食品中9种抗氧化剂的测定 标准文本(食品安全国家标准)

食品安全国家标准
食品中9种抗氧化剂的测定
1范围
本标准规定了食品中9种抗氧化剂的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于菜籽油、肉脯、糕点类固体食品中没食子酸丙酯（PG）、2,4,5-三羟基苯丁酮（THBP）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、去甲二氢愈创木酸（NDGA）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）、2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚（Ionox-100）、没食子酸辛酯（OG）、2,6-二叔丁基对甲基苯酚（BHT）、没食子酸十二酯（DG）等9种抗氧化剂的测定。

2原理
油脂样品用乙酸乙酯和环己烷溶解并提取其中的抗氧化剂，提取液经GPC净化后收集流出液用高效液相色谱仪测定，外标法定量。

固体类食品样品用乙腈饱和的正己烷溶解并提取其中的抗氧化剂，提取液净化浓缩后用乙腈定容，高效液相色谱法测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。

3试剂和材料
注：除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂
3.1.1 甲酸。

3.1.2乙腈。

3.1.3 甲醇。

3.1.4正己烷。

3.1.5 乙酸乙酯。

3.1.6环己烷。

3.1.7 氯化钠：分析纯。

3.2 试剂配制
3.2.1 乙腈饱和的正己烷：正己烷中加入乙腈直至分层。

3.2.2正己烷饱和的乙腈：乙腈中加入正己烷直至分层。

3.2.3乙酸乙酯和环己烷混合溶液：体积比1:1的乙酸乙酯与环己烷混合。

3.2.4乙腈和甲醇混合溶液：体积比2:1的乙腈和甲醇混合。

3.3 标准品
3.3.1 叔丁基对羟基茴香醚
3.3.2 2,6-二叔丁基对甲基苯酚
3.3.3 没食子酸辛酯
3.3.4 没食子酸十二酯
3.3.5 没食子酸丙酯
3.3.6 去甲二氢愈创木酸
3.3.7 2,4,5-三羟基苯丁酮
3.3.8 叔丁基对苯二酚
3.3.9 2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚
注：英文名字、分子式和CAS登记号参见附录A。

3.4 标准溶液配制
3.4.1抗氧化剂混合标准储备液：分别准确称取0.1 g（精确至0.001 g）抗氧化剂，用乙腈溶于100 mL棕色容量瓶中，定容至刻度，配置成浓度为1000 mg/kg的混合标准储备液，0℃～4℃保存。

3.4.2抗氧化剂混合标准使用液：移取适量体积的浓度为1000 mg/kg的抗氧化剂混合标准储备液分别稀释至浓度为20 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg,200 mg/kg,400 mg/kg的混合标准使用液。

4仪器和设备
4.1 离心机（可达到3000 r/min）。

4.2 旋转蒸发仪。

4.3 高效液相色谱仪。

4.4 凝胶渗透色谱仪。

4.5C18固相萃取柱：2000 mg/12 mL。

4.6分析天平：感度0.01 g和0. 1 mg。

4.7有机系滤膜：0.22 μm。

5 分析步骤
5.1 试样制备
5.1.1 肉类（肉脯、肉干及腌熏肉类大块状食品）
取样品10 g（精确至0.01 g），用绞肉机粉碎混匀，分装入洁净的容器内。

5.1.2糕点、面包类（酥、糕类粉末状或易于粉碎的食品）
取样品10 g（精确至0.01 g），装入洁净的容器内，振散成粉末状，摇匀。

5.1.3方便米面类、油炸面类、饼干、膨化食品脆性的食品）
取样10 g（精确至0.01 g），粉碎样品成粉末状，装入洁净容器内。

5.2 测定步骤
5.2.1 提取
a）固体类食品：称取1 g（精确至0.01 g）试样于50 mL塑料离心管中，加入5 mL乙腈饱和的正己烷溶解样品，涡旋1 min充分混匀，浸泡10 min。

加入5 mL饱和氯化钠溶液，用5 mL 正己烷饱和的乙腈提取3次，每次涡旋2 min，3000 r/min离心5 min，收集乙腈层，合并3次乙腈层提取液于干净试管中，调节pH = 5（磷酸氢二钠溶液与磷酸二氢钾溶液调节），待净化。

b ） 油类：取样品10 g （精确至0.01 g ），加入100 mL 容量瓶中，以乙酸乙酯和环己烷的混合溶液（体积比1:1）定容至刻度，作为母液；取5 mL 母液加入10 mL 容量瓶中以乙酸乙酯和环己烷的混合溶液（体积比1:1）定容至刻度，待净化。

5.2.2 净化
a ） 固体类食品样品：取C 18固相萃取柱上端装入约2 g 的无水硫酸钠，用 5 mL 甲醇活化萃取柱，再以5 mL 乙腈平衡萃取柱，弃去流出液。

将所有提取液（5.2.1（a ））倾入柱中，以5mL 乙腈-甲醇（2:1体积比）溶液洗脱，抽干萃取柱，收集洗脱液于鸡心瓶中，40℃下旋转蒸发至干，以乙腈定容后，过0.22 μm 有机系滤膜，待测。

b ） 油类样品：取待测液（5.2.1（b ））10 mL 加入GPC 进样管中，过GPC 净化，收集7 min ～17.5 min 的流出液于鸡心瓶中，过0.22 μm 有机系滤膜，待测。

5.2 仪器参考条件
5.2.1 液相色谱条件
a) 色谱柱：Agilent C 18柱 [4.6 mm (i.d.) × 250 mm ，5 µm (粒径)]；
b) 流动相A ：0.5％甲酸水溶液，流动相B ：甲醇
c) 柱温：35 ℃；
d) 进样量：5 μL ；
e) 检测器为DAD ；
f) 检测波长为280 nm ；
5.3 标准曲线的制作
将标准系列工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的响应值，以标准工作液的浓度为横坐标，以响应值（如：峰面积、峰高、吸收值等）为纵坐标，绘制标准曲线。

9种抗氧化剂液相色谱图参见附录B 。

5.4 试样溶液的测定
将试样溶液注入高效液相色谱仪中，得到相应色谱峰响应值，根据标准曲线得到待测液中抗氧化剂的浓度，平行测定次数不少于两次。

6 分析结果的表述
试样中抗氧化剂含量按式（1）计算：
m A V c A X S ⨯⨯⨯=
…………………………………（1） 式中：
X ——试样中抗氧化剂含量，单位为毫克每千克（mg/kg)；
A ——样液中抗氧化剂的峰面积；
A S ——标准工作溶液中抗氧化剂的峰面积；
c ——标准工作溶液中抗氧化剂的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL )；
V ——样液最终定容体积，单位为毫升（mL ）； m ——称取的试样质量，单位为克（g ）。

计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

7 精密度
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%（或者以其他技术指标表示）。

8 检出限与定量限
本标准的检出限为没食子酸丙酯（PG）：2 mg/kg，2,4,5-三羟基苯丁酮（THBP）：4 mg/kg，叔丁基对苯二酚（TBHQ）：10 mg/kg，去甲二氢愈创木酸（NDGA）：4 mg/kg，叔丁基对羟基茴香醚（BHA）：10 mg/kg，2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚（Ionox-100）：20 mg/kg，没食子酸辛酯（OG）：2 mg/kg，2,6-二叔丁基对甲基苯酚（BHT）：4 mg/kg，没食子酸十二酯（DG）：10 mg/kg；定量限均为20 mg/kg。