分光光度法测细菌浓度11月18日

用分光光度法粗测金黄色葡萄球菌菌悬液的浓度

实验目的：

通过对同一菌液同时测吸光度值与平板菌落计数，将两个结果做标准曲线。标准曲线做出后，通过测吸光度值间接反应菌悬液的浓度，用于指导菌悬液的制备。

实验设备：U-2900 型分光光度计

波长为600nm

比色皿厚度：cm

实验材料：空白对照液：0.9%无菌氯化钠溶液

稀释液：0.9%无菌氯化钠溶液

营养肉汤培养基

实验菌种：金黄色葡萄球菌（新鲜培养物）

实验步骤：

1.将金黄色葡萄球菌的新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，在30～35℃恒温培养箱中培养18～24h。

2. 在无菌阳性室按无菌操作将培养后的金黄色葡萄球菌用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成不同浓度的菌悬液。具体为分别吸取营养肉汤培养液0.1ml,0.2ml,0.3ml,0.4ml,0.5ml，0.6ml，0.7ml到10ml 0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释成7种不同浓度的原始菌悬液。序号分别为1-7号。

2.1平板菌落计数法测活菌浓度

取14个营养琼脂培养基平板，分别从每个原始菌液中，取0.2m l的菌悬液，用平板涂布法，涂于平板中，标明序号，每个稀释度涂2块平板. 37℃培养箱培养72 h后，可见菌落形成，选取菌落数在3 0~300间的平板进行计数，每组稀释度相同的平板取平均值作为菌落数. 计算出原菌液细菌浓度，作为细菌菌液的标准浓度。

2.2分光光度法测菌悬液吸收值

同时将以上5种原始菌液在波长为600nm下测定吸光度。用0.9%无菌氯化钠溶液作为空白对照，记录各原始菌液的吸光度值。

表一：平板菌落计数与吸光度值对比记录

3 结果计算

对同一菌液同时测吸光度值与进行平板菌落计数，将平板菌落计数所得菌液浓度作为细菌标准浓度c. 根据所测出A值以及相对应的标准浓度c值，作出标准曲线。