遗传学实验ppt..

（三）果蝇整体装片的制作
１、制片：取轻度麻醉的雌雄果蝇各一只放在 载玻片上，待果蝇将醒能动时，滴一滴树胶 在果蝇上，盖上盖玻片，让盖片自然沉降， 要防止气泡产生。滴树胶的量以浸没果蝇， 盖上盖片不外漏为度。
２、观察：果蝇的背部横纹、雄果蝇的性梳。
（四）作业
制作一张良好的装片，要求能够看到果蝇的背 部横纹及性梳。
遗传学实验
1.果蝇的培养、形态观察及整体装片的制作 2.果蝇的伴性遗传 3.果蝇巨染色体的制片和观察 4.从口腔脱落细胞中提取人类基因组DNA 5.PCR法鉴定人SRY基因 6.学生自主创新性实验——微核检测技术 7.荧光定量PCR检测烟草刺激后人肺细胞 ERCC4基因和GAPDH基因的表达变化 8.人类ACE基因多态检测及其与耐力运动能 力的关联分析
X2检验（ F2）
实验三 果蝇巨染色体的制片与观察
一 实验目的
1、练习果蝇幼虫的解剖技术及果蝇唾 腺染色体的制片方法
2、观察果蝇的唾腺染色体
二 实验原理
唾腺染色体是一类存在于双翅目昆虫幼虫 唾液腺内的巨大染色体，由于染色体DNA经过 多次复制，但并未发生细胞核分裂，重复复制 后的染色线聚集在一起，因此比一般的染色体 大得多。同时，唾腺细胞中的同源染色体总是 处于配对状态，因此在果蝇唾腺细胞只能看到 体细胞染色体数目的一半。
2、第二周，倒去杂交亲本果蝇。
3、第三周，观察F1眼睛颜色。将F1全部倒 出，轻度麻醉，观察F1成蝇，记载正反交 结果 。观察后，将F1果蝇全部移入一新培 养瓶（这里不需用处女蝇）置25℃温箱中 培养。
4、第四周，倒去F1亲本。 5、第五周，观察F2成蝇眼睛颜色。被统计
过的果蝇处理掉。
四、实验记录及结果分析
4.观察
将制片置低倍镜下找到分散好的标本，移至 视野中心，然后转到高倍镜下观察。对染色体 分散、个体性清楚的片子，应仔细观察染色体 的横纹数量、形状和排列顺序，以便对照模式 照片辨认出不同的染色体臂。
一般在一个唾腺细胞中能看到5条长臂的染色体，分 别为X染色体、第二对染色体的左臂（L）、右臂 （R）、第三对染色体的左臂（L）、右臂（R）， 这5条染色体臂由染色中心发射出来。这是由于第 四对染色体相当小看不清，Y染色体浓缩，X染色体 的着丝点位于端部只有一条臂之故。
生物大分子。 3.最后用无水乙醇沉淀DNA，
实验二 果蝇的伴性遗传实验
一、实验目的
❖ 了解伴性遗传和非伴性遗传的区别，了解伴 性遗传基因在正、反杂交中的差异。
❖ 掌握基本的遗传结果记录及统计处理方法。
二、实验原理
三、实验步骤
1、杂交组合亲本设计
正交：红眼雌蝇(处女蝇)×白眼雄蝇
反交：白眼雌蝇(处女蝇)×红眼雄蝇
反交方法： (a)把红眼果蝇倒出麻醉，仔细挑出４只雄蝇，移到 上述杂交瓶中，贴好标签。 (b) 把白眼雌蝇（处女蝇）倒出麻醉，挑４只移到杂 交瓶中。 (c)等杂交亲本在杂交瓶中全部苏醒后，将杂交瓶移 入25℃温箱中培养。
研究证明，多线染色体的带纹与某些特定 的基因相联系，由于多线染色体上的带纹清晰 可数，因此巨染色体是遗传学上研究染色体形 态结构和染色体畸变的好材料。
