，白蛋白能结合有毒的重金属离子和多 种药物，这也是为什么血液中白蛋白浓度降低对药 动学影响很大的原因。许多疾病都会出现白蛋白减 少(由肝病或蛋白质摄取减少引起的免疫力缺乏综合 症；由于组织损伤、或炎症使得分解代谢升高；氨 基酸吸收障碍；肾病综合症引发的蛋白尿；肿瘤性 疾病患者经由粪便的蛋白质流失等)白蛋白判定可监 测控制病人的膳食补充，也是极好的肝功能测试。
γ-谷氨酰转肽酶
• γ- 谷氨酰转肽酶（GGT）具有很重要的生理功能，对 于氨基酸和蛋白质的吸收、分泌和合成都是必需的。 GGT是一种膜结合酶，在细胞膜处含量最高，提示与 分泌、吸收、合成等作用有关。在肝脏中分布在肝细 胞的微粒体、细胆管、毛细血管等处，经胆道排出。 胚胎时GGT在肝脏中合成最高，出生后肾脏活性最高， 肝脏只有肾脏的 1/10 ，但肝癌和胎肝组织有高度组织 特异性，如果肝脏合成量增加，出现“返祖现象”， 血清GGT明显升高时，应考虑肝脏可能有恶性疾病发 生。 • GGT主要用途限于 ALP升高患者，除外骨病，骨病时 GGT不升高。
肝功能的检测项目
• 二 . 反映肝脏分泌和排泄功能的项目，包括总 胆红素（ TBil ）、直接胆红素 (DBil) 、总胆汁 酸（TBA)等的测定。 当患有病毒性肝炎、药物或酒精引起的中毒性 肝炎、溶血性黄疸、恶性贫血、阵发性血红蛋 白尿症及新生儿黄疸、内出血等时，都可出现 总胆红素升高。 直接胆红素是指经过肝脏处理后，总胆红素中 与葡萄糖醛酸基结合的部分。直接胆红素升高 说明肝细胞处理胆红素后的排出发生障碍，即 发生胆道梗阻。
• 代谢过程包括肝细胞对血液内胆红素的摄取、结合 胆红素的形成、结合胆红素从肝细胞排泄入胆道。 其中某一过程障碍就会出现黄疸。
①与白蛋白结合的胆红素在一种阴离子转运体协助 下，通过磷脂层的翻转机制，将胆红素从白蛋白结 合中释出，快速进入肝细胞内，与一种碱性蛋白 （Y蛋白）结合后，就不能返回越出细胞膜。
肝功能的检测项目
• 三 . 反映肝脏合成贮备功能的项目，包括前白 蛋白（ PA ）、白蛋白、胆碱酯酶和凝血酶原 时间等。它们是通过检测肝脏合成功能来反映 其贮备能力的常规试验。前白蛋白、白蛋白下 降，提示肝脏合成蛋白质的能力减弱。当患各 种肝病时，病情愈重，血清胆碱酯酶活性愈低。 如果胆碱酯酶活性持续降低且无回升迹象，多 提示预后不良。
• 罗氏试剂
R1：TRIS缓冲液(三羟甲基-氨基甲烷)PH7.3 ; L丙氨酸 ; NADH ; LDH ; 防腐剂 。 R2：α-酮戊二酸盐 ；防腐剂 。 检测原理:通过标准方法进行紫外线下检测
α-酮戊二酸盐 + L-丙氨酸 ＝ L-丙氨酸盐+丙酮酸盐
ALT 可促进反应达到平衡。可通过受 LDH 催化的指示剂反应来检测丙酮酸盐的增加。