三 实验步骤
1、取材(三龄幼虫，5mm)
取一张载玻片放在双筒解剖镜下，滴一滴生理盐水， 将幼虫放在生理盐水内。两手各握一枚解剖针，一 枚钉住幼虫末端的1/3处固定幼虫，另一枚解剖针钉 住幼虫头部，前拉，把头部自身体拉开，可看到唾 腺，剔除唾腺周围的脂肪及其它物质。
四 作业
❖ 制作果蝇巨染色体装片 ❖ 画出你所观察到的果蝇巨染色体，并加
以标注与描述。
实验四 从口腔脱落细胞中提取 人类基因组DNA
实验目的
1、了解从细胞中提取DNA的基本原理
2、学习从口腔脱落细胞中提取高分子量DNA 的基本操作步骤和会影响提取效果的注意事 项。
实验原理
破坏细胞的细胞膜，释放出 DNA。
3、果蝇的转接 被麻醉果蝇移入饲养瓶中，将瓶横卧置放， 否则未醒果蝇粘着于饲料会溺死。待果蝇苏 醒后再将瓶直立，贴上标签，放入培养箱。
３、处女果蝇的选取
雌果蝇受精囊内可贮存大量的精子，因此 在做品系间杂交时，母本必须选用处女蝇。 雌蝇孵出12小时后才会交配（8小时更为可 靠），所以将老果蝇清除后，12小时内所 收集到的雌蝇就是处女蝇。
注意安全！
❖ 1.穿实验服。 ❖ 2.各项操作务必规范，小心谨慎。对有
毒有害物质进行操作时，要做好防护。 ❖ 3.避免在实验室吃喝食物。 ❖ 4.遵守实验室其他安全守则。
实验报告格式
❖ 实验名称 实验人员姓名 学号 实验时间 ❖ 一、实验目的 ❖ 二、实验原理 ❖ 三、实验步骤 ❖ 四、实验结果
DNA提取的方法：
1. 用 蛋 白 酶 K （ 使 膜 上 蛋 白 变 性 分 解 ） 和 去 污 剂 SDS
➢ 浓盐法 ➢ 阴离子去污剂法 ➢ 苯酚抽提法
（破坏细胞膜的脂质结构） 共同消化细胞。
2.然后酚、氯仿等有机溶剂 进行抽提，进行DNA的纯化，
➢ 水抽提法
去掉蛋白质、RNA、多糖等
➢
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
金属螯合树脂抽提法
2、固定染色
吸去生理盐水，滴数滴盐酸，水解５分钟， 使组织疏松，以便压片时细胞分散，染色体 散开。
吸去盐酸，加1滴蒸馏水轻轻冲洗后吸干， 滴1~2滴醋酸洋红染液，固定染色10~20分 钟。
3.制片
染色完成后，盖上盖玻片压片，然后用吸水 纸包被玻片，吸干多余染色液，并用手指轻压 盖玻片，再用铅笔的橡皮头或解剖针柄垂直轻 敲，或进一步用拇指在盖玻片上适当用力压片， 注意勿使盖玻片移动。
实验一
果蝇的培养、形态观察及整体装片 的制作
（一）果蝇的生活史
昆虫纲，双翅目。25℃下，~12天完成一个周 期 ：卵→幼虫→蛹→成虫。成体果蝇可活 几周。
卵 幼虫
蛹 成虫
雌雄果蝇的主要 形态特征
（二）果蝇的培养及杂交
1、果蝇培养时常用的培养基
2、果蝇的麻醉 首先，将培养瓶棉塞上的果蝇驱到瓶底，打开 培养瓶与麻醉瓶的瓶塞，迅速使两瓶口对接， 将培养瓶中部分果蝇驱入麻醉瓶中，迅速塞上 棉塞，防止果蝇的种群污染，拔开麻醉瓶棉塞， 以其侧面遮盖麻醉瓶口，再棉塞中央滴几滴乙 醚，塞上棉塞，等果蝇麻醉。（果蝇翅膀外层 45度角表死亡